10L超濾濃縮儀

1. 生命科學方面近幾年的高端儀器誰知道有哪些

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建議你去這個中國生物器材網看看。

離心機 天平
超速，高速冷凍，大容量，台式，其他 超微量，分析，精密，其它天平及附件
培養箱/乾燥箱 植物生理生態
CO2/三氣，低溫，植物，生化，雜交，恆溫/恆濕，厭氧，黴菌，烘箱/乾燥箱，其他 植物生理，土壤/生態
同位素/發光檢測 凈化安全消毒
液閃儀，γ計數器，其他同位素，發光檢測 超凈台，生物安全櫃， 消毒/滅菌器，安全防護
顯微系統 轉基因儀
生物，倒置，實體，電子/掃描探針，顯微成像，微操縱，共聚焦，附件及其他/濾波片 轉基因儀
電泳設備 生理/病理/葯理/毒理
電泳儀，電泳槽，國產凝膠成像，進口凝膠成像 電生理儀器，膜片鉗，腦立體定位儀，切片機，動物行為，動物實驗儀器，動物活體成像
檢驗儀器 各類泵
酶標儀，洗板機，微生物，滲透壓，其他檢驗儀器 恆流泵/蠕動泵，注射泵，真空泵及其它泵
PCR 超聲波儀器
普通PCR， 梯度PCR， 定量PCR 清洗，破碎
紫外設備 生物晶元
透射/分析儀，紫外/核酸蛋白檢測儀 生物晶元，點樣儀，掃描儀，晶元分析軟體
光譜/色譜/質譜/層析 樣品處理
光譜/分光光度計，液相，氣相，質譜，氣體發生器 攪拌，勻漿，混合，研磨，均質，搖床/振盪，脫色搖床，移液工作站，核酸提取純化，樣品管理，收集器
低溫/製冷/恆溫 實驗工具耗材
低溫冰箱，液氮容器，凍干機，製冰機，恆溫槽/水浴， 冷卻水循環， 金屬浴，其他溫度設備/程序降溫儀 移液器類，培養類，過濾層析和雜交，試管和離心管，其他實驗耗材
理化分析 試劑
酸度計，離子計/電導計，粒度儀，旋光儀，其它理化分析/SPR 分子生物學，生化，細胞，血清/培養基，免疫/診斷檢測，抗體，神經，標准品/對照品，食品檢測，植物，動物，其他試劑
合成/測序/細胞分析/蛋白質組 實驗動物/細胞株
DNA/有機/多肽合成，測序/基因分析，細胞分析，蛋白質組 實驗動物，動物器具，細胞株/菌種
超濾超純濃縮 實驗室傢具
純水，超濾/微濾，濃縮儀，旋轉蒸發儀 實驗台，通風櫃
發酵罐/細胞反應器 其它
國產發酵罐，進口發酵罐，細胞反應器，發酵罐配套設備 葯檢/制葯，環境監測，食品飲料，圖書，其它

我覺得最貴的那些儀器就是最先進的儀器了。比如個人化操作基因組測序儀
、發現Ion Torrent
Ion Torrent, 個人化操作基因組測序儀(PGM?), 是市場上相較其他測序技術，更簡單，經濟和具有強大的可擴展性的測序平台。PGM?台式系統的設計配合革新性的半導體晶元技術，使整個平台具有極高的擴展性和快速完成測序的性能。

Ion Torrent 技術通過專有的大規模並行半導體感應器，對於DNA 擴增時產生的離子流，實現直接和實時的檢測。當試劑通過集成的流體通路進入Ion Torrent半導體晶元中，密布於晶元上的反應孔立即成為上百萬個微反應體系。這種獨特的流體體系，微體系機械設計和半導體的技術組合，使我們得以快速直接的將遺傳信息翻譯成數碼的DNA測序結果，得到大量高質量的測序數據。

