蛋白质测定中加碱蒸馏是否完全

『壹』 蛋白质及氨基酸的测定有哪些方法求大神帮助

楼主你好： 测定蛋白质最基本的方法是定氮法，即先测定样品中的总氮量，再由总氮量计算出样品中蛋白质的含量。蛋白质含量测定最常用的方法是凯氏定氮法，它是测定总有机氮的最准确和操作较简便的方法之一，在国内外应用普遍。此外，双缩脉法、染料结合法、酚试剂法等也常用于蛋白质含量测定，由于方法简便快速，故多用于生产单位质量控制分析。 蛋白质及氨基酸的测定 蛋白质是生命的物质基础，是构成生物体细胞组织的重要成分，一切有生命的活体都含有不同类型的蛋白质。人体内的酸碱平衡、水平衡的维持；遗传信息的传递；物质的代谢及转运都与蛋白质有关。人及动物只能从食品得到蛋白质及其分解产物，来构成自身的蛋白质，故蛋白质是人体重要的营养物质，也是食品中重要的营养指标。 蛋白质是复杂的含氮有机化合物，分子量很大，它们由20种氨基酸通过酰胺键以一定的方式结合起来，并具有一定的空间结构。不同的蛋白质其氨基酸构成比例及方式不同，故各种不同的蛋白质其含氮量也不同。蛋白质可以被酶、酸或碱水解，最终产物为氨基酸。氨基酸是构成蛋白质的最基本物质，在构成蛋白质的氨基酸中，亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸等8种氨基酸在人体中不能合成，必须依靠食品供给，故被称为必需氨基酸，它们对人体有着极其重要的生理功能，常会因其在体内缺乏而导致患病，或通过补充而增强了新陈代谢作用。所以食品及其原料中蛋白质和氨基酸的分离、鉴定和定量具有极其重要的意义。 蛋白质的测定 测定蛋白质最基本的方法是定氮法，即先测定样品中的总氮量，再由总氮量计算出样品中蛋白质的含量。蛋白质含量测定最常用的方法是凯氏定氮法，它是测定总有机氮的最准确和操作较简便的方法之一，在国内外应用普遍。此外，双缩脉法、染料结合法、酚试剂法等也常用于蛋白质含量测定，由于方法简便快速，故多用于生产单位质量控制分析。 微量凯氏定氮法 本法适用于各类食品中蛋白质的测定。 1．原理 食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸胺。然后碱化蒸馏使氨游离，用过量硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。反应过程分为三个阶段，用反应式表示如下。 ①消化 2NH2(CH2)2COOH 4-13H2S04一(NH。)2S04+6C02+12S0=+16H20 (NH4)2S04+2Na()H一2NH3十+2H20+。Na2S04 2NH3+4H3803—，(NH4)2 B207+5H20 ③滴定 (NH4)2 B2 07+2HCl+5H20—NH4C1+4H3803 2．仪器 ①消化炉。 ②凯氏定氮蒸馏装置。 3．试剂 所用试剂均用不含氨的蒸馏水配制。试剂均为分析纯。 ①CuS04。 ②K2SO。 ③浓H2SO。 ④2％H。BO。溶液。 ⑤混合指示剂：1份O．1％甲基红乙醇溶液与5份O．1％溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份O．1％甲基红乙醇溶液与1份0．1％次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。 ⑥饱和氢氧化钠：500 g氢氧化钠加入500 mL水中，搅拌溶解，冷却后放置数日，澄清后使用。 ⑦0．01 toolI．一’或0．05 toolL叫HCl标准溶液(需用无水碳酸钠标定后使用)。 4．操作步骤 ①样品消化：精密称取O．2～2．0 g固体样品或2～5 g半固体样品或吸取液体样品5～20mI。，放人500 mI。干燥凯氏烧瓶中，加人O．2 g硫酸铜、3 g硫酸钾及20 mL浓HzSOa，于凯氏瓶口放一小漏斗，并将其以45。角斜支于有小孔的石棉网上。（更多详细咨询请参考国家标准物质网 www.rmhot.com ）用电炉以小火加热，待内容物全部碳化，泡沫停止产生后，加大火力，保持瓶内液体微沸，至液体变蓝绿色透明后再继续加热微沸30 min。冷却，小心加入20 mL水，再放冷至室温，移人100 mL容量瓶中，并用少量水洗烧瓶洗液并人容量瓶，在加水至刻度，混匀备用。除不加样品外，取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸，按同一方法做试剂空白消化。 ②水蒸气发生瓶内装水至约2／3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 ③向接收瓶内加入10 mL 2％硼酸溶液及混合指示液l滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取lO mI。样品消化稀释液由小玻璃杯流人反应室，并以10 mL水洗涤小烧杯使之流人反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将3～10 mL饱和氢氧化钠溶液倒人小玻璃杯中，提起玻璃塞使其缓缓流入反应室，立即将玻璃塞盖紧，并加水于小玻璃杯中以防漏气。加紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸汽通人反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏2～5 min，移动接收瓶，使冷凝管下端离开液面，然后用少量中性水冲洗冷疑管下端外部，再蒸馏1 min取下接收瓶，以0．01 molI．叫或O．05 molL1HCl标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。同时吸取10 mI_，试剂空白消化液按③操作。 5．计算 6。说明 ①干样用称量纸称重连纸一同消化，空白管同样放称量纸消化。 ②含糖量高和油脂高的样品消化时容易溢出，加热要缓慢。 ③氨是否蒸馏完全，可用pH试纸测试馏出液是否为碱性来判断。 ④实验前必须仔细检查蒸馏装置的各个连接处，保证不漏气。所用橡皮管、塞子须浸在氢氧化钠(10％)中，煮沸10 min，然后水洗、水煮，再用水洗。 ⑤小心加样，切勿使样品沾污凯氏烧瓶口部和颈部。

