❶ 已知pad是琥珀酸脱氢酶的辅基,将这种酶用蒸馏水透析是否还有活性
葡萄糖经过有氧呼吸后其中的氧元素最后是在二氧化碳中。氧气中的氧元素到水中。 (1)葡萄糖磷酸化 葡萄糖氧化是放能反应,但葡萄糖是较稳定的化合物,要使之放能就必须给与活化能来推动此反应,即必须先使葡萄糖从稳定状态变为活跃状态,活化一个葡萄糖需要消耗1个ATP,一个ATP放出一个高能磷酸键,大约放出30.5kj自由能,大部分变为热量而散失,小部分使磷酸与葡萄糖结合生成葡萄糖-6-磷酸。催化酶为己糖激酶。 (2)葡萄糖-6-磷酸重排生成果糖-6-磷酸。催化酶为葡萄糖磷酸异构酶。 (3)生成果糖-1、6-二磷酸。催化酶为6-磷酸果糖激酶-1。 1个葡萄糖分子消耗了2个ATP分子而活化,经酶的催化生成果糖-1,6-二磷酸分子。 (4)果糖-1、6-二磷酸断裂成3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮,催化酶为醛缩酶。 (5)磷酸二羟丙酮很快转变为3-磷酸甘油醛。催化酶为丙糖磷酸异构酶。 以上为第一阶段,1个6C的葡萄糖转化为2个3C化合物PGAL,消耗2个ATP用于葡萄糖的活化,如果以葡萄糖-1-磷酸形式进入糖酵解,仅消耗一个ATP。这一阶段没有发生氧化还原反应。 (6)3-磷酸甘油醛氧化生成1、3-二磷酸甘油酸,释放出两个电子和一个H+, 传递给电子受体NAD+,生成NADH+ H+,并且将能量转移到高能磷酸键中。催化酶为3-磷酸甘油脱氢酶。 (7)不稳定的1、3-二磷酸甘油酸失去高能磷酸键,生成3-磷酸甘油酸,能量转移到ATP中,一个1、3-二磷酸甘油酸生成一个ATP。催化酶为磷酸甘油酸激酶。此步骤中发生第一次底物水平磷酸化 (8)3-磷酸甘油酸重排生成2-磷酸甘油酸。催化酶为磷酸甘油酸变位酶。 (9)2-磷酸甘油酸脱水生成磷酸烯醇式丙酮酸PEP。催化酶为烯醇化酶。 (10)PEP将磷酸基团转移给ADP生成ATP,同时形成丙酮酸。催化酶为丙酮酸激酶。此步骤中发生第二次底物水平磷酸化。 在缺氧条件下丙酮酸被还原为乳酸、乙醇这是无氧呼吸的过程这里就不再复述,有氧条件下丙酮酸可进一步氧化分解生成乙酰CoA进入三羧酸循环: (1)乙酰-CoA进入三羧酸循环 乙酰CoA具有硫酯键,乙酰基有足够能量与草酰乙酸的羧基进行醛醇型缩合。首先柠檬酸合酶的组氨酸残基作为碱基与乙酰CoA作用,使乙酰CoA的甲基上失去一个h+,生成的碳阴离子对草酰乙酸的羰基碳进行亲核攻击,生成柠檬酰CoA中间体,然后高能硫酯键水解放出游离的柠檬酸,使反应不可逆地向右进行。该反应由柠檬酸合成酶(citrate synthase)催化,是很强的放能反应。 由草酰乙酸和乙酰CoA合成柠檬酸是三羧酸循环的重要调节点,柠檬酸合成酶是一个变构酶,ATP是柠檬酸合成酶的变构抑制剂,此外,α-酮戊二酸、NADH能变构抑制其活性,长链脂酰CoA也可抑制它的活性,AMP可对抗ATP的抑制而起激活作用。 (2)异柠檬酸形成 柠檬酸的叔醇基不易氧化,转变成异柠檬酸而使叔醇变成仲醇,就易于氧化,此反应由顺乌头酸酶催化,为一可逆反应。 (3)第一次氧化脱羧 在异柠檬酸脱氢酶作用下,异柠檬酸的仲醇氧化成羰基,生成草酰琥珀酸(oxalosuccinic acid)的中间产物,后者在同一酶表面,快速脱羧生成α-酮戊二酸(α ketoglutarate)、NADH和co2,此反应为β-氧化脱羧,此酶需要Mg2+作为激活剂。 此反应是不可逆的,是三羧酸循环中的限速步骤,ADP是异柠檬酸脱氢酶的激活剂,而ATP,NADH是此酶的抑制剂。 (4)第二次氧化脱羧 在α-酮戊二酸脱氢酶系作用下,α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰CoA、NADHH+和CO2,反应过程完全类似于丙酮酸脱氢酶系催化的氧化脱羧,属于α 氧化脱羧,氧化产生的能量中一部分储存于琥珀酰CoA的高能硫酯键中。 α-酮戊二酸脱氢酶系也由三个酶(α-酮戊二酸脱羧酶、硫辛酸琥珀酰基转移酶、二氢硫辛酸脱氢酶)和五个辅酶(tpp、硫辛酸、hscoa、NAD+、FAD)组成。 此反应也是不可逆的。α-酮戊二酸脱氢酶复合体受ATP、GTP、NADH和琥珀酰CoA抑制,但其不受磷酸化/去磷酸化的调控。 (5)底物磷酸化生成ATP 在琥珀酸硫激酶(succinate thiokinase)的作用下,琥珀酰CoA的硫酯键水解,释放的自由能用于合成GTP,在细菌和高等生物可直接生成ATP,在哺乳动物中,先生成GTP,再生成ATP,此时,琥珀酰CoA生成琥珀酸和辅酶A。 (6)琥珀酸脱氢 琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase)催化琥珀酸氧化成为延胡索酸。该酶结合在线粒体内膜上,而其他三羧酸循环的酶则都是存在线粒体基质中的,这酶含有铁硫中心和共价结合的FAD,来自琥珀酸的电子通过FAD和铁硫中心,然后进入电子传递链到O2,丙二酸是琥珀酸的类似物,是琥珀酸脱氢酶强有力的竞争性抑制物,所以可以阻断三羧酸循环。 (7)延胡索酸的水化 延胡索酸酶仅对延胡索酸的反式双键起作用,而对顺丁烯二酸(马来酸)则无催化作用,因而是高度立体特异性的。 (8)草酰乙酸再生 在苹果酸脱氢酶(malic dehydrogenase)作用下,苹果酸仲醇基脱氢氧化成羰基,生成草酰乙酸(oxalocetate),NAD+是脱氢酶的辅酶,接受氢成为NADHH+(图4-5)。 在以上过程中产生的NADH或FADH2进入呼吸链向氧传递电子。以下是呼吸链: (1).复合体Ⅰ 即NADH:辅酶Q氧化还原酶复合体,由NADH脱氢酶(一种以FMN为辅基的黄素蛋白)和一系列铁硫蛋白(铁—硫中心)组成。它从NADH得到两个电子,经铁硫蛋白传递给辅酶Q。铁硫蛋白含有非血红素铁和酸不稳定硫,其铁与肽类半胱氨酸的硫原子配位结合。铁的价态变化使电子从FMNH2转移到辅酶Q。 (2).复合体Ⅱ 由琥珀酸脱氢酶(一种以FAD为辅基的黄素蛋白)和一种铁硫蛋白组成,将从琥珀酸得到的电子传递给辅酶Q。 (3).辅酶Q 是呼吸链中唯一的非蛋白氧化还原载体,可在膜中迅速移动。它在电子传递链中处于中心地位,可接受各种黄素酶类脱下的氢。 (4)复合体Ⅲ 辅酶Q:细胞色素C氧化还原酶复合体,是细胞色素和铁硫蛋白的复合体,把来自辅酶Q的电子,依次传递给结合在线粒体内膜外表面的细胞色素C。 细胞色素类 都以血红素为辅基,红色或褐色。将电子从辅酶Q传递到氧。根据吸收光谱,可分为三类:a,b,c。呼吸链中至少有5种:b、c1、c、a、a3(按电子传递顺序)。细胞色素aa3以复合物形式存在,又称细胞色素氧化酶,是最后一个载体,将电子直接传递给氧。从a传递到a3的是两个铜原子,有价态变化。 (5)复合体IV:细胞色素C氧化酶复合体。将电子传递给氧。
❷ 为什么利用透析法纯化蛋白时,为什么不能用蒸馏水做透析液
因为蛋白在范馏水中不稳定。也许是进化的关系,蛋白要保证有一定浓度的盐离子才能比较稳定,相互之间不会产生聚集而沉淀。
一般如果没有特别的溶液,用PBS就可以了。最好是放四度冰箱,经常换水,尽快透析完。
❸ 为什么蒸馏水作透析液比磷酸缓冲溶液作透析液的透
1.分压.例如某容器内某混合气体对某处容器壁产生的压力为a,若该气体有20%是氧气,氧气所产生内的压力叫氧容气的分压,为20%a.容器体积不变,氧气重量不变,无论是加进其它气体或抽调其它其它,氧气的分压都是那么多.反正就是那么多的东西产生那么多的压力.
