❶ fmoc 法化学合成大约多少钱
肽涉及物体内各种细胞功能物性物质结构介于氨基酸蛋白质间类化合物,由种氨基酸按照定排列顺序通肽键结合现已发现离百种存于体肽于肽研究利用现空前繁荣景象
肽全合仅具重要理论意义且具重要应用价值通肽全合验证新肽结构;设计新肽用于研究结构与功能关系;肽物合反应机制提供重要信息;建立模型酶及合新肽药物等
肽化合技术论液相固相都已熟近几十固相合肽更其省、省力、省料、便于计算机控制、便于普及推广突优势肽合规并扩展核苷酸合等其机物领域本文概述固相合基本原理、实验程其现状进行析并展望今发展趋势
1.固相合基本原理
肽合重复添加氨基酸程合般C端(羧基端)向N端(氨基端)合肽合溶液进行自1963Merrifield发展功固相肽合经断改进完善今固相已肽蛋白质合用技术表现经典液相合比拟优点其基本原理:先所要合肽链羟末端氨基酸羟基共价键结构同溶性高树脂相连结合固相载体氨基酸作氨基组份经脱氨基保护基并同量化羧基组反应接肽链重复(缩合→洗涤→保护→洗涤→轮缩合)操作达所要合肽链度肽链树脂裂解经纯化等处理即所要肽其α-氨基用BOC(叔丁氧羰基)保护称BOC固相合α-氨基用FMOC(9-芴甲氧羰基)保护称FMOC固相合
2. 固相合具体试验程
2.1树脂选择及氨基酸固定
固相合与其技术主要特征固相载体能用于肽合固相载体必须满足要求:必须包含反应位点(或反应基团)使肽链连些位点并除;必须合程物理化条件稳定;载体必须允许断增肽链试剂间快速、受阻碍接触;另外载体必须允许提供足够连接点使每单位体积载体给用产量肽并且必须尽量减少载体束缚肽链间相互作用用于固相合肽高载体主要三类:聚苯乙烯-苯二乙烯交联树脂、聚丙烯酰胺、聚乙烯-乙二醇类树脂及衍物些树脂导入反应基团才能直接连(第)氨基酸根据所导入反应基团同些树脂及树脂衍物氯甲基树脂、羧基树脂、氨基树脂或酰肼型树脂BOC合通选择氯甲基树脂Merrifield树脂;FMOC合通选择羧基树脂王氏树脂 氨基酸固定主要通保护氨基酸羧基同树脂反应基团间形共价键实现形共价键种:氯甲基树脂通先制保护氨基酸四甲铵盐或钠盐、钾盐、铯盐适温度直接同树脂反应或合适机溶剂二氧六环、DMF或DMSO反应;羧基树脂则通加入适缩合剂DCC或羧基二咪唑使保护氨基酸与树脂形共酯完氨基酸固定;氨基树脂或酰肼型树脂却加入适缩合剂DCC通保护氨基酸与树脂间形酰胺键完氨基酸固定
2.2氨基、羧基、侧链保护及脱除
要功合具特定氨基酸顺序肽需要暂参与形酰胺键氨基羧基加保护同氨基酸侧链性基要保护反应完再保护基除同液相合固相合采用烷氧羰基类型作α氨基保护基易发消旋早用苄氧羰基由于需要较强酸解条件才能脱除所改叔丁氧羰基(BOC)保护用TFA(三氟乙酸)脱保护适用含色氨酸等酸稳定肽类合1978chang MeienloferAtherton等采用Carpino报道Fmoc(9-芴甲氧羰基)作α氨基保护基Fmoc基酸稳定能用哌啶-CH2CL2或哌啶-DMF脱近Fmoc合广泛应用 羧基通用形酯基进行保护甲酯乙酯逐步合保护羧基用通皂化除或转变肼便用于片断组合;叔丁酯酸性条件除;苄酯用催化氢化除 于合含半胱氨酸、组氨酸、精氨酸等带侧链功能基氨基酸肽说避免由于侧链功能团所带副反应般需要用适保护基侧链基团暂保护起保护基选择既要保证侧链基团参与形酰胺反应要保证肽合程受破坏同要保证肽链裂解能除用三苯甲基保护半胱氨酸S-用酸或银盐、汞盐除;组氨酸咪唑环用2,2,2-三氟-1-苄氧羰基2,2,2-三氟-1-叔丁氧羰基乙基保护通催化氢化或冷三氟乙酸脱精氨酸用金刚烷氧羰基(Adoc)保护用冷三氟乙酸脱
2.3肽反应
固相接肽反应原理与液相基本致两相应氨基保护及羧基保护氨基酸放溶液内并形肽键要形酰胺键经用手段羧基化变混合酸酐、泼酯、酰氯或用强失剂(碳二亚氨)形称酸酐等形酰胺键其选用DCC、HOBT或HOBT/DCC称酸酐、化酯接肽应用广
2.4 裂解及合肽链纯化 BOC用TFA+HF裂解脱侧链保护基FMOC直接用TFA根据条件同其碱、光解、氟离氢解等脱保护采用合肽链进步精制、离与纯化通采用高效液相色谱、亲层析、毛细管电泳等
3.固相合特点及存主要问题
固相合于肽合显著优点:简化并加速步骤合;反应简单反应器皿便进行避免手工操作物料重复转移产损失;固相载体共价相联肽链处于适宜物理状态通快速抽滤、洗涤未完间纯化避免液相肽合冗重结晶或柱步骤避免间体离纯化量损失;使用量反应物迫使别反应完全便终产物高产率;增加溶剂化减少间产物聚焦;固相载体肽链轻度交联聚合链紧密相混彼产种相互溶剂效应肽自聚集热力利反应适宜 固相合主要存问题固相载体间体杂肽离造终产物纯度液相合物必需通靠离手段纯化
4.固相合研究发展前景
固相肽合已经40历史现能合些较短肽链更谈随所欲合蛋白质同合试剂毒性昂贵费用副产物等直都令痛问题物体内核糖体合肽链速度产率都惊否能物体合蛋白质原理些启发应用固相肽合(树脂)令兴趣问题许今肽合发展
建议查下资料
感觉问题主意不是很清晰