『贰』 检测生物组织中的糖类 蛋白质 和脂肪的实验 要求有详细实验步骤和注意事项还有实验现象 高悬赏！！！

分辨率：
A，电影和抄缩二脲试剂试剂虽然相同的成分，但浓度，用法，用量是不同的，如电影试剂B液（0.05g/ml）和双缩脲试剂B液（0.01克/毫升）用不同浓度，使故障。 />乙，脂肪材料的识别给定的两个方法：检测到的宏小区脂肪的花生种子，粉碎后得到的样品溶液，以及佳苏丹III染色可直接观察到，而无需使用显微镜。第二种方法必须是脂肪。 B错

D，缩二脲的蛋白质鉴定，没有水洗澡，D错

正确答案选项C.

房东，不知道答案，满足你吗？

『叁』 食品中蛋白质测定是怎么操作的

食品中蛋白质的测定
1 原理
蛋白质是含氮的有机化合物.食品与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵.然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质的含量.
2 分析步骤
2.1 试样处理：称取0.20g～2.00g固定试样或2.00g～5.00g半固体试样或吸取10.00ml～25.00ml液体试样（约相当氮30mg～40mg）,移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸铜,6g硫酸钾及20ml硫酸,稍摇匀后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上.小心加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体沸腾,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热0.5h～1h.取下放冷,小心加20ml水.放冷后,移入100ml容量瓶中.并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用.同时做试剂空白试验.
2.2 测定：按上图装好定氮装置,于水蒸气发生瓶内装水至三分之二处,加入数粒玻璃珠,加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,用调压器控制,加热煮沸水蒸气发生瓶内的水.2.3 向接收瓶内加入10ml硼酸溶液（20g/L）及1～2滴混合指示液,并使冷凝管的下端插入液面下,准确吸取10ml试样处 理液由小漏洞流入反应室,并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内,棒状玻塞塞紧.将10ml氢氧化钠溶液（400g/L）倒入小玻杯,提起玻塞使其缓缓流入反应室,立即将玻塞盖紧.并加水于小玻杯以防漏气.夹紧螺旋夹,开始蒸馏.蒸馏5min.移动接收瓶,液面离开冷凝管下端,再蒸馏1min.然后用少量水冲洗冷凝管下端外部.取下接收瓶.以硫酸或盐酸标准滴定溶液（0.05mol/L）滴定至灰色或蓝紫色为终点.同时准确吸取10ml.
试剂空白消化液按2.2操作.
3 结果计算
试样中蛋白质的含量按下列公式计算.
式中：
X—试样中蛋白质的含量,单位为克每百克或克每百毫升（g/100g或g/100ml）
V1—试样消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积,单位为毫升（ml） V2—试剂空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积,单位为毫升.
（ml）
C—硫酸或盐酸标准滴定液的浓度,单位为摩尔每升（mol/L） 0.0140—1.0ml
硫酸[c(1/2H2SO4)=1.000mol/L]或盐酸
[c(HCL)=1.000mol/L]标准滴定溶液相当的氮的质量,单位为克（g）
m—试样的质量或体积,单位为克或毫升（g或ml）
F—氮换算为蛋白质的系数,一般食物为6.25；乳制品为6.38；面粉为5.70；玉米、高粱为6.24；花生为5.46；米为5.95；大豆及其制品为5.71；肉与肉制品为6.25；大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83；芝麻、向日葵为5.30.计算结果保留三位有效数字.
4 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差不得超过算数平均值的10%.
zttn037 2014-11-19

