① 免疫球蛋白提取实验注意事项及原因
IgG的分离与提纯
（一）材料与试剂配制
1．动物血清
2．硫酸铵饱和溶液
硫酸铵 800g~850g
H2O 1 000ml
加热至绝大部分溶质溶解为止，趁热过滤，置室温过夜，然后以28％NH4OH调pH至7.0（不调pH值也可以）。
注：硫酸铵以质量优者为佳，因次品中含有少量重金属对蛋白质巯基有影响。如次品必须除去重金属，可在溶液中通入H2S，静置过夜后滤过，加热蒸发H2S即可。
3．0.01Mol/L pH7.4PB液
A液：0.10Mol/L NaH2PO4液
NaH2PO4•2H2O 15.60g
加H2O至 1 000.ml
B液：0.10Mol/L Na2HPO4液
Na2HPO4•12H2O 35.80g
加H2O至 1 000ml
取A液19ml，B液81ml加水至1 000ml即可。
4．1％BaCl2溶液
5．纳氏液
HgI 115.00g
KI 80.00g
加H2O至 500.00ml
溶化后过滤，然后再加20％NaOH500.00ml，混合即可。
6．0.50 Mol/L的HCl液和0.50 Mol/L的NaOH液。
7．洗脱液：0.03Mol/L的NaCl液。
8．透析袋（或玻璃纸）。
（二）操作方法
1．取20ml血清，加生理盐水20ml，再逐滴加入(NH4)2SO4饱和溶液10ml，使成20％(NH4)2SO4溶液，边加边搅拌，充分混合后，静置30min。
2．3 000r/min离心20min，弃去沉淀，以除去纤维蛋白。
3．在上清液中再加（NH4）2SO4饱和溶液30ml，使成50％（NH4）2SO4溶液，充分混合，静置30min。
4．3 000r/min离心20min，弃上清。
5．于沉淀中加20ml生理盐水，使之溶解，再加(NH4)2SO4饱和溶液10ml，使成33％(NH4)2SO4溶液，充分混合后，静置30min。
6． 3 000r/min离心20min，弃上清，以除去白蛋白。重复步骤5，2~3次。
7． 用10ml生理盐水溶解沉淀，装入透析袋。
8． 透析除盐，在常水中透析过夜，再在生理盐水中于4℃透析24h，中间换液数次。
以1％BaCl2检查透析液中的SO42-或以纳氏试剂检查NH4+（取3~4ml透析液，加试剂1~2滴，出现砖红色即认为有NH4+存在），直至无 SO42-或NH4+出现为止。也可采用SephadexG25或电透析除盐。
9． 离心去沉淀（去除杂蛋白），上清液即为粗提IgG （即γ球蛋白，如以36％的饱和硫酸铵沉淀血清的产物即为优球蛋白，Euglobin，含γ球蛋白)。
10．过DEAE－纤维素层析柱。（装柱过程见层析技术）。以0.01Mol/L pH7.4PBS（0.03Mol/L NaCl）洗脱，收集洗脱液。
也可采用SephadexG150或G200柱。
11．蛋白质及其定量鉴定（见本章第八节）。
12．IgG的纯度鉴定 可采用下列方法之一鉴定。
⑴ 区带电泳：玻片琼脂或醋酸纤维膜电泳均可。加样电泳后，只在γ—球蛋白的迁移部位出现一条带。操作时，同时可用全血清样品，不同浓度（NH4）2SO4盐析样品进行电泳，以资比较。
⑵ 琼脂双相双扩散鉴定：预先准备该IgG免疫异种动物所获的抗IgG血清。将IgG与抗IgG血清进行双相双扩散，如IgG提纯的话，则在两样品孔之间出现一条沉淀线。