個人化操作基因組測序儀，配合Ion Torrent的半導體晶元，反應試劑盒和計算機伺服器，數據分析套件，提供您最尖端的測序解決方案。

發現『擴展』
比擬半導體技術升級的強大擴展性
? 技術的基礎以超過千億美金規模的半導體產業為支持
? 晶元密度的提升以40年來累積驗證的摩爾定律為證據
? 晶元產量的擴展以四百家標准化半導體生產企業為選擇

發現『簡捷』
簡單真實的生物化學原理
? 真實的離子流測序原理
? 無修飾的核酸，無需酶化學級聯，無需任何熒光和化學發光
? 經濟的標准試劑

發現『快速』
直接，實時的測序技術
? 實現更多的研究和市場應用
? 快速的運行時間提速研究周期和文章的發表
? 革新性的半導體測序晶元，無需光學檢測和掃描

測序和分析流程
Ion Torrent 測序流程標準的要素包括，從准備隨機片段的DNA 文庫或者擴增子文庫，到樣本的PCR 擴增和在PGM?的測序運行。

完成整個PGM?的測序運行後，數據將會自動的導入專用的Torrent 預裝分析套件的計算機伺服器。在這里，原始的測序信號會轉化成鹼基序列並且以工業標準的SFF或者FASTAQ格式存儲起來。這些測序數據可以通過眾多商業化的軟體進行後續不同應用的分析或者全新基因組的拼接。

A. DNA/RNA 樣本
B. 相應的文庫准備
C. 測序樣本准備
D. 測序反應
E. FASTQ 數據格式的測序結果

Torrent 數據分析軟體
Ion Torrent PGM 到 Torrent 伺服器和資料庫 到終端用戶電腦

2. 如何挑選一款好的氮吹儀

這個首先需要確定您是做什麼樣的樣品，樣品濃縮的要求，一般氮吹儀大體是分為乾式氮吹儀和水浴氮吹儀，這兩種都是可以達到主要作用的，其工作原理是通過將氮氣吹入加熱樣品試管內，使樣品中的溶劑快速蒸發、分離，因為氮氣一般不會和樣品反應，從而達到樣品無氧濃縮的目的，保持樣品更純凈。
那麼乾式氮吹儀和水浴氮吹儀的區別是什麼呢？
乾式氮吹儀一般是鋁塊導熱或者是砂導熱，一般溫度可以達到100攝氏度以上，就是加熱溫度可以很高，在高溫下不會有水蒸氣干擾樣品，但是它也有一個缺點就是他們的加熱均勻性不是很好。
水浴氮吹儀就是靠水介質來導熱，所以它的溫度只能到100攝氏度，如果您加熱到100攝氏會有水蒸氣，在密閉環境下有可能幹擾樣品，但是它的優點就是加熱均勻性會很好，以前一般都是使用水浴式的。
所以客戶在選擇時，主要考慮濃縮樣品的特性，需要在什麼溫度下進行，乾式溫度高，方便，不需要加水，水浴加熱更均勻，需要定期換水，在確定好是水浴還是乾式後，價位的高低主要是儀器的智能化程度的高低，也就是使用的方便度還有廣泛性來確定的。

3. kd濃縮儀的用法

濃縮瓶接梨形瓶，再接分流柱，再接冷凝管，最後接減壓受器即可。

示例圖：

濃縮效應：生物化學上指在進行SDS-PAGE（SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳）中由於凝膠孔徑的不連續性（2種孔徑）、緩沖液離子成分的不連續性(2種緩沖體系)、PH值（3種PH）和電位梯度的不連續性使得蛋白質分子在濃縮膠和分離膠的界面處濃縮成一條狹小的縫帶，成為濃縮效應

4. 滲濾液的濃縮液是如何產生的

滲濾液處理如果排放標準是3級標準的話，現在主流是過MBR膜就可以直接排放的，就不存在濃縮液！排放標準是一級標準的話，處理後端一般會有超濾，納濾和反滲透膜，濃縮儀是由這三種膜處理後產生的，一般產生量為總進水量的30左右！