『肆』 凯氏定氮法,为什么冷凝管下端要浸入液面以下怎样知道蒸馏是否完全蒸馏结束要注意什么

冷凝管下端进入页面以下是因为氮是也氨气的形式蒸馏出来的，如果不在页面以下，就不能完全的被吸收液吸收，造成结果偏小。氨是否完全蒸馏完全，可用PH试纸试检测馏出液是否为碱性。蒸馏完全后就去滴定。

如果是用的凯氏定氮仪的话，结束后只要注意机子的保养就好了，如果是自己组装的装置那就要就要注意：蒸馏结束后，掐紧簧夹，断绝蒸气，使反应室内溶液全部吸人回流管中，再放松簧夹，从小漏斗加入蒸馏水40～50ml。

再通蒸气加热和回流，放掉回流管中残液，这样反复3～4次，将反应室洗涤干净，才能备下一次测试用(标准书上只洗一次，不易洗净)。

在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。

(4)蛋白质测定中加碱蒸馏是否完全扩展阅读：

蛋白质与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，并换算成蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量。

在整个消化过程中，不要用强火。保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失。

如硫酸缺少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这样会形成硫酸氢钾，而不与氨作用。因此，当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时，要增加硫酸的量。

加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点，硫酸铜为催化剂，硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂。

混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈红色。如果没有溴甲酚绿，可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液。

『伍』 蛋白质测定时，样品经消化蒸馏之前为什么要加入氢氧化钠加入量对测定结果有何影响

1加入氢氧化钠是因为氢氧化钠和硫酸铵在加热条件下生成氨气溢出。
2加入量需要过量回，估计样品氮含量，计答算所需量，加入量最少超过所需量，还要中和消解过程中未分解的硫酸一般是1.5倍+消解时加入的硫酸量
3溶液颜色变化，如果本来是澄清溶液，此后会变黑、褐灰等颜色
4颜色变化是铜离子的存在的原因，变黑是铜离子和氢氧根离子变成氢氧化铜。不稳定生成氧化铜（黑色）所致
5如果没有变化，是加人氢氧化钠量不够所致
以上内容又本人经验所得，没有参考任何文献，希望对楼主有所帮助！

『陆』 急、有谁知道：在蛋白质测定中,样品经消化蒸馏之前为什么要加入氢氧化钠

是测定蛋白质组分吧，加NaOH是破坏氢键使其分解为氨基酸。无颜色变化

『柒』 国家标准检测蛋白质含量测定方法

蛋白质含量测定方法就是检测元素的含量，像三聚氰胺的问题，就是通过增加N的含量使“蛋白质”含量提高的。

国家标准检测蛋白质含量的方法叫做凯氏定氮法，食物中的蛋白质在催化加热条件下分解，导致氨和硫酸结合产生硫酸铵。 碱蒸馏采用无硫，硼酸吸收，用硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸耗计算氮含量，再乘以转化系数，即蛋白质含量。

具体操作步骤如下：

1.样品处理

精确称量0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸收10-20ml液体样品（约30-40mg氮当量）。将其转移至干燥的100毫升或500毫升氮气固定瓶中，加入0.2克硫酸铜，6克硫酸钾和20毫升硫酸，轻轻摇动，在瓶口放置一个小漏斗，将瓶子倾斜石棉网上有45度角，有小孔。

加热小火后，内容物碳化，泡沫完全停止，加强火力，保持瓶内液体稍微沸腾，直至液体呈蓝绿色澄清透明，然后继续加热0.5小时。取出并冷却，小心加入20毫升水，冷却，移入100毫升容量瓶中，用少量水洗净氮气瓶，洗净液放入容量瓶中，然后用水冲洗至刻度，混匀备用。

取相同量的硫酸铜，硫酸钾和浓硫酸作为试剂进行空白试验。然而，这种方法很危险，很难在实验室中证明。大多数实验室都有一个消化器，可以一次处理16个以上的样品和一个可以自行设定温度的呼吸机。它更安全，更可操作。

