『壹』 提取细胞中DNA和蛋白质都需要用蒸馏水涨破细胞这句话为什么错
无论是提取细胞中的DNA,还是提取蛋白质,都有很多的方法,完全可以直接离心提取,所以“都需要”是错误的!
『贰』 为什么在蒸馏水中会发生溶血现象
溶血的意思就是来血细源胞破裂。
因为蒸馏水盐的浓度(渗透压)很小,或者说几乎没有,而血细胞是有一定的盐的浓度的,在这种情况下细胞很容易吸水,而且是一下子吸很多水,吸水过多自然就涨破了。
所以一般血细胞要放在生理盐水中,因为生理盐水盐的浓度和细胞内液浓度相似。
『叁』 蒸馏水会导致质壁分离还是质壁分离复原
蒸馏水会导致
质壁分离复原
。
活的成熟的
植物细胞
质壁分离后,放在蒸馏水中可吸水,发生质壁分离后的复原现象
『肆』 关于物质离心
人的红细胞在蒸馏水中吸水胀破,细胞质中的K+就扩散出来,因此离心后上清液含K+最多的,0.9%生理盐水中红细胞仍保持正常形态,10%生理盐水和20%蔗糖溶液中红细胞只皱缩不胀破
『伍』 提取细胞中的DNA和蛋白质都需要用蒸馏水涨破细胞 这句话为什么错了 DNA不能用蒸馏水吗
用蒸馏水涨破细胞多见于提取红细胞中的血红蛋白,在其他地方中的应用少见,提取DNA是不需要该操作的。而且无论是提取细胞中的DNA,还是提取蛋白质,都有很多的方法,所以“都需要”也是错误的。
『陆』 制备细胞膜的实验过程中,滴加蒸馏水后细胞的变化的具体过程是什么
优点是没有其他众多细胞器膜的干扰,应用的原理是细胞吸水胀破...
先在细内胞容液浓度大的细胞开始发生变化,原生质层消失,液泡体积增大(这三个空不很确定...)细胞破裂,细胞液流出,细胞破裂后用离心的方法获得较纯净的细胞膜...
『柒』 离心后细胞膜在上层还是下层
1的中层为细胞液,第一的情况是相对于细胞液而言,而水中细胞膜是脂类,浮于水之上
『捌』 提取红细胞膜书上说采用“离心法”。但是我觉得我们可以换种方法,可以用其他的方法吗
其实吧 这在理想状态下是可行的,但是作为一个课本实验要,简洁,节能。还有安全等因素。还有就是我认为温度的掌握是很难的,既要蒸发又要保持蛋白质不变性。所以老师可能在这里考虑。说你的方法不可行。
『玖』 DNA粗提取实验步骤
一 教学目的
1.初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。
2.观察提取出来的DNA物质。
二 教学建议
在本实验的教学中,教师应注意以下几点。
1.实验材料必须准备充足。本实验所用的实验材料是鸡血细胞液,由活鸡的鲜血经沉淀后获得。每组(2个学生)需用5 mL 鸡血细胞液,则每班(50人)至少需要130 mL,而鸡血细胞液与鸡血的体积比为1:3,这样每班至少需要390 mL 鸡血细胞液。宰杀1只中等大小的活鸡,一般可得120 mL 左右的鲜血,因此,1个班实验需要买4只活鸡。如果不具备购买活鸡的条件,也可以到市场售活鸡处去索取鸡血,但所带烧杯中必须提前放入抗凝剂。
2.盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中DNA的损失。
3.获取较纯净的DNA的关键步骤。
(1)充分搅拌鸡血细胞液DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。
(2)沉淀DNA时必须用冷酒精实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精,并在冰箱(至少5S以下)中至少存放24 h。
(3)正确搅拌含有悬浮物的溶液实验步骤3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌。教师应提醒学生注意,在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直插烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA分子。进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动510 min。
三 参考资料
实验原理的补充介绍
1.DNA的释放 DNA位于鸡血细胞的细胞核中,正常情况下不会释放出来。为了使DNA从细胞核中释放出来,实验中采用了向鸡血细胞液中加入蒸馏水并且搅拌的方法。蒸馏水对于鸡血细胞来说,是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞破裂。同时,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),于是释放出DNA,当然也有RNA。但是,释放出来的大量DNA和RNA往往与蛋白质结合在一起。
2.将DNA与蛋白质分离 根据二者的特性,即在浓度较高的氯化钠溶液(物质的量浓度为2 moL/L )中,核蛋白容易解聚,游离出DNA。而DNA在浓度较高的氯化钠溶液中的溶解度很高,Na+与带负电的DNA结合成DNA钠盐。这时DNA在溶液中呈溶解状态。
3.DNA的析出与获取 利用DNA在浓度较低的氯化钠溶液中溶解度小的原理,向含有DNA的浓度较高的氯化钠溶液中加入大量(300 mL )蒸馏水,稀释氯化钠溶液,使DNA的溶解度下降,而蛋白质的溶解度增高(这就是蛋白质的盐溶现象),从而使二者分离。这时,加上不停地搅拌,溶解度下降的DNA逐渐呈丝状物。再通过过滤,滤去蛋白质,就可以获取DNA的黏稠物了。如果采用离心法则更好,用4 000 r/min 的旋转频率,离心15 min ,除去上清液(含有蛋白质),留下的沉淀物中含DNA。
4.DNA的再溶解 再用较高浓度的氯化钠溶液去溶解DNA黏稠物。