⑶ 免疫电泳鉴定：（操作见第三章免疫电泳部分）。孔内加待测样品，电泳后，在槽内加抗IgG血清，琼脂扩散24h，观察结果。如果提取的IgG纯的话，则只出现一条弧形的沉淀线，且沉淀线位于γ—球蛋白区。此鉴定必须同时进行全血清及抗血清抗体的免疫电泳，以资比较。
⑷ 圆盘电泳鉴定：用全血清样品及提纯样品同时进行圆盘电泳。全血清样品在圆盘电泳上出现数十条区带，而纯化的IgG则只有一条区带。
13．IgG的浓缩与保存
⑴ IgG的浓缩：参看本章第九节。
⑵ IgG的保存：一般浓缩至1％以上的浓度，再分装成小瓶冻干保存，或加0.01％硫柳汞在普通冰箱或低温冰箱保存，注意防止反复冻融。
（三）IgG的简易快速提取法
应用硫酸铵盐析及DEAE-纤维素层析法提纯化的IgG，不仅操作复杂、需时较长，处理过程中样品体积大大增加，而且透析时变性严重，容易引起抗体效价降低等。为了克服这一不足，特别是当大量提取IgG时，则往往采取下列的简易办法。
1． DEAE-纤维素直接提取法
取样品直接过DEAE-纤维素柱。下面介绍的是最为简单的烧杯法。
⑴ 以一定数量的DEAE52放入烧杯中，加入0.01Mol/L pH8.0PB缓冲液，静置30min，去上清细粒，再重复一次。
⑵用布氏漏斗（内放两层滤纸）过滤。
⑶以5g湿重的DEAE-纤维素加1ml血清及3ml蒸馏水混合液的比例，加入各成分，充分搅拌。
⑷于4℃中放置1h，中间搅拌数次。
⑸用布氏漏斗抽滤，再用0.01Mol/L pH8.0PB缓冲液冲洗纤维素，抽滤。滤液即为提取的IgG液。
2．DEAE－SephadexA－50为弱碱性阴离子交换剂，经NaOH将Cl-型转变为OH-型后，可吸附酸性蛋白，血清中除γ－G属中性蛋白外其余均属酸性蛋白。当溶液的pH在6.5时，酸性蛋白均被DEAE－SephadexA－50吸附，只有γ－G留在溶液中。因此利用这一原理可以提取γ－G。这种提取法流程大大缩短，纯化前后样品体积变化不大，而且所得γ－G无变性现象。经过四次处理，其纯度也较好。缺点是收集量少，损耗大。
⑴ DEAE—SephadexA—50的处理。取DEAE－SephadexA－50若干克，悬浮于蒸馏水中，1h后倾去上层小颗粒，然后用0.50Mol/L NaOH处理1h，蒸馏水洗至中性，再用0.5 Mol/L HCl处理0.5h，水洗至中性，最后以0.01Mol/L pH6.5PB液平衡、抽干。
⑵ 取一定的血清量，加等量的0.01Mol/L pH6.5PB液，再加液体体积1/4的滤干的DEAE－SephadexA－50，混合、4℃放置1h，不时搅拌、抽滤、收集滤液。
⑶ 再用同样重量的DEAE－SephadexA－50处理滤液。反复处理三次。（全程共四次）。获得滤液即为γ－G制品。
⑷ DEAE－SephadexA－50的回收。用0.5Mol/L的Na2HPO4洗脱，抽滤至滤液中无蛋白（OD280﹤0.04）后，再用蒸馏水洗至中性即可回收使用。
② 蛋白质在水溶液中加酸或者加碱分子状态会怎么变化
生物碱试剂本质就是酸类，它们一般均导致蛋白质变性.因为反应机理是 跟蛋白质侧链上阳性离子（如氨基等）发生酸碱成盐反应，而侧链氨基常参与蛋白质的高级结构或酶的活性中心，因此变性.（蛋白质盐是很大的分子，沉淀是很自然的）。
大多数生物碱在酸水或稀醇中能与某些试剂反应生成难溶于水的复盐或分子络合物,这些试剂称为生物碱沉淀试剂.
1.常用的生物碱沉淀试剂
碘化物复盐、重金属盐、大分子酸类等.常见的生物碱沉淀试剂有碘-碘化钾试剂、碘化铋钾试剂、碘化汞钾试剂等.