5. 什麼是氮吹儀，氮吹儀起到的作用是什麼

氮吹儀通常是將氮氣吹入加熱樣品的表面進行樣品濃縮，具有省時、操作方便、容易控制等特點，可很快得到預期的結果。廣泛應用於農殘分析、商檢、食品、環境、制葯、生物製品等行業及用於液相、氣相及質譜分析中的樣品制備中。在制葯、食品安全、特別是嬰幼兒乳品、醫學測試、農葯殘留方面發揮了實際效用，為氣相色譜（GC）、液相色譜（HPLC）等分析手段中樣品的制備和處理提供了省時高效的平台，是固相萃取技術的最佳配套設備。

北京眾信佳儀科技有限公司是專門從事實驗室研發、生產、銷售及服務於一體的技術公司，公司產品ZX-DCG氮吹儀可適用的離心管、試管、錐形瓶等容器，電動升降系統，方便觀察樣品吹掃狀況，取放樣品更方便快捷。每支吹氣針管的高度可獨立調節，有利於不同批次，不同樣品的實驗。

6. 實驗室中蒸發濃縮液體需要的儀器有哪些

實驗室濃縮裝置有很多種類，針對不同的試料特性，採取的濃縮的方式也不一樣。主要有以下幾種濃縮方式：旋轉蒸發儀濃縮、氮氣吹掃濃縮、試管濃縮、薄膜濃縮、離心濃縮、漩渦振盪濃縮等等。

7. 糞便中膽汁酸的檢測方法

取已凍干糞便，研磨破碎後加入乙醇，研磨後超聲，經離心後，取上清液移入收集管，然後用乙醇超聲提取一遍，再用異丙醇提取殘留的膽汁酸，合並三次提取的上清液於收集管中冷凍乾燥。凍干後用乙腈水溶液復溶，經過濾後進行液相色譜質譜聯用儀器分析。

公司靶向代謝組學前處理：
1）取液體樣本50 μL，加入200 μL含適量內標的甲醇勻漿，2500 r/min 震盪10 min，將震盪後的樣本放入-20℃冰箱，放置10 min；
2）12000 r/min離心10 min，離心完後取上清液，放入濃縮儀中濃縮；
3）濃縮完成後用100 μL 50%甲醇水復溶，待LC-MS/MS上機。
文獻
使用90μL血漿提取BA。向樣品中添加900μL乙腈進行蛋白質沉澱。樣品在室溫下在振動台上培養1小時，然後在12000g下旋轉10分鍾；收集上清液並在快速真空中乾燥。
乾燥樣品在400μL 50%甲醇復溶，通過0.22μm Costar Spin-X離心管過濾，並用於分析。

稱取糞便樣本 30mg，加入 200μL 預冷超純水進行 MP 勻漿處理，加入 1000μL 預冷
甲醇及 10μL 內標，渦旋混合，-20℃孵育 20min 沉澱蛋白；4℃條件下，14000rcf 離
心 15 min，取上清真空乾燥；質譜檢測時加入甲醇-水（1:1，v/v）復溶，4℃條件下，
14000rcf 離 15min，取上清進樣分析。
1.3.4.2 小鼠糞便中TBA含量的測定

將採集的小鼠糞便進行真空冷凍乾燥，去除糞便中水分。取20 mg乾燥後的小鼠糞便，加入1 mL叔丁醇溶液（體積比1∶100），渦旋混勻，37 ℃水浴15 min後渦旋混勻10 s，最後在4 ℃、10 000×g離心2 min取上清液。按照TBA試劑盒說明書測定上清液中TBA含量。

將冷凍乾燥後的糞便粉碎後，取糞便100 mg，加入10 mL蒸餾水後勻漿，加甲醇8 mL，然後超聲 1 h，取出，至提取液冷卻至室溫後，於常溫下離心10 min，轉速為5000 r/min，然後取上清液用於TBA含量的測定。

