A. 我做高效液相，用乙腈和水做流動相，雙泵，跑梯度，波長280nm，在乙腈多的期間會有好多雜質峰，怎麼辦啊急
用高比例的乙腈多沖一會，看你的情況要不就是柱子臟的厲害，要不就是乙腈不合格，先試著用高比例的乙腈（95:5）沖幾個小時看看，如果還是有很多雜峰的話建議換新的乙腈。
B. 流動相乙腈要過濾嗎
一定要過濾.
C. waters c18 5u 250*4.6,純乙睛、10%乙睛、甲醇、純水各作為流動相流量為1ml時，壓力多少正常
一般說來，衡量色譜柱的柱壓高低主要以甲醇為流動相時的柱壓為准。不同的液專相儀柱壓也略有差異。屬
你所提供的色譜柱，一般情況下，以甲醇為流動相，流速為1ml/min時，柱壓在700-900psi，壓差在50psi以下均為正常。
10%乙腈我沒用過，30%乙腈的一般在1500psi左右，10%乙腈應該比它低。
純水可能損壞色譜柱，純乙腈可能堵塞單向閥，不建議使用上述流動相。
D. 液相色譜配流動相乙腈甲醇水按10：20：70怎麼配
在反相鍵合相色譜中，鍵和固定相的極性小與流動相的極性，適用於分離非極性、極性低的化合物。
在反相鍵合相色譜法色譜柱中使用的是非極性鍵和固定相，它是將全多孔微粒硅膠載體，經酸活化處理後與含烷基鏈或苯基的硅烷化試劑反應，生成表面具有烷基的非極性固定相。目前，最常用色譜柱是採用十八烷基硅烷鍵合固定相，流動相為強極性溶劑水、甲醇、乙腈等。
E. 我用乙腈和水作為流動相跑液相開始挺順利，但是後來換了一瓶已經以後就出不來原來的峰了，這是怎麼回事呀
順序檢查1，流動相純度和流動相比例；2，樣品是否失效；3，色譜柱是否正常；4，儀器是否正常
F. 液相色譜裡面能只用水做流動相嗎
這個得看你的色譜柱。
一般的反相色譜柱不耐純水。如果用的話會特別費。專
我當初做過屬一個實驗，流動相是0.025mol/L的KH2PO4，色譜柱是C18柱，大概半個月換一根吧。
特殊的色譜柱可以耐受純水，但是可能分離效果不好，峰型也不一定好。
另外，純水很 容 易 長微生物。一般純凈水開瓶之後在25℃放置1天，過濾的速度就會緩慢，放三天就渾濁了。如果你的流動相是純水，那麼系統、色譜柱很容易堵塞。所以不建議使用。
G. 高效液相流動相中甲醇乙腈與水的配比的多少有什麼區別
一般對於C18柱，有機相比例越大，分離效果越好，但是不是所有比例都允許用的，有些比例會導致流動相極易產生氣泡而不能使用，所以一般不採用有機相和水相比例相近的配比。而且對於一些不溶於水的有機物，只能用高比例有機相流動相。
H. 高效液相色譜的流動相要經過哪些處理
流動相要先過濾，超聲脫氣後方可使用。
另外選用試劑是要選用色譜級的專，過濾時選擇合屬適的濾膜。流動相最好現配現用，不要保存太長時間。
使用旋轉蒸發儀上的真空泵 抽空氣20min，可以達到脫氣的作用。使用濾膜過濾掉雜質。
流動相必須過濾膜，用前要超聲除氣泡半個小時左右，否則基線不穩
儀器和色譜柱先要用有機溶劑（如乙腈等）好好清洗一下，待基線平衡後才能進一步工作，乙腈和水混合的流動性最好先超聲抽濾脫氣，准備工作做好了會節省好多時間。
若用色譜純的乙腈和超純水做流動相，流動相可以不用過濾膜，但超純水需要超聲約30分鍾脫氣。
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I. 用甲醇做流動相和用乙腈做流動相有什麼區別
乙腈(ACN)和甲醇(MeOH)是在反向色譜柱方法開發中廣泛使用的兩種常見溶劑。所以，除了知道乙腈比甲醇有更高的洗脫能力這一事實外，色譜分析人員還應該知道其他的特性嗎?讓我們來討論一些所有色譜專家都應該知道的問題。
首先，對流動相溶液的准備提出幾點意見。
