1. 粗多糖的提取中，用了6次的EDAE凝膠層析柱流速過慢，怎樣去活化
EDAE是哪種凝膠柱？
是不是弱陰離子交換柱DEAE？
如果是DEAE的話給你一點清洗的參考
一，在位清洗
1， 用2M的NaCl至少清洗2個柱體積。
2， 用1M的NaOH 至少清洗4個柱體積。
3， 用2M的NaCl至少清洗2個柱體積。
4， 用至少2個柱體積的蒸餾水潤洗層析柱。
二，去除沉澱的蛋白質：
1， 注入一個柱體積的胃蛋白酶（1mg/ml in 0.5M NaCl,0.1M acetic acid）。室溫過夜或37°作用1小時。
2， 用至少2個柱體積的蒸餾水潤洗層析柱。
3， 用至少4個柱體積的儲存緩沖液沖洗。
也可以選用如下操作
1， 用6M鹽酸胍沖洗2個柱體積。
2， 立即用pH7-8的緩沖液沖洗至少5個柱體積。
3， 用至少2個柱體積的蒸餾水潤洗分離柱。
4， 用至少4個柱體積的儲存緩沖液沖洗。
三，去除脂類，疏水結合蛋白質或脂蛋白：
1， 如需徹底除去此類污染物，可使用有機溶劑或去污劑。
2， 在使用有機溶劑前，用蒸餾水沖洗填料至少4個柱體積以避免鹽類沉澱於層析柱中。
3， 在使用有機溶劑或溶液時，需要減小流速以避免分離柱超壓。
4， 清洗溶液最大濃度如下，100%的異丙醇，100%的甲醇，100%的乙腈，2M的氫氧化鈉，75%的乙酸，100%的乙醇，離子性或非離子型去污劑。
5， 避免使用陰離子去污劑。
2. 多糖分離純化—離子交換層析和柱層析
多糖，與蛋白質一樣，對生命過程起著關鍵作用，其復雜結構直接決定了其特性和功能。要深入理解多糖，分離純化步驟至關重要。其中，離子交換層析和凝膠層析是常用的手段。
離子交換層析在多糖純化中應用廣泛，其根據多糖特性，選擇合適的陽離子、陰離子或硼砂交換劑，如DEAE cellulose、DEAE Sephadex（葡聚糖）、DEAE Sepharose（瓊脂糖）系列。以DEAE cellulose-52為例，它作為陰離子交換柱，其填料二乙氨乙基纖維素帶有正電荷，能有效分離中性和酸性多糖，如果膠，通過鹽溶液洗脫，中性糖先被洗脫，陰離子多糖隨後。通過檢測洗脫液糖含量，形成洗脫曲線，實現不同多糖的分離。
相比之下，凝膠層析則側重於分子量的分離。其原理是利用分子篩特性，大分子先流出，小分子後流出，如Sephadex G系列填料，如G-15、G-25用於寡糖分離，G-100和G-200則適用於大分子多糖。通過觀察洗脫曲線，可以精確收集不同分子量的樣品。
3. 多糖的純化方法與哪些
多糖純化：
a、分部沉澱法：根據各種多糖在不同濃度的低級醇或丙酮中具有不同溶解度的性質，逐次按比例由小到大加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同濃度下析出的沉澱，經反復溶解與沉澱後，直到測得的物理常數恆定（最常用的是比旋光度測定或電泳檢查）。這種方法適合於分離各種溶解度相差較大的多糖。為了多糖的穩定，常在pH7進行，唯酸性多糖在pH7時－COOH是以－COO` 離子形式存在的，需在pH2－4進行分離，為了防止苷鍵水解，操作宜迅速。此外也可將多糖製成各種衍生物如甲醚化物、乙醯化物等，然後將多糖衍生物溶於醇中，最後加入乙醚等極性更小的溶劑進行分級沉澱分離。