8. 樣本前處理（三）

蛋白提取的質量控制

我們通過上一篇筆記里介紹的各種方法把蛋白質提取出來以後，這事兒還沒完，因為我們需要對提取出來的蛋白進行一下質控，以確認是否成功提取出了足夠的蛋白，是否有污染等。

如上圖，質量控制分兩個部分：

含量測定 ：檢測是否有充足的蛋白被提取出。注意上圖里提到的不兼容問題，如果你樣品里加過SDS，就不要用Bradford法來測定蛋白濃度，而可以選用BCA方法；反之，如果你樣品里加入了還原劑，就不要用BCA方法來測定蛋白，可以選用Bradford法。

SDS-PAGE ：檢測蛋白的提取效率，以及是否有污染。比如我們上了50個樣，能看到的條帶卻很少，說明定量不準確。如果想從幾組樣品中尋找差異蛋白，特別需要做一次SDS-PAGE檢測同類樣品蛋白的提取效率。

以上圖為例，0號樣品中間的條帶不見了，可能是提取蛋白不充分引起的差異，也可能是樣品本身的差異。我們可以重新提取一次，先排除是否是提取造成的差異；如果是樣品本身的差異，建議用label free的方法，每個樣品單獨做定量，而不要用iTRAQ或TMT標記定量，否則會因為中間這個高豐度蛋白的影響，而導致定量不準。

我們再看來幾種常見的問題，以及解決方法，如下圖：

情況1：提取出來的結果差異很大。這種情況需要重新提取，以檢測到底是提取不充分造成的差異，還是樣品本身的差異；

情況2：左邊是分子量marker,右邊是實際樣品，可以看到實際樣品的條帶很少，可能是提取不充分，需要重設提取參數，使用更劇烈的條件，更長的時間，重新提取；

情況3：橫紋、縱紋比較多，很可能是核酸或脂蛋白的影響，這種情況需要進行脫鹽處理，也就是利用脫鹽柱與肽段結合，而與其它物質不結合，從而達到去除污染的目的。

情況4：兩個條帶很類似，但一條明顯比另一條淡。可能造成這種情況的原因有哪些呢？第一種情況，由於這是同樣類型的樣品，比如都是小鼠肌肉組織，一個樣品的蛋白質抽提充分，而另外一個樣品蛋白抽提不充分，就會導致兩條帶不一樣，這種情況下需要重新抽提。還有一種可能，考慮到是等量上樣跑的SDS-PAGE，如果兩個條帶顯示出的蛋白含量差別很大，則可能因為參考的含量測定結果不準確引起的，這時候需要重新定量。

脫鹽

蛋白提取後，還需要做脫鹽處理，我們來看看可以用哪些方法實現。

超濾： 可以截留10kDa及以上的蛋白分子，適用於體積較小的樣品。操作步驟可以是，從100μL超濾濃縮到40μL，再加緩沖液至100μL，再超濾到40μL，反復幾次。事實上，超濾是很難把污染（比如SDS）完全去掉的，最終仍然會有極少量的污染物存在，但當這些污染物的濃度降到一定程度時，則樣品的純凈度我們認為是可以接受的了。

Tips :

樣品中的尿素濃度需要控制在1M以下才能不對樣品造成影響，我們提取蛋白時使用的是8M尿素，直接稀釋8倍的話，造成樣品體積太大，下一步加入酶後，則酶和蛋白的濃度會特別低，酶解效果受到很大影響。另外，體積太大處理起來也不方便。這時也可以使用超濾的方法，多步稀釋，將尿素的濃度降到1M以下。

