離子交換色譜法等度梯度洗脫

A. 等度洗脫和梯度洗脫的區別

等度洗脫和梯度洗脫改變與不改變的配比不同。

等度洗脫意思是：

等度洗脫是科學名稱，是在樣品組分的分析周期中，流動相的組成比例和流速恆定不變的洗脫方式。與梯度洗脫對應。液相色譜操作中，等度洗脫即在樣品組分的分析周期中用梯度洗脫還是等度洗脫，主要看雜質的情況。

同一物質有梯度洗脫和等度洗脫兩種條件時，梯度洗脫的認可度較高。雜質與雜質、主峰、溶劑峰的分離度一定要好（不好的話就要用梯度洗脫）。雜質和主成分極性相差很大，雜質一定要全部都能洗脫出來（有時等度情況下沖兩三個小時雜質也沖出不來，就必須考慮用梯度）。

B. 脫鹽過程中,物質洗脫出來的順序如何,為什麼

順序：使用高效液相色譜儀進行分析時，常用兩種洗脫方式，先用等度洗脫，再用梯度洗脫。

使用梯度洗脫時，也會使干擾分離的強保留雜質組分在較短的時間內從柱中清楚，使色譜柱保持干凈狀態，以進行下一次的分析。梯度洗脫一般是指流動相的組成隨分析時間的延長呈現線性變化，即線性梯度洗脫，可用於反相和正相高效液相色譜儀及離子對色譜法。

原理和分類

液相色譜法的分離機理是基於混合物中各組分對兩相親和力的差別。根據固定相的不同，液相色譜分為液固色譜、液液色譜和鍵合相色譜。應用最廣的是以硅膠為填料的液固色譜和以微硅膠為基質的鍵合相色譜。根據固定相的形式，液相色譜法可以分為柱色譜法、紙色譜法及薄層色譜法。按吸附力可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠滲透色譜。

C. 色譜法的洗脫有哪兩種方式

使用高效液相色譜儀進行分析時，常用兩種洗脫方式，一種為等度洗脫，另一種為梯度洗脫。

用等度洗脫進行色譜分離時，由不同溶劑構成的流動相的組成，如流動相的極性、離子強度、pH值等，在分離的全過程中皆保持不變。用梯度洗脫進行色譜分離時，在洗脫過程中含2種或兩種以上不同極性溶劑的流動相組成會連續或間歇地改變，其間可調節流動相的極性，改善樣品中各組分間的分離度。

使用梯度洗脫時，也會使干擾分離的強保留雜質組分在較短的時間內從柱中清楚，使色譜柱保持干凈狀態，以進行下一次的分析。梯度洗脫一般是指流動相的組成隨分析時間的延長呈現線性變化，即線性梯度洗脫，可用於反相和正相高效液相色譜儀及離子對色譜法。

(3)離子交換色譜法等度梯度洗脫擴展閱讀：

注意事項：

1、流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45μm或更細的膜過濾)。

2、流動相過濾後要用超聲波脫氣，脫氣後應該恢復到室溫後使用。

3、不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。

4、使用緩沖溶液時，做完樣品後應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然後用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鍾以上，以充分洗去離子。對於柱塞桿外部，做完樣品後也必須用去離子水沖洗20mL以上。