b、鹽析法：在天然產物的水提液中，加入無機鹽，使其達到一定濃度或飽和，促使有效成分在水中溶解度降低沉澱析出，與其它水溶性較大的雜質分離。常做鹽析的無機鹽的有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。
c、季銨鹽沉澱法：季銨鹽及其氫氧化物是一類乳化劑，可與酸性糖形成不溶性沉澱，常用於酸性多糖的分離。通常季胺鹽及其氫氧化物並不與中性多糖產生沉澱，但當溶液的PH增高或加入硼砂緩沖液使糖的酸度增高時，也會與中性多糖形成沉澱。常用的季銨鹽有十六烷基三甲胺的溴化物（CTAB）及其氫氧化物（cetyl trimethyl ammonium hydroxide，CTA－OH）和十六烷基吡啶（cetylpyridinm hydroride，CP－OH）。CTAB或CP－OH的濃度一般為1％－10％（W/V）的多糖溶液中，酸性多糖可從中性多糖中沉澱出來，所以控制季銨鹽的濃度也能分離各種不同的酸性多糖。值得注意的是酸性多糖混合物溶液的PH要小於9，而且不能有硼砂存在，否則中性多糖將會被沉澱出來
d、柱層析：
纖維素柱層析：纖維素柱層析對多糖的分離既有吸附色譜的性質，又具有分配色譜的性質，所用的洗脫劑是水和不同濃度乙醇的水溶液，流出柱的先後順序通常是水溶性大的先出柱，水溶性差的最後出柱，與分級沉澱法正好相反。
纖維素陰離子交換柱層析：最常見的交換劑為DEAE－纖維素（硼酸型或鹼型），洗脫劑可用不同濃度的鹼溶液、硼砂溶液、鹽溶液等。此方法目前最為常用。它一方面可純化多糖，另一方面還適於分離各種酸性多糖、中性多糖和粘多糖。
凝膠柱層析：凝膠柱層析可將多糖按分子大小和形狀不同分離開來，常用的凝膠有葡聚糖凝膠（sephadex G）、瓊脂糖凝膠（sepharose bio－gel A）、聚丙烯醯胺凝膠（bio－gel P）等，常用的洗脫劑是各種濃度的鹽溶液及緩沖液，但它們的離子強度最好不低於0.02。出柱的順序是大分子的先出柱，小分子的後出柱。由於糖分子與凝膠間的相互作用，洗脫液的體積與蛋白質的分離有很大的差別。在多糖分離時，通常是用孔隙小的凝膠如sephadex G－25、G－50等先脫去多糖中的無機鹽及小分子化合物，然後再用孔隙大的凝膠sephadex G－200等進行分離。凝膠柱層析法不適合於粘多糖的分離。
4. 關於液相色譜法純化蛋白質
凝膠過濾色譜法：來 解析度較高源，但是上樣量僅為柱體積的1%，而且對流速也有嚴格的限制
離子交換色譜法：根據目的蛋白質表面所含有的氨基酸殘基帶有的凈電荷分離蛋白質，但是解析度沒有凝膠過濾高
親和層析法： 根據生物分子的特異性分離目的蛋白，特異性很高，但是配件容易丟失 適合含有特異性的標簽的或者抗體
疏水色譜：根據疏水性來分離蛋白質，缺點是有的蛋白質在高鹽中溶解度降低，所以應用范圍受到限制，適合蛋白質表面含有較多疏水性氨基酸殘基的疏水性蛋白質
5. 離子交換層析具體操作
離子交換層析操作詳解
1. 預處理和裝柱是離子交換層析的關鍵步驟。首先，對於離子交換纖維素，需要流水沖洗去除碎屑，以確保均勻度。若產品已溶脹，可跳過這步，但需確保其成為帶H+或OH-的交換劑型。陰離子交換劑通常採用「鹼-酸-鹼」處理，轉變成-OH-或鹽型，陽離子交換劑則用「酸-鹼-酸」處理，變為-H-型。裝柱前，平衡至所需的pH和離子強度，並減壓排除氣泡。為了防止顆粒分層，裝柱時需適當加壓，確保柱床緊實，以提高解析度。裝好後，需用起始緩沖液淋洗，直至達到平衡狀態方可使用。