透析 ：也是可以截留10kDa及以上的蛋白分子，適用於體積比較大的樣品，比如尿液，可以將鹽透析至外面的透析液里。

丙醇沉澱 ：-20℃丙酮（V樣品：V冷丙酮=1：3以上）沉澱2個小時以上。

C18色譜柱脫鹽法 ：Waters公司生產的XBridge C18色譜柱，利用柱子上的填料與蛋白結合，而鹽類物質則流穿過去，從而達到分離的目的。

還原烷基化及酶解

脫鹽完成以後，接下來我們就要進行相當重要的一步：還原烷基化及酶解。整個流程，大夥兒看下面這張圖：

這裡面有兩件事要先跟大夥兒聊聊。

首先，我們來說說為什麼步驟里要把丙酮沉澱放在烷基化以後。通過之前的學習，我們知道丙酮可以溶解樣品的去污劑、還原劑等，而蛋白是不會在丙酮中溶解的，而是會沉澱下來，這樣就達到了去除雜質的目的。

烷基化以後，球狀蛋白變成鏈狀，再通過丙酮沉澱去掉尿素或SDS等污染物，然後復溶（即重新溶解，以備下一步酶解操作），那麼鏈狀的蛋白比球狀蛋白的復溶效果會更好，可以避免因為復溶不充分而造成的損失。因此，丙酮沉澱要放在烷基化之後再做。

另外，關於酶切這一步，有些抗體如果只用胰酶進行酶切，由於酶切位點太少，導致切出來的肽段太長，不便於質譜檢測。這種情況下可以結合其它酶，比如Lys-C，進行多酶酶切，使肽段變得短一些。經過測試我們發現，用Lys-C+胰酶酶切，比只用胰酶酶切，可以提高10%-20%的鑒定率。

酶解需要在buffer體系下完成，比如25mM碳酸氫銨體系（易揮發，pH 7-8）最為常用，或者也可以使用TEAB（ triethyl ammonium bicarbonate，三乙基二乙胺鹽，10-100mM）。

Tips :

如果做iTRAQ（或TMT）標記，最好用TEAB，而不是碳酸氫銨體系。因為iTRAQ（或TMT）試劑是標記末端氨基，碳酸氫銨上的氨基也會被標記上，影響蛋白的標記效率。

酶的用量可以參考以下的公式：

W（酶）：W（底物）=1:20 – 1:50

此外，需要注意的是胰酶酶解的兼容性問題。胰酶只能耐受最多1M的尿素，且不能與SDS同時使用。

蛋白質及肽段的預分級

前面提過，質譜儀是一種離子飽和性儀器，高豐度蛋白的存在會對低豐度蛋白的信號產生抑制，並且質譜儀反應也需要一定的時間。例如，人的細胞內通常會表達20300種蛋白，它們酶解後，每種蛋白會產生10-20種肽段，那麼就有幾十萬種肽段，質譜很難同時檢測到這么多種肽段。所以對肽段混合物進行分級，可以降低檢測的難度，得到更多的肽段/蛋白鑒定結果。

我們既可以從蛋白水平進行分離，也可以從肽段水平進行分離，還可以將多種分離手段結合起來。從蛋白水平的分離，大家都比較熟悉吧？通常我們用SDS-PAGE或IEF等技術，利用蛋白質的分子量、形狀、等電點等理化性質的不同，將混合在一起的蛋白質分開。

第二種分離方案是在肽段水平上進行，根據肽段的不同性質，使用不同填料進行分離。

SCX（Strong Cation Exchange）：是以硅膠為基質的強陽離子交換柱，可以與陽離子結合，並通過buffer進行離子交換，將陽離子分離和洗脫出來，達到與其它不帶陽離子的肽段分離的目的。

SAX（Strong Anion Exchange）：硅膠鍵合季銨基團的強陰離子交換柱，可以與陰離子結合，並通過buffer進行離子交換，將陰離子分離和洗脫出來，達到與其它不帶陰離子的肽段分離的目的。

RPLC（Reverse Phase Liquid Chromatography）：反相液相色譜柱，與正相柱在表面鍵合極性官能團不同，反相柱的表面鍵合的是非極性的官能團，例如，鍵合十八烷基官能團，稱為C18柱，其它常用的還有C8，C4和C2等。這里我們選用C18柱，根據肽段疏水性的不同，達到分離的目的。

