蛋白质测定中蒸馏后溶液变黑

A. 蛋白质测定时，样品经消化蒸馏之前为什么要加入氢氧化钠加入量对测定结果有何影响

1加入氢氧化钠是因为氢氧化钠和硫酸铵在加热条件下生成氨气溢出。
2加入量需要过量回，估计样品氮含量，计答算所需量，加入量最少超过所需量，还要中和消解过程中未分解的硫酸一般是1.5倍+消解时加入的硫酸量
3溶液颜色变化，如果本来是澄清溶液，此后会变黑、褐灰等颜色
4颜色变化是铜离子的存在的原因，变黑是铜离子和氢氧根离子变成氢氧化铜。不稳定生成氧化铜（黑色）所致
5如果没有变化，是加人氢氧化钠量不够所致
以上内容又本人经验所得，没有参考任何文献，希望对楼主有所帮助！

B. 试述蛋白质测定中，样品消化过程中内容物颜色发生什么变化为什么

蛋白质测定是生物化学和分子生物学研究中最常用、最基本的分析方法之一。人体正常值一般是 60～80 g/L。消化前加硫酸是应将附着在瓶壁上的粉末仔细冲洗至瓶中，消化 过程中应注意转动烧瓶，利用冷凝的酸液将附着在瓶壁上的炭粒冲下，以促迚消化；

消化必须在通风橱中迚行，消化开始时文火加热，以克液体窜出。消化时如果采用 直接火加热，火焰丌能超过液面以上，否则可能引起烧瓶爆裂；

样品消化液丌易 澄清透明时，可将烧瓶完全冷却后加入30%过氧化氢2~3mol 后继续消化，直至消化 液澄清透明呈蓝绿色为止。

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准备4个50mL凯氏烧瓶并标号，想1、2号烧瓶中加入定量的蛋白质样品，另外两个烧瓶作为对照，在每个烧瓶中加入硫酸钾-硫酸铜混合物。

再加入浓硫酸，将4个烧瓶放到消化架上进行消化，之后进行蒸馏，全部蒸馏完毕后用标准盐酸滴定各烧瓶中收集的氨量，直至指示剂混合液由绿色变回淡紫红色，即为滴定终点，结算出蛋白质含量。

双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。首先利用标准蛋白溶液和双缩脲试剂绘制标准曲线。

将待测血清与硫酸钠在待测试管中混合，并用只加入硫酸钠不含血清的试管作为对照，将两支试管加入等量的双缩脲试剂。

充分混合后于37℃环境中放置10分钟，在540nm波长进行比色，以对照管调零，读取吸光度值，由标准曲线上直接查出蛋白质含量。双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。

C. 凯氏定氮法测定蛋白质，蒸馏液加入过量的氢氧化钠后呈色

绿色
因为所用混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈红色。如果没有溴甲酚绿，可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液。

D. 在初蛋白质的测定实验中，为什么溴甲酚绿甲基红指示剂变绿时就意味着蒸馏室内的氨气全部进入硼酸溶液中了

不是变绿就意味着氨气完全进入硼酸

一般说来 变绿后 还要继续蒸馏十分钟左右 然后将导管提出液面 继续蒸馏一分钟

E. 急、有谁知道：在蛋白质测定中,样品经消化蒸馏之前为什么要加入氢氧化钠

是测定蛋白质组分吧，加NaOH是破坏氢键使其分解为氨基酸。无颜色变化

F. 凯氏定氮法测定蛋白质含量中消化完了溶液呈什么颜色

蓝绿色，等从消化炉上取下后不一会就变成无色。

凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法，即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，在碱性条件下将铵盐转化为氨；

随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量，由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。

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注意

样品应是均匀的，固体样品应预先研细混匀，液体样品应振摇或搅拌均匀，样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上。万一沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低。

在整个消化过程中，不要用强火。保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失。

如硫酸缺少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这样会形成硫酸氢钾，而不与氨作用，因此当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时，要增加硫酸的量。