離子交換色譜分離蛋白質誰先

Ⅰ 關於液相色譜法純化蛋白質

凝膠過濾色譜法：來 解析度較高源，但是上樣量僅為柱體積的1%，而且對流速也有嚴格的限制
離子交換色譜法：根據目的蛋白質表面所含有的氨基酸殘基帶有的凈電荷分離蛋白質，但是解析度沒有凝膠過濾高
親和層析法： 根據生物分子的特異性分離目的蛋白，特異性很高，但是配件容易丟失 適合含有特異性的標簽的或者抗體
疏水色譜：根據疏水性來分離蛋白質，缺點是有的蛋白質在高鹽中溶解度降低，所以應用范圍受到限制，適合蛋白質表面含有較多疏水性氨基酸殘基的疏水性蛋白質

Ⅱ 離子交換色譜法簡介

離子交換色譜法（Ion Exchange Chromatography, IEC），一種起源於20世紀70年代並於80年代迅速發展的高效分析手段，特別適用於無機化合物，特別是無機陰離子的混合物分析。

該方法基於一個基本原理，即被分離的化合物與其固定相之間通過離子交換作用實現分離。固定相的核心是離子交換樹脂，其分子結構中分布著許多可電離的活性位點。在分離過程中，待分析組分中的離子會與這些活性位點發生離子交換，形成一個動態的離子交換平衡。在這個平衡狀態下，待分離離子與固定相中的固有離子競爭占據交換中心，隨著流動相的移動，這種競爭導致它們在流動相和固定相之間發生相對移動，從而實現了有效的分離。

離子交換色譜法是利用離子交換原理和液相色譜技術的結合來測定溶液中陽離子和陰離子的一種分離分析方法。凡在溶液中能夠電離的物質通常都可以用離子交換色譜法進行分離。現在它不僅適用於無機離子混合物的分離，亦可用於有機物的分離，例如氨基酸、核酸、蛋白質等生物大分子，因此應用范圍較廣。

Ⅲ 離子交換介質的結構

使用離子交換色譜進行細分級分離是較為常見的一種蛋白純化方式。它是根據蛋白質的電荷不同來分離蛋白質混合物，被分離的目的蛋白所攜帶的電荷能與離子交換劑中所帶的相反電荷相結合，而且這兩者之間的結合作用是可逆的，通過逐漸增加離子強度或改變洗脫液PH值的方式處理色譜柱，離子交換劑上結念差合的目的蛋白便可與洗脫液中的離子發生交換而被洗脫到溶液當中。由於不同蛋白質的電荷不同，其與離仔則皮子交換劑的結合能力也不同，所以根據蛋白洗脫到溶液中的先後順序來進行提取，就可以輕松分離出我們需要的目標蛋白。

離子交換劑的介質種類還可分為離子交換樹脂、離子交換纖維素和離子交換凝膠等。強離子交換樹脂保持離子化的PH值范圍較寬，而弱離子交換樹脂若想保持離子化，就只能在很窄的PH值范圍內進行處理。離子交換色譜的優點是具有極高的解析度，因此可以通過放大規模的方式直接應用於工業生產中。盯返根據數據統計結果可知，大多數蛋白質的靜電荷是為負值，因此陰離子交換色譜的應用在純化蛋白領域的最為廣泛。選擇離子交換介質時，首先要考慮的一點就是目的蛋白的分子大小，因為蛋白分子的大小不但會影響介質上的帶電基團，還會影響介質對蛋白分子的動力載量，從而影響分離的效果和速度。

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Ⅳ 離子交換層析中流出物質順序是什麼

若用離子交換層析分離物質，以蛋白質為例，離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂；而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。

由於蛋白質也有等電點，當蛋白質處於不同的pH條件下，其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質，所以這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。

反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質，結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。

(5)離子交換色譜分離蛋白質誰先擴展閱讀：

對於離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉澱的顆粒，以保證有較好的均勻度，對於已溶脹好的產品則不必經這一步驟。

溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀鹼處理，使之成為帶H+或OH-的交換劑型。陰離子交換劑常用「鹼-酸-鹼」處理，使最終轉為-OH-型或鹽型交換劑；對於陽離子交換劑則用「酸-鹼-酸」處理，使最終轉為-H-型交換劑。

梯度不要上升太快，要恰好使移動的區帶在快到柱末端時達到解吸狀態。目的物的過早解吸，會引起區帶擴散；而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。

Ⅵ 為什麼說離子交換色譜法是分離蛋白質的最佳方法

它是根據蛋白質的組成物質氨基酸的物理性質（基於氨基酸電荷行為）為分離基礎的方法。相對透析和超過濾及凝膠過濾來說，可以針對多種蛋白質中的某一種（前提是知道蛋白質的氨基酸組成及其離子交換樹脂的親和度及洗脫強度）進行分離。（而透析和超過濾還有凝膠過濾方法更大的取決於相對分子質量及其結構 分離出的單一蛋白質純度相對要低 並且凝膠過濾要求凝膠對要求組分不能有吸附作用 適用性較低 ） 相對鹽溶和鹽析來說，分離單一蛋白質的純度要高，且更好的保留其天然理化性（鹽溶要求蛋白質分子吸附某一鹽離子從而改變其溶解性 但有些蛋白質吸附某些鹽離子後其蛋白質構象及理化性會發生改變）。 相對有機溶劑分級分離法，更好的保留其天然理化性（有機溶劑分類法易造成蛋白質不可逆變形 且適用范圍窄） 相對凝膠電泳和等電聚焦來說 更易於實現大量制備分離 且不改變蛋白質結構和功能（電泳會影響蛋白質結構 且操作繁瑣 成本高） 相對親和層析來說 它更加易於實現且成本低廉效果也不錯（親和層析需要制備其配體並與載體交聯 因而制備難且成本較高）
PS: 最好的分離方法不是例子交換色譜法 而是高效液相色譜法 相對離子交換色譜來說有著更高的效率、更高的解析度和過柱速度