2.如果有还原糖的一边是一样的,另一边是水或磷酸缓冲液,这两种情况,还原糖在膜两边的压力差是一样的.一边有若干,另一边没有.要研究水就看水的分压,要研究糖,就看糖的分压.既然压力差一样,为什么速度不一样呢?可能阻力不一样,可能其实压力差本来就不一样.
3.可溶性淀粉加唾液产生还原糖,这里有误差的,大不大呢?是不是这个原因造成的呢?要排除它,这一边改成定量的还原糖,再测一下就知道.
4.用哪一种半透膜?NaCL、磷酸缓冲液里的各种离子能不能通过?会不会影响淀粉的分解?
5.还原糖在纯水中的扩散肯定比在磷酸缓冲液中要快,(在旷野跑与在树多的地方跑,)我没做过实验,但我觉得在你的实验中,不会差得很多.
❹ 将透析管里含淀粉的溶液加入到蒸馏水的烧杯中的目的是什么
应该是为了说明淀粉是大分子,它跟蛋白质性质相似,可以被透析沉淀出来吧
❺ 生物高手请进:请问“利用透析法纯化蛋白酶时,应以蒸馏水作为透析液”这句话为什么错了难道蒸馏水会...
1,用缓冲液更能保证蛋白质的活性,用蒸馏水虽说没有严重错误但对蛋白质活性的保持还版是有风险的,若实验权中不小心溅进去酸或碱,显然缓冲液更保险。
2,合适的缓冲液可以抑制蛋白质水解,保持将ph控制在等电点附近,防止蛋白质聚沉。3,蛋白质多亲水,缓冲液中离子可以防止过多水分子水合蛋白质。
至于别的缓冲液,最好还是用磷酸,原因:1,磷酸三元且弱酸,缓冲余地更大,而且磷元素比较亲生物。2,碳酸钠,碳酸氢钠易分解,亚硫酸根又时不时会产生有毒物质,硫代硫酸根又活泼,氢氟酸,次氯酸更不用说,常见的只有磷酸缓冲液最佳。
❻ (2013南通模拟)如图甲烧杯中是5%的淀粉液,乙烧杯中是5%葡萄糖液,将装有蒸馏水的透析袋分别放入甲、
A、甲烧杯中透析袋外的淀粉液浓度大于透析袋内蒸馏水的浓度,由于淀粉不回可以通过透析袋答,所以水分子从透析袋出来进入烧杯,导致透析袋外的淀粉溶液浓度降低,A错误;
B、乙烧杯中透析袋外的葡萄糖可以进入透析袋,而透析袋内的水分子可以出来进入烧杯,所以烧杯中水分子增多,葡萄糖分子减少,所以乙烧杯中透析袋外的葡萄糖液浓度降低,B正确;
C、由于淀粉不可以通过透析袋,所以甲烧杯中透析袋内没有淀粉,加入碘液后不会出现蓝色,C错误;
D、乙烧杯中葡萄糖可以进入透析袋,葡萄糖是还原糖,所以乙烧杯加入斐林试剂后加热才可以变成砖红色,D错误.
故选:B.
❼ 透析后的酶液需要定容, 请问应用什么定容蒸馏水 还是提取缓冲液
一般是用缓冲液稀释定容,美国光谱医学
❽ 就是那个用透析法纯化蛋白酶用蒸馏水为什么不对啊
你如果是高中生,并且这属于生物题,那就是如下解释:1,用缓冲液更能保证蛋白质的内活性,用蒸馏水容虽说没有严重错误但对蛋白质活性的保持还是有风险的,若实验中不小心溅进去酸或碱,显然缓冲液更保险。
如果是更详细的解释,则除了上面,还有2,合适的缓冲液可以抑制蛋白质水解,保持将ph控制在等电点附近,防止蛋白质聚沉。3,蛋白质多亲水,缓冲液中离子可以防止过多水分子水合蛋白质。
至于别的缓冲液,最好还是用磷酸,原因:1,磷酸三元且弱酸,缓冲余地更大,而且磷元素比较亲生物。2,碳酸钠,碳酸氢钠易分解,亚硫酸根又时不时会产生有毒物质,硫代硫酸根又活泼,氢氟酸,次氯酸更不用说,常见的只有磷酸缓冲液最佳。
❾ 用sevage法去蛋白后,“多糖提取液用蒸馏水透析一天”这步具体应该怎么做用透析袋需要怎么前处理
将提取液装入透析袋中,两头封紧,放入蒸馏水中透析,透析袋无需前处理,用蒸馏水浸泡即可