HILIC（Hydrophilic interaction liquid chromatography ）：親水色譜柱可以用來分離極性化合物。由於強極性肽段在反相色譜柱中保留情況都比較差，很難將它們分開，而親水色譜柱卻可以用來固定強極性的肽段，並結合高比例有機相與低比例水相組成的流動相，來實現分離的目的，且這樣的流動相組成尤其有利於提高電噴霧離子化質譜（ESI-MS）的靈敏度。

High pH - Low pH RPLC：用pH10的液相條件，結合pH2的RPLC酸性條件，進行分離。

Tips :

通常，我們通過RPLC與質譜聯用。因為RPLC體系是用水和乙腈，易揮發，不含鹽，可以直接送入質譜進行檢測。而像SCX/SAX這類正相柱，需要通過高鹽的體系將樣品洗脫下來，所以它與質譜不兼容。我們在做多級分離時，前面都會有各種鹽的洗脫，最後才是RPLC，然後就可以直接連質譜了。

多維分離：例如，先從蛋白水平進行分離，再從肽段水平進行分離，或者多種肽段水平的分級分離結合起來使用。接下來我們重點聊一下各種多維分離的策略和效果。

我們先來看看上面這張圖。左上角的「A圖「展示的是通過High pH - Low pH RPLC將樣品分成了40個餾分，然後進行叉開的合並，合並為20個餾分，這樣的合並可以讓樣品中的肽段分布更加均勻。

右上角的」B圖」展示的是通過SDS-PAGE進行分離，也分成20個餾分，然後用兩種合並方案，分別合並為5個餾分和6個餾分，這樣做的目的也是為了讓樣品的肽段分布更加均勻。

左下角的「C圖」針對同一種樣品，對High/Low pH RPLC和SDS-PAGE兩種分離策略進行了比較，發現經過兩種分離方法後，有5408個蛋白是都可以鑒定到的，另外有1951種蛋白是只在High/Low pH RPLC分離策略中鑒定到的，而用SDS-PAGE分離，則可以鑒定到其它389種蛋白。從這個圖上看，兩種方法有互補性。

右下角的四幅小圖說明，當我們在做分級分離時，分的級別越多，能鑒定到的蛋白也就越多。不過這種增長並不是呈線性關系的，分級的級數達到一定程度時，能鑒定到的蛋白數量的增長就會飽和。所以比較省時省力又能保證效果的做法時，選擇一個合適的分級數即可。

我們來看一下目前發表的文獻里，利用多級分離所能鑒定到的蛋白數量。

一篇2013年發表在MCP上的文獻報道，採用RP-RPLC兩級分離，分成常規的24個餾分，上樣量為100μg，在一天內能檢測到8000多個蛋白。

一篇2013年發表在Nat Comm上的文獻報道，先採用RP柱分級，再使用SAX分離，然後通過1米的長柱子反相色譜分離。樣品為人的胚胎幹細胞，上樣量仍然為100μg，在線分離8天檢測了9818個蛋白，如果分離時間延長到24天，則可以檢測13075個蛋白。

一篇2014年發表在Nat Method上的文獻報道，採用IEF（等電聚焦電泳，isoelectric focusing）與RPLC結合，樣品是人的上皮癌細胞，上樣量為800μg，分成了360個餾分，耗時超過15天，一共分析到13078個蛋白。

就像前面說到的，對蛋白及多肽分離的級數越多，能鑒定到的蛋白也就越多，但常常因為機時的限制，再加上這種變化趨勢到一定程度總會飽和，所以我們通常有個權衡。比如常規的分10個餾分，基本上可以鑒定到5000-8000個蛋白。如果是血清樣品，可以餾分更多一些，尤其是RPLC一維，如果分到40或60個餾分，再合並為10或20個餾分，比直接分成10個或20個餾分能鑒定到的蛋白要多30%左右！

Tips :

