1. 培考马斯亮蓝加水变蓝
按正常是应该是和蛋白反应后 颜色才变为青蓝色的
2. pH对考马斯亮蓝溶液的颜色有没影响
当然有影响了,PH值的计算你知道吧
这个就可以顺应而解了,颜色的深浅和浓度的多少,有很大的关系
3. 考马斯亮蓝染液和蒸馏水混合颜色
考马斯亮蓝染液和蒸馏水混合颜色,这个你可以自己做下实验,看出来是什么颜色。
4. 考马斯亮蓝法中能否用蒸馏水代替生理盐水
试剂 1. 0.9%生理盐水 2. 考马斯亮蓝试剂 3. 1000?g /ml蛋白质标准液 【分光光度法的基本原理和分光光度计的 使用方法】 定义: 分光光度法是利用物质所特有的吸
5. 考马斯亮蓝G250测定蛋白中为什么加氯化钠和直接蒸馏水有什么区别
加入氯化钠溶液是为了加速溶解,加入蒸馏水也可以。
6. 蒸馏水与考马斯亮蓝染液有何现象
染色,考马斯亮蓝显色法的基本原理是根据蛋白质可与考马斯亮蓝G-250
定量结合。当考马斯亮蓝
G-250
与蛋白质结合后,其对可见光的最大吸收峰从
465nm
变为
595nm。
7. 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中,使用的水一定是蒸馏水吗为什么
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中,使用的水最低要求是蒸馏水,更高精度要求可能会使用双蒸水。
因为Bradford检测中要用的试剂配制,标准曲线的制作都要用到水。如果不是使用蒸馏水,可能水里面会有一些游离的离子或者电解质,会影响试剂配制的准确性,干扰实验结果。而水中残留的有机物等可能会和考马斯亮蓝发生变色反应,这样制作的标准曲线会比实际值偏高,导致最终浓度检测的结果比实际结果偏低。
8. 考马斯亮蓝染液和蒸馏水混合颜色
染色,考马斯亮蓝显色法的基本原理是根据蛋白质可与考马斯亮蓝G-250 定量结合。当考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合后
9. Western中考马斯亮蓝的作用是什么
考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1.Bradford浓染液的配制:将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95%乙醇,加入100ml浓磷酸,然后,用蒸馏水补充至200ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2.标准曲线蛋白质样本的准备:尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗体,可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的,也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3.将待测样本溶于100~1缓冲溶液中,该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4.按1:5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,如出现沉淀,过滤除去。
5.每个样本加5ml稀释的染料结合溶液,作用5~30rain。染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min.
6.根据标准曲线计算待测样本的浓度。
10. 用考马斯亮蓝检 测蛋白为什么会有絮状沉淀产生
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中,使用的水最低要求是蒸馏水,更高精度要求可能会使用双蒸水。
因为Bradford检测中要用的试剂配制,标准曲线的制作都要用到水。