(7)蛋白质测定中加碱蒸馏是否完全扩展阅读

除了凯氏定氮法以外，标准的测量方法还有：

• 分光光度法

食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，在pH4.8的乙酸钠-乙酸缓冲溶液中与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氢化吡啶化合物。在波长400nm 下测定吸光度值，与标准系列比较定量,结果乘以换算系数，即为蛋白质含量。

• 燃烧法

样品在900~1200℃下燃烧。在燃烧过程中，产生混合气体。 诸如碳，硫和盐的干扰气体被吸收管吸收，氮氧化物被还原成氮。 形成的氮气流由热导检测器（TCD）检测。

『捌』 蛋白质检测中应注意什么

其中碳氢被氧化为二氧化碳和水逸出，蛋白质中的氮转化为氨与硫酸结合生成硫酸氯在硫酸中，然后加碱蒸馏，使氨逸出，用硼酸吸收，再以硫酸或盐酸标准溶液滴定。根据酸的消耗量乘以换算系数为蛋白质含量。笔者根据多年来操作经验认为，在检验过程中应注意如下三个环节。一、样品、试剂加入量的控制。1．称取试样的多少取决于样品中蛋白质的高低。蛋白质中含氮量较恒定，通常是通过测定食品中氮的含量来确定蛋白质的含量。一般固体样品称取0．2-2．0g，半固体样品称取2—5g，液体样品吸取10-20ml。样品中含氮量低的可增加称样量。2．硫酸的加入量，通常加20ml，但试样量如超过5g时，应按每克试样5ml的比例增加硫酸用量。否则试样消化不完全造成结果偏低。3．消泡剂的加入。含脂肪或糖较多的食品在消化时产生大量泡沫，溢出瓶外，造成氮的损失，所以消化前可加入少量消泡齐lj。如：液体石蜡、硅消泡剂等。4．催化剂的加入量要适宜硫酸铜是最理想的催化剂，效果好，价格便宜，环境污染小，而且是蒸馏加碱时的指示剂。硫酸钾可加快有机物的分解，使硫酸沸点从34．0℃提高到40．0℃以上，但加入量不能太大，否则温度过高会使铵盐分解而文——胡惠敏造成损失，除硫酸钾外硫酸钠也有同样作用。5．难消化的样品还可适当加入少量过氧化氢，次氯酸钠等氧化剂加速有机物氧化。二、样品消化处理。1．样品一定要移入干燥的凯氏烧瓶中，否则样品易粘在瓶壁上不易消化。加硫酸时应将附在瓶壁上的粉末仔细洗至瓶中，使样品全部消化。还有在消化时注意转动凯氏烧瓶，利用冷凝酸液将附在瓶壁上的碳粒冲下促进完全消化。2．样品与试剂加入摇匀后瓶口应放一小漏斗，将瓶倾斜45。角斜至有小孔的石棉网上，小心加热，避免喷溅。待瓶内试样全部碳化，泡沫完全停止后，再加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈澄清透明的蓝绿色后再加热半小时，样品即消化完全。三、蒸馏过程中条件的控制。1．蒸馏对温度、时间都有要求。热源温度过低直接影响氯的逸出，从而导致结果偏低。蒸馏时间应控制在30分钟左右，时间过少氯放出时间不足，使结果偏低，样品应在温度较高(1000W)的电炉子上蒸馏为宜，达到规定时间后应用PH试纸测出馏出液是否呈中性，若碱性应延长蒸馏时间直至中性。2．氢氧化钠的加入量。在蒸馏过程中，烧瓶内溶液应保持碱性，因此经消化处理样品加氢氧化钠后，瓶内液体在加热沸腾后溶液呈黑色，如果呈兰色，说明氢氧化钠的加入量不足，应补加至分解液呈黑褐色。3．硼酸作为吸收液。由于硼酸是极弱的酸，只起吸收氯的作用，不影响碱滴定，但要注意硼酸吸收液温度不应超过40℃，否则氯吸收减弱，造成损失。4．蒸馏装置不能漏气。蒸馏过程中不能停火断气避免发生倒吸，蒸馏完毕先将蒸馏出1：3离开液面，继续蒸馏1分钟，将附着在尖端的吸收液完全洗入吸收瓶内，否则吸收液体将发生倒吸造成意外。5．在滴定过程中一定要将滴管中的气泡赶出，使之在0刻度线时开始滴定，滴定时不要过快，以免达到终点时不好控制。总之，在检验过程中注意以上几点，才能减少误差，确保俭测结果与真实值一致