對於分餾分，通常是利用C18的色譜柱來分級分餾分，這個沒有試劑盒。

9. 【求助】超濾能否脫鹽和濃縮一步完成啊

昨天有個millipore的技術人員就是這樣說的~HarveyWang(站內聯系TA)本人主要是從發酵液中提取酶,文獻上一般的步驟是先用硫酸銨沉澱,然後透析,再用超濾濃縮,最後冷凍乾燥, 這要看你需要做多大的體積了。:) (1)硫酸銨沉澱法：我的觀點是，如果你1000 mL的發酵液的話，硫酸銨沉澱可以用，但是這浪費多少硫酸銨啊？！做學術研究可以，如果你的課題是計劃做提取酶的工藝和中試的話，這種硫酸銨沉澱並不有太大的實用性。 （2）超濾步驟的選用要看你的酶溶液有多大的體積。 如果發酵液的酶的量並不是很濃的話，例如50 mL 10 mg/L的酶量，用這種超濾膜會損失掉大部分你的目地酶，都粘到膜上去了，很難洗下來（稀的NaOH可以）。不能輕信某品牌銷售說的話，用用就知道了。如果你的濃縮液體積比較大，例如100-500 mL，酶的濃度也很高，這是可以用超濾膜的。 （3）對於小體積的脫鹽透析，透析袋很好用的。這里是指10 mL-100 mL。從操作方便性上看，這個在小型試驗中我最喜歡用。好簡單啊。。。。 自己頂一個,解答的詳細的有重獎!(金幣可以再加) （1）發酵液的酶蛋白濃度大約是多少，純度是多少？發個SDS-PAGE看看，註明上樣量。 （2）硫酸銨沉澱後和透析後可上離子交換，這可以濃縮10-1000倍，還可以有純化效果，然後再冷凍濃縮啊。HarveyWang(站內聯系TA)哈哈哈哈，回帖就有金幣拿:Ddaidai0124(站內聯系TA)本人現在只是小規模的提取酶,馬上要上發酵罐,需要大規模的提取酶液,不是做酶學性質,所以酶的純度要求不高,和工業用酶的純度差不多就可以了!希望大家推薦個適合工業化提取酶液的工藝,主要考慮成本問題.請版主幫忙在增加懸賞金幣20個lvgl158(站內聯系TA)起碼知道 它的分子量 才能知道是否可以用同一個膜 如果小於一萬可能就有點難度 可以先用少量的硫酸銨澄清 離心後 進行超濾 在超濾前 必須的保證液體 清澈hezhao999(站內聯系TA)體積的在200ml以上用超濾儀，200ml以下可以用超濾離心管，如果不知分子量選用1000的膜完全可以了，如果知道分子量，則選擇酶分子量1/5的超濾膜。zhaocy8903(站內聯系TA)多大規模的發酵 多大規模的發酵

10. 雜質制備如何濃縮

引言

色譜分析樣品制備是一個非常重要和復雜的過程，因為色譜分析技術涉及的樣品種類繁多、樣品組成及其濃度復雜多變。樣品物理形態范圍廣泛，對採用分析方法進行直接分析測定構成的干擾因素特別多，所以需要選擇並實施科學有效的處理方法及其技術，達到分析測定或評價和調查的目的。現代色譜儀器對一個樣品的分析測定所需要的時間越來越短，但是色譜分析樣品制備過程所用的時間卻仍然很長。據統計，在大部分的色譜分析實驗中，將一個原始樣品處理成可直接用於色譜儀器分析測定的樣品狀態，所消耗的時間只約占整個分析時間的60%-70%，而色譜儀器測定此分析樣品的時間只約佔10%，其餘的時間是用於此樣品測定結果的整理和報告等。

