㈠ 用離子交換法純化蛋白如何選定緩沖液
也可以用AEC，主要以流穿模式做。sspxiaoji(站內聯系TA)用陽離子交換柱，可以考慮pH6.0-7.0的緩沖液，因內為容大部分蛋白質的等電點在這附近，帶電荷少，這樣容易穿透除去其他雜蛋白。而你的目的蛋白PI在11，掛柱應該比較牢固。但是有個問題需要注意，PH離你的目標蛋白PI太遠，有可能導致掛柱後難以洗脫。
㈡ 關於液相色譜法純化蛋白質
凝膠過濾色譜法：來 解析度較高源，但是上樣量僅為柱體積的1%，而且對流速也有嚴格的限制
離子交換色譜法：根據目的蛋白質表面所含有的氨基酸殘基帶有的凈電荷分離蛋白質，但是解析度沒有凝膠過濾高
親和層析法： 根據生物分子的特異性分離目的蛋白，特異性很高，但是配件容易丟失 適合含有特異性的標簽的或者抗體
疏水色譜：根據疏水性來分離蛋白質，缺點是有的蛋白質在高鹽中溶解度降低，所以應用范圍受到限制，適合蛋白質表面含有較多疏水性氨基酸殘基的疏水性蛋白質
㈢ 離子交換層析基本信息
離子交換層析是一種利用物質的電荷特性進行分離和純化的技術。其核心是基質，通常是帶有電荷的樹脂或纖維素。這些基質根據其電荷性質可分為兩類：陰離子交換樹脂，帶有正電荷，和陽離子樹脂，帶有負電荷。
在蛋白質分離純化過程中，離子交換層析的原理基於蛋白質的等電點特性。當蛋白質處於不同的pH環境中，其帶電狀態會發生變化。陰離子交換樹脂會結合帶有負電荷的蛋白質，使得這些蛋白質被吸附在柱子上。要將它們分離出來，可以通過逐步提高洗脫液中的鹽濃度，結合較弱的蛋白質首先會脫落下來。
相反，陽離子交換樹脂結合的是帶有正電荷的蛋白質。這些蛋白質的洗脫則需要採用不同的策略，如增加洗脫液中的鹽濃度或者提高其pH值，這樣結合強度較弱的蛋白質會先被釋放出來。通過這樣的方法，離子交換層析能夠有效地實現蛋白質的分離和純化。
離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。1
㈣ 離子交換層析法分離純化蛋白質有哪些局限性
1，離子交換樹脂固定床的床層壓力會隨著分離過程的進程而不斷加大，需要重回新填充答。同時，也造成固定床填充過程操作麻煩，而且密封性要求高。2，蛋白質分離純度問題，如果在出峰之後再行切換接收餾分，而在峰行下降後提前切換，雖可以保證純度，但蛋白分離收率則會下降。3，由於交換層析介質決定，不同蛋白質相互分離效果也不確定，這種分離，也易造成各蛋白峰重疊，造成分離純度下降。4，自動化程度不高。主要也是受固定床以及樹脂交換飽和當量無法保持長期穩定造成的。無法像液相色譜柱那樣，可以在標樣標定後，建立方法，自動分離目標蛋白。5，不過，規模化分離純化蛋白質過程，使用這種層析法，還是具有一定優勢的。
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詳細資料請參考：
離子交換層析: http://proct.bio1000.com/100474/