Ⅰ 为什么多肽合成中树脂选择的原则
多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程,固相合成顺序一般从C端(羧基端)向N端(氨基端)合成.过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法,现在多采用固相合成法,从而大大的减轻了每步产品纯化的难度.为了防止副反应的发生,参加反应的氨基酸的侧链都是被保护的;而羧基端是游离的,并且在反应之前必须活化.化学合成方法有两种,即Fmoc和tBoc.由于Fmoc比tBoc存在很多优势,现在大多采用Fmoc法合成每个循环由以下三步反应构成,反复循环直到肽链延伸至所需长度时即可完成.1.脱保护:Fmoc保护的氨基酸必须用一种碱性溶剂(piperidine)去除氨基的保护基团.2.活化:待连接的氨基酸的羧基被活化剂所活化.3.偶联:活化的羧基与前一个氨基酸裸露的氨基反应,形成肽键.在此步骤使用过量的试剂促使反应完成.目前国内在做合成仪器的厂家不多,其实我熟知资料的是PSI:美国多肽科技公司(PeptideScientificInc.),简称PSI,是专业生产多肽合成仪的厂商.PSI多肽合成仪分为多通道型、科研型、研发中试兼容型、中试生产兼容型、迷你生产型、生产型等六大规格.
Ⅱ 什么是树脂取代度不同替代度对于多肽合成时氨基酸连接的影响该怎么选择谢谢!
通常树脂的参数有取代度(Loading),以及目数,以及规格如1%DVB.
取代度(Loading):单位是mmol/g 即每克树脂专有多少mmol的官能属团.
目数:颗粒大小 常用的是100-200Mesh 数值越大颗粒越细.
1%DVB: 交联剂二乙烯基苯在苯乙烯和二乙烯基苯共聚物的比重.
Ⅲ 多肽固相合成法的诞生
多肽合成研究已经走过了一百多年的光辉历程。1902年,Emil Fischer首先开始关注多肽合成,由于当时在多肽合成方面的知识太少,进展也相当缓慢,直到1932年,Max Bergmann等人开始使用苄氧羰基(Z)来保护α-氨基,多肽合成才开始有了一定的发展。
到了20世纪50年代,有机化学家们合成了大量的生物活性多肽,包括催产素,胰岛素等,同时在多肽合成方法以及氨基酸保护基上面也取得了不少成绩,这为后来的固相合成方法的出现提供了实验和理论基础。
1963年,Merrifield首次提出了固相多肽合成方法(SPPS),这个在多肽化学上具有里程碑意义的合成方法,一出现就由于其合成方便,迅速,成为多肽合成的首选方法,而且带来了多肽有机合成上的一次革命,并成为了一支独立的学科——固相有机合成(SPOS)。因此,Merrifield荣获了1984年的诺贝尔化学奖。Merrifield经过了反复的筛选,最终摒弃了苄氧羰基(Z)在固相上的使用,首先将叔丁氧羰基(BOC)用于保护α-氨基并在固相多肽合成上使用,同时,Merrifield在60年代末发明了第一台多肽合成仪,并首次合成生物蛋白酶,核糖核酸酶(124个氨基酸)。
1972年,Lou Carpino首先将9-芴甲氧羰基(FMOC)用于保护α-氨基,其在碱性条件下可以迅速脱除,10min就可以反应完全,而且由于其反应条件温和,迅速得到广泛使用,以BOC和FMOC这两种方法为基础的各种肽自动合成仪也相继出现和发展,并仍在不断得到改造和完善。同时,固相合成树脂,多肽缩合试剂以及氨基酸保护基,包括合成环肽的氨基酸正交保护上也取得了丰硕的成果。
Ⅳ 多肽合成的介绍
多肽合成是一个来固相合成源顺序一般从C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来,经过不断的改进和完善,到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术,表现出了经典液相合成法无法比拟的优点,从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。多肽合成总的来说分成两种:固相合成和液相多肽合成。
Ⅳ 固相合成是指什么
做多肽的化学合成的时候,固相合成法是一种将肽链一端结合于固相载体上的方法,通过在N-末端逐步加上氨基酸的方法合成肽段。。。
想想看。。。还是把书搬出来抄一遍给你看:
在固相合成中,肽链的延长是在不溶性的聚苯乙烯树脂载体上进行的。合成多肽的C-末端先和氯甲基聚苯乙烯树脂(氯化苄酯树脂)反应形成苄酯,然后按肽链一级结构的顺序将氨基端已被保护的氨基酸逐个加上去,使肽链延长。
固相法比液相法简单,时间缩短,可以自动化。在我国医药工业上已经得到应用。
Ⅵ 多肽合成中怎么处理树脂
多肽合成涉及的树脂主要有Wang树脂,2cl树脂,以及AM树脂。具体关于多肽合成的一下问题内你可以到容这个博客了看看。http://url。cn/YtIpCL?q=kaghdag
Ⅶ 多肽合成的基本原理
现如今多肽合成的办法首要有两种:即 Fmoc 和 t Boc 。因为 Fmoc 比 tBoc 具有更多的优势,所以让大家比较认可的是 Fmoc 法。而多肽合成是一个重复添加氨基酸的进程,合成方向是从 C 端(羧基端)向 N 端(氨基端)进行;从前多肽合成大多是在液相中进行,而如今大多选用固相合成,然后大大的降低了每步商品提纯的难度;为了防止副反响的发作,合成柱和添加的氨基酸的侧链都是预先被维护的,只要羧基端是游离的,并且在反响之前有必要先用化学试剂活化它。
多肽合成基本原理示意图
具体合成过程如下:
1、去维护:Fmoc 维护的柱子和单体有必要用一种碱性溶剂( piperidine )去除氨基的维护基团。
2、激活和交联:下一个氨基酸的羧基被一种激活剂所激活溶解,激活的单体与游离的氨基在交联剂的作用下交联,构成肽键。
3 、循环:这两步反响重复循环直到整条肽链合成结束。
4 、洗脱和脱维护:依据肽链所含的残基不一样,用不一样的脱树脂溶剂从柱上洗脱下来,其维护基团被一种脱维护剂( TFA )洗脱和脱维护。
多肽是复杂的大分子,因而每条序列在物理和化学特性上都是共同的,有些多肽合成很艰难 ,另有些多肽虽然合成相对简单,但纯化艰难;最常见的疑问是很多肽不溶于水溶液,因而在纯化中,这些疏水肽有必要溶于非水溶剂中或特别的缓冲液,而这些溶剂或缓冲液很也许不适合应用于生物试验体系,因而研究人员不能运用该多肽到达自个的意图,因而下面是关于研究人员规划多肽的一些建议。
怎么下降肽链合成的难度?
1. 削减序列长度
因为肽的长度添加会致使粗产品纯度下降,小于15个残基的肽对比简单得到较高纯度的初产品,当肽链长度添加到20个残基以上时,准确产品的量即是一个首要思考的疑问。在很多试验中,下降残基数低于20 往往能得到非常好的试验成果。
2. 削减疏水性残基数
疏水性残基占显着优势的肽,尤其在距C端7-12个残基的区域,常常导致合成艰难。这一般被认为是因为合成中构成b折叠片,这么会发生不完全配对。用1个或几个极性残基置换 或参加Gly或Pro以翻开肽构造也许会有协助。
3. 削减“艰难”残基