樣品前處理過程

2.1預處理

對樣品進行粉碎、混勻和縮分等過程稱為預處理。

固體樣品——含水較低，粉碎過篩。含水量較高取食用部分切碎或先烘乾後粉碎過篩。

液體、漿體——攪拌混合均勻

互不相容的液體——先分離再取樣

特殊樣品——根據實驗要求特殊處理

2.2提取

浸提——針對固體樣品使待測組分轉移到提取液中

萃取——針對液體樣品，利用某組分在兩種互不相容的溶劑中的分配系數不同，從一種溶劑轉移到另一種溶劑中，從而達到提取目的。

2.3凈化

去除雜質的過程稱為凈化。

萃取法——適用於液體樣品，少量多次

化學法——通過使雜質或待測物發生化學反應而改變其溶解性，使其與原體系分離。

層析法——利用混合物中各組分的理化性質（如溶解度、吸附能力、電荷、分子量、分子極性和親和力等）不同，使各組分在支持物上的移動速度不同，而集中分布在不同區域，藉此將各組分分離。

2.4濃縮

樣品經過提取凈化後，體積變大，待測物濃度降低，不利於檢測，所以濃縮的目的是減小樣品體積提高待測物濃度，常見方法如下：

常壓濃縮——適用於揮發性和沸點相對較低的組分，通過升高溫度，將溶劑由液態轉化成氣態被抽走或被通過冷凝器再次收集，從而達到濃縮目的。

減壓濃縮——通過抽真空，使容器內產生負壓，在不改變物質化學性質的前提下降低物質的沸點，使一些高溫下化學性質不穩定或沸點高的溶劑在低溫下由液態轉化成氣態被抽走或被通過冷凝器再次收集。

冷凍乾燥——冷凍的同時減壓抽真空，使溶劑升華，適用於生物活性樣品。

氮吹濃縮——適用於體積小、易揮發的提取液。採用惰性氣體對加熱樣液進行吹掃，使待處理樣品迅速濃縮，達到快速分離純化的效果。該方法操作簡便，尤其可以同時處理多個樣品，大大縮短了檢測時間。被廣泛應用於農殘檢測，制葯行業和通用研究中的樣品批量處理。

2.5 氮氣漩渦吹掃技術

該裝置採用氮氣旋渦旋轉吹掃技術, 樣品在一定溫度下, 通過氮氣吹掃, 使待測物質獲得良好富集效果。濃縮儀由微處理器控制, 保證樣品的自動濃縮蒸發。氣體噴嘴吹出氮氣流在濃縮管內形成螺旋狀氣流, 減緩了氣流沖力, 使溶劑均勻揮發且不飛濺。

2.6氮吹濃縮影響因素

適當增加溫度能提高目標物質回收率。對於不同物質, 可以通過設置濃縮儀的參數適當控制濃縮時溫度和壓力, 縮短濃縮時間, 以達到更好的回收率。

2.6.1氮氣流壓力對回收率的影響

旋渦氮吹濃縮儀氮氣流量改變是通過調節氮氣進口壓力實現, 管徑不變, 流量與壓力成正比關系。氮氣流的壓力越大, 氮氣流流量就越大。氮氣流撞到試管壁形成旋渦, 溶劑接觸表面積和旋渦剪力越大, 溶劑的蒸發越快, 同時不停吹掃氮氣能避免溶劑與空氣發生化學反應。

2.6.2水浴溫度對氮氣流的影響

濃縮管浸在水浴中, 通過傳熱控制濃縮管內溶液溫度。通常水浴溫度控制范圍從30℃到60℃。溫度設定根據濃縮管里溶劑的沸點和被分析物質性質而定。水浴溫度一般要低於溶劑沸點溫度, 否則可能蒸發速度過快, 回收率可能降低。但是溫度設置過低, 會導致濃縮時間過長, 長時間氮氣吹掃也會導致待測物質揮發。在設置水浴溫度時應充分考慮溶劑的沸點和揮發性。溫度高, 能縮短濃縮時間, 避免目標物質與空氣長時間接觸, 減少目標物質揮發, 但過高溫度會導致溶劑沸騰, 從而降低回收率。