只有純水溶液部分才能正確調整pH值。不要嘗試測量或調整有機或有機混合物的pH值。
制備二元混合物的方法有兩種，即V/V流動相溶液。
方法#1是用特定體積的「A」溶液填充一個量瓶，然後用「B」溶液將量瓶填滿。
方法#2是用指定數量的「A」溶液填充量筒(或容量瓶)；用指定數量的「B」溶液填充第二個量筒(或容量瓶)，然後將兩者的內容混合在一起。
無論您使用哪種方法，請在您的高效液相色譜法中完整地記錄它，以便任何閱讀它的人都能准確地復制它。上面描述的兩種方法在設計上都是正確的，但是會產生不同性質的結果。
紫外線吸光度
對於HPLC級溶劑(我們在HPLC分析中應始終使用HPLC級溶液)，乙腈的吸光度在這兩種溶劑中最低，非常適合低紫外光分析。甲醇在205-210nm左右有較高的紫外光吸收值，在非常低的紫外光范圍內略有限制。
溶劑溶解性
乙腈和甲醇在溶解多種緩沖鹽和樣品的能力上存在顯著差異。這些差異在方法開發中至關重要。
1.流動相溶解度
梯度運行顯示低重現性或失敗的一個常見原因可能與運行高濃度緩沖液和高濃度有機溶液有關。而含有濃度小於10mM鹽溶液的水溶液/有機溶液在大多數梯度條件下不太可能沉澱（最多98%是有機溶劑，而不是100%)，大多數與高效液相色譜應用一起使用的緩沖溶液會有更高的鹽濃度，當分析條件中有機溶劑含量較高時可能會從溶液中析出（導致堵塞，泄漏，插頭和不準確的結果）。在反向色譜法中選擇有機組成時要謹慎。確保使用的溶液在所有濃度下都是穩定的。還要驗證緩沖能力是否仍然存在，當使用高有機濃度時(當緩沖液被稀釋時)。
不確定鹽是否會溶解?只要把同樣濃度的溶劑混合起來做測試就行了。觀察它，有任何渾濁或可見顆粒嗎?你就可以得到你需要的答案。
甲醇總體上具有更好的溶解度特性(優於乙腈)，這意味著它在較高濃度下能更好地溶解大多數鹽，從而獲得更好的性能和更少的沉澱。
2.樣品的溶解度(對峰形和保留的影響)
液相色譜的一個基本要求是樣品完全溶解在流動相(初始流動相)中。在分析前，將樣品溶解在流動相或強度稍弱的溶液（不是更強的溶液）。這確保它將作為一個集中的段塞載入到柱的頂部，以改善峰形和RSD。如果樣品沒有完全溶解在流動相，那麼你實際上並沒有分析整個樣品。甲醇優於乙腈的另一個方面是它能完全溶解更多類型的樣品。這一改進的溶解度可能導致更好的整體峰形。甲醇的選擇性也不同於乙腈(不僅僅是洗脫強度)，這可能導致峰洗脫時間與預期的保留時間不同。這也是為什麼在開發反向方法時，我們總是嘗試使用含有乙腈或甲醇的不同流動相混合物的另一個原因。
永遠不要假設一種溶劑會比另一種溶劑更好。太多的色譜新手只使用乙腈作為他們方法開發的主要有機溶劑。請不要犯他們的錯誤，這樣的策略表明缺乏實踐經驗和知識。您必須首先分別嘗試它們（乙腈&甲醇）用你的樣品來評估結果（在適用的情況下最好從不同pH值的全面梯度開始）。如果您在最初的時間內測試了這兩種類型的溶劑，那麼將獲得回報，因為還沒有開發出能夠使用您自己的樣品來預測真正准確的結果的模擬器。可能會驚訝地發現，有多少樣品使用甲醇溶液顯示出更好的峰形和性能。如果沒有看到任何改善，至少你現在知道了，因為你已經嘗試過了，並且可以滿懷信心地前進。
背壓
乙腈的粘性比甲醇小，因此通常會導致整體柱壓和系統背壓降低。乙腈和水的混合物也會發生吸熱反應(冷卻溶液)，從而在溶液中捕獲氣體。如果你預先混合你的流動相，讓它靜置幾分鍾後在制備。
甲醇比乙腈更粘稠。它還有一個不尋常的特性，就是甲醇和水的50/50混合物會產生一個比甲醇或水更高的系統和柱背壓。它的峰值壓力是由50/50的混合物所觀察到的。兩種溶液在開始混合釋放出一些氣體也會產生放熱反應。在制備溶液時，最好是讓溶液靜置幾分鍾，然後在高壓液相色譜系統中使用。