2.生物碱沉淀反应的条件
（1）反应环境
生物碱沉淀的反应一般在稀酸水溶液中进行.
（2）净化处理
共存的蛋白质、多肽、鞣质等成分,这些物质也能与生物碱沉淀试剂发生沉淀的反应.为了避免其干扰,可将酸水液经碱化后用氯仿萃取,除去水溶性干扰成分,然后用酸水从氯仿中萃取出生物碱,以此酸水液进行沉淀反应.
3.生物碱沉淀反应阳性结果的判断
（1）阳性结果判断
一般需选用三种以上的沉淀试剂进行反应,如果均有生物碱的沉淀反应,可判断为阳性结果.
（2）需要注意的问题
①少数生物碱不能与一般生物碱沉淀试剂产生沉淀反应.如麻黄碱、咖啡碱与多数生物碱沉淀试剂不能发生沉淀反应.
②中药中有些非生物碱类物质也能与生物碱沉淀试剂产生沉淀的应,如蛋白质、多肽、氨基酸、鞣质等.
4.生物碱沉淀反应的应用
（1）检识反应
（2）指导生物碱的提取分离
（3）生物碱的分离纯化
（4）薄层或纸层色谱的显色剂
③ 蛋白质中加稀硫酸，再加蒸馏水的现象及作用
你是想问蛋白质会不会像酯一在稀硫酸水解。蛋白质在碱性条件下才可以水解，酸性不发生反应
④ 蛋白质测定时，样品经消化蒸馏之前为什么要加入氢氧化钠加入量对测定结果有何影响
1加入氢氧化钠是因为氢氧化钠和硫酸铵在加热条件下生成氨气溢出。
2加入量需要过量回，估计样品氮含量，计答算所需量，加入量最少超过所需量，还要中和消解过程中未分解的硫酸一般是1.5倍+消解时加入的硫酸量
3溶液颜色变化，如果本来是澄清溶液，此后会变黑、褐灰等颜色
4颜色变化是铜离子的存在的原因，变黑是铜离子和氢氧根离子变成氢氧化铜。不稳定生成氧化铜（黑色）所致
5如果没有变化，是加人氢氧化钠量不够所致
以上内容又本人经验所得，没有参考任何文献，希望对楼主有所帮助！
⑤ 蛋白质消化样品蒸馏之前要加入氢氧化钠这时溶液的颜色会发生什么变化为什么蛋
变黄色 蛋白质分子含有NH3（氨基） 会和碱反应 脱氨基就变黄了
⑥ 蛋白质碱法水解步骤
蛋白质在碱的作用下，水解后氨基酸会消旋，但色氨酸稳定。与5摩尔每升的氢氧化钠共煮10——20h即可
⑦ 蛋白质加入NaOH水浴加热后为什么会产生絮状沉淀
蛋白质在强碱作用下变性，特定的空间结构被破坏，疏水侧链暴露在外，肽链融汇相互缠绕而聚集，因而从溶液中析出，即蛋白质沉淀。若再加热则絮状物可变为较坚固的凝块，此凝块不溶于强酸强碱，即蛋白质的凝固作用。
⑧ 检测生物组织中的糖类 蛋白质 和脂肪的实验 要求有详细实验步骤和注意事项还有实验现象 高悬赏！！！
分辨率：
A，电影和抄缩二脲试剂试剂虽然相同的成分，但浓度，用法，用量是不同的，如电影试剂B液（0.05g/ml）和双缩脲试剂B液（0.01克/毫升）用不同浓度，使故障。 />乙，脂肪材料的识别给定的两个方法：检测到的宏小区脂肪的花生种子，粉碎后得到的样品溶液，以及佳苏丹III染色可直接观察到，而无需使用显微镜。第二种方法必须是脂肪。 B错
D，缩二脲的蛋白质鉴定，没有水洗澡，D错
正确答案选项C.
房东，不知道答案，满足你吗？