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利用離子交換柱分離純化酶實驗結果

發布時間:2020-12-23 22:03:14

離子交換柱層析能分離純化蔗糖酶的主要依據是什麼

DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素,是陰離子交換劑。
其原理基於離子交換層析:離版子交換層析中,基質是由帶權有電荷的樹脂或纖維素組成。
由於蛋白質也有等電點,當蛋白質處於不同的pH條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質,所以這類蛋白質被留在柱子上,然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質,結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。

② 酶分離純化離子交換柱預裝柱怎麼使用

如果不限定純化方法,可以考慮親和層析或離子交換,但根據你問題的意思,是內選定離子交換。
此時容就要考慮你蛋白的等電點了,如果等電點在你穩定pH之上,就用陽離子交換柱:
設計陽離子交換層析:將你的樣品置換到你所指的穩定pH的running buffer。同時裝柱,平衡,然後上樣,平衡,洗脫(因為你的pH不穩定,建議鹽洗脫),收峰。得你的蛋白;
如果你的等電點在穩定pH之下,就用陰離子交換柱,其步驟如上,只是改變柱子類型。

③ 在生化血清γ-球蛋白的分離純化實驗中,如果用陽離子交換柱,該怎麼操作

緩沖液改成酸性的 而且要根據不同的pI進行

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