5.DNA的沉淀和浓缩 除去了蛋白质的核酸溶液,必须再进一步沉淀和浓缩。最常用的方法是酒精沉淀法。就是将含有Na+的DNA溶液,加入到相当于其两倍体积的体积分数为95%冷酒精溶液中,混匀以后可以使DNA沉淀、浓缩,形成含杂质较少的DNA丝状物,悬浮于溶液中。如果出现的丝状物较少,可以将此混合液再放入冰箱中冷却几分。浓缩后的DNA丝状物,可以用缓缓旋转玻璃棒的方法卷起(因为玻璃棒有吸附DNA的作用)。
6.DNA的鉴定 本实验中鉴定DNA的方法为二苯胺法(配方见下述的“药品配制”)。二苯胺法的原理是:DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-γ酮基戊醛,它再和二苯胺作用而显现蓝色(溶液呈浅蓝色)。
鉴定时溶液蓝色的深浅,与溶液中DNA含量的多少有关。
二苯胺试剂的配制
A液: 15 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液: 乙醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制: 将0.1 mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。
DNA粗提取与鉴定的另一种方法
1.材料用具
新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)。
塑料烧杯,量筒,玻璃棒,尼龙纱布,陶瓷研钵,试管,试管架,试管夹,漏斗,酒精灯,石棉网,三角架,火柴,刀片,天平。
研磨液,体积分数为95%的酒精溶液,二苯胺试剂,蒸馏水。
2.方法步骤
(1)DNA的粗提取
①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24 h。
②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 将碎菜花放入研钵中,倒入10 mL研磨液,充分研磨10 min 。
④过滤 在漏斗中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤入烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心,用1 000r/min的旋转频率,离心25 min,取上清液放入烧杯中)。在4 ℃冰箱中放置几分后,再取上清液。
⑤加冷酒精 将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。沉淀35 min后,可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。
(2)DNA的鉴定
①配制二苯胺试剂 取0.1 mL B液,滴入到10 mL A液中,混匀。
②鉴定 取4 mL DNA提取液放入试管中,加入4 mL 二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100 ℃)加热10 min 。在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。
研磨液的配制方法
Tris:10.1 g(相对分子质量为121.14),先加50 mL 蒸馏水溶解,用物质的量浓度为2 moL/L 的盐酸调至pH8.0,再加下述药品。
NaCl:8.76 g(相对分子质量58.44)
EDTA:37.2 g(相对分子质量372.24)
SDS:20 g(相对分子质量288.3)
待上述药品全部溶解后,再用蒸馏水定容至1 000 mL。
若在室温低于20 ℃时配制药液,SDS呈沉淀析出,此时需要加温,才能将SDS溶解。如果提前配制的研磨液出现了沉淀,则应加温使沉淀溶解后再使用。
研磨液中几种药品的作用
SDS(十二烷基磺酸钠):可使蛋白质变性,与DNA分离。
EDTA(乙二胺四乙酸二钠):为DNA酶的抑制剂,可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNA。
物质的量浓度为0.15 moL/L的氯化钠溶液:能很好地溶解DNA。
Tris/HCl:提供缓冲体系,DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。(Tris为三羟甲基氨基甲烷)
鉴定DNA的其他方法 用紫外灯照射法鉴定DNA效果很好。具体鉴定方法如下。
1.配制染色剂。用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭(EB)溶液。
2.将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上,再滴1滴EB溶液染色。
3.将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射(暗室中),可见橙红色的萤光(DNA的紫外吸收高峰在280 nm处)。
『拾』 关于高中生物实验的问题 清水和蒸馏水
1.观察根尖分生组织细胞有丝分裂解离后用清水,也可用蒸馏水,因为这一步骤是提供低渗条件促进细胞吸水,观察质壁分离复原现象,由于清水易得、价廉,效果与使用蒸馏水基本相同,所以使用清水。在低温诱导染色体加倍的实验中,洗去卡诺氏液要用95%的酒精,而不是蒸馏水,因为卡诺氏液用冰乙酸(1份)和分析醇(3份)或
冰乙酸(1份)、分析醇(6份)及氯仿(3份)混合配制的。属于有机溶剂,不溶于水,所以要用酒精洗去。
2.根冠细胞形态不规则,保护根尖;根尖分身区细胞呈正方形。、排列紧密,有分裂能力是观察细胞有丝分裂的好材料,但细胞中无大液泡,不能作为观察质壁分离和质壁分离复原实验材料;根尖伸长区细胞细胞快速生长,细胞近似长方形,是生长素作用部位、弯曲生长部位;根尖成熟区,表皮细胞向外凸起形成根毛,是根吸收水分和无机盐的主要部位。