2. 加樣與洗脫階段，樣品應與起始緩沖液保持相同的pH和離子強度，選擇的pH值應在交換劑與結合物相反電荷的范圍內，同時離子強度要低，可通過透析、凝膠過濾或稀釋來調整。不溶物需預先除去。合適的上樣量是關鍵，一般不超過柱子的負荷能力，上樣量通常為交換劑總量的1%-5%。洗脫樣品時，可通過改變pH或離子強度，或採用階段洗脫或連續梯度洗脫法，後者通過控制兩個容器中緩沖液濃度的梯度變化來達到最佳分離效果。在洗脫過程中，需確保洗脫液體積充足，梯度上限足夠高且上升速度適中，以防止目的物過早或過晚解吸。
3. 洗脫後的分析，以5-10毫升/管收集洗脫液，通過檢測方法（如生物活性測定或免疫學測定）確定目的物位置，然後進行回收。對於離子交換劑的再生，如纖維素可用NaCl和NaOH溶液處理，脂溶性物質則需非離子型去污劑或乙醇清洗。保存時，需添加防腐劑，陰離子交換劑通常使用氯已定，陽離子交換劑則使用乙基硫柳汞，有些產品可添加疊氮鈉。
離子交換層析操作需嚴格把控各個步驟，確保樣品處理得當，洗脫過程有效，以實現理想的分離效果。
離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。1
6. 疫苗提純分離用離子交換層析工藝介紹
陰離子交換層析去除乙腦疫苗製品中殘留DNA，其特點在於將乙腦疫苗濃縮液經過凝膠過濾層析初步純化後，利用陰離子交換層析，DNA被牢牢吸附在色可賽思離子交換介質上，而乙腦病毒蛋白則直接穿透，有效去除宿主DNA，解決乙腦疫苗行業面臨的問題。
2010版《中國葯典》提高人用狂犬病疫苗中蛋白含量標准，需確保純化後的病毒液總蛋白不超過80μg/劑，牛血清蛋白殘留低於50ng/劑，宿主細胞蛋白殘留不超過24μg/劑。生物葯企需優化純化工藝，利用凝膠層析與色可賽思離子交換層析相結合，以提高疫苗純化效果。層析柱的選擇、上樣體積、速度、濃度與抗原收集點，均影響疫苗純化效率。結合兩種層析柱，可優化疫苗純化，確保質量與效率。
採用離子交換法去除流腦多糖疫苗粗糖中的雜蛋白，結合高效陰離子交換色譜與電化學檢測，快速檢測Hib結合疫苗中殘余溴化氰與CDAP，為疫苗生產提供可靠檢測方法。同時，HPAEC-PAD檢測法測定腦膜炎球菌多糖含量，驗證方法的專屬性、精密度與准確性，與傳統方法比較，結果一致，可用於疫苗成品多糖含量檢測。
百日咳疫苗的分離純化通過ELISA與還原性SDS-PAGE方法研究脲的影響，加入2mol/L脲作為穩定劑，顯著提高色可賽思離子交換層析和凝膠過濾層析效果。
利用Sabin株脊髓灰質炎病毒純化的離子交換層析條件，對粗純液進行IEC，優化純化步驟，提高疫苗質量。
重組幽門螺桿菌過氧化氫酶脂質體疫苗的制備中，陰離子交換層析和凝膠過濾層析分離純化Kat重組蛋白，薄膜分散法制備疫苗，通過透射電鏡測定粒徑，為疫苗提供有效免疫保護。
離子交換層析純化人輪狀病毒滅活疫苗，通過色可賽思離子交換柱層析、透析脫鹽、過濾除菌滅活等步驟，制備出總蛋白去除率為99.69%、保持良好抗原性和免疫原性的疫苗。
狂犬病疫苗中去除殘余DNA，優化培養條件、選擇合適孔徑的超濾膜包、增加陰離子交換柱工藝，以降低Vero細胞DNA殘留量，保證疫苗質量。
利用大腸桿菌表達系統制備HPV-6類病毒顆粒，研究其免疫原性，通過純化、體外組裝、形態檢測與中和實驗，評價誘導的抗HPV-6/11中和抗體水平，簡便高效制備具有免疫原性的HPV-6疫苗。