乙腈相過陽離子交換柱

Ⅰ 色譜柱的注意事項

色譜柱 的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩（如前所述）。
②應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變為全部是水，反之亦然。
③一般說來色譜柱不能反沖，只有生產者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。
④選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠「飽和」，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。
⑤避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。
⑥經常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時，對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規分析需要50~75ml。
下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然後再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動相不含緩沖液，那麼可以省略最後用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質，在甲醇（乙腈）沖洗時重復注射100~200μl四氫呋喃數次有助於除去強疏水性雜質。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞碸數次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脫能除去蛋白質污染。
陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀鹼緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然後用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機物）、甲醇、水依次沖洗。
⑦保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發乾燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。
⑧色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗；另一種可能是大分子進入柱內，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷，死體積增大。
在後兩種情況發生時，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內填料整平。然後用適當溶劑濕潤的固定相（與柱內相同）填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理後柱效能得到改善，但是很難恢復到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保護、延長柱壽命的作用。採用保護柱會損失一定的柱效，這是值得的。
通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以硅膠為基質的填料，只能在pH2~9范圍內使用。柱子使用一段時間後，可能有一些吸附作用強的物質保留於柱頂，特別是一些有色物質更易看清被吸著在柱頂的填料上。新的色譜柱在使用一段時間後柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時也可補加填料使柱效恢復。
每次工作完後，最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當採用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完後應用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經常使用，應每隔4~5天開機沖洗15分鍾。

Ⅱ 液相色譜柱應該怎樣清洗

朋友，什麼柱子規格，新柱舊柱？

正相or反相？

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Ⅲ 三聚氰胺的計算方法有幾種

(1) 檢測液體奶中是否含有三聚氰胺
三聚氰胺微溶於水，常溫下，在水中的溶解度僅為0.33%，也就是說100克奶中僅可以加入0.33克三聚氰胺。而100克牛奶中蛋白質的含量為3克左右，也就是說100克奶中加入三聚氰胺後，如造假加水，只能加入10克水。這對於造假來說，利潤太小，風險又大。此外，最重要的是，三聚氰胺的水溶液呈鹼性，如果在牛奶中加入三聚氰胺，其PH值會接近8，通過PH計很容易就能測出來。
而三聚氰胺在奶粉製造過程中，要加入就容易多了。這是因為三聚氰胺的溶解度隨溫度的升高而快速增加，在100℃時，三聚氰胺在水中的溶解度達到5.14%。而奶粉製造過程中，要殺菌和噴霧造粒，溫度都在100℃左右。
還有更簡單的方法就可以證明三聚氰胺是誰加入的，那就是測一下不同批次和生產日期奶粉中三聚氰胺的含量，如果不同批次和生產日期奶粉中三聚氰胺的含量差別很小，那就可以證明是奶粉生產過程中加的三聚氰胺，因為如果是奶農加入的，這么多奶農，有的加的多，有的加的少，有良心的還可能沒有加，那麼不同批次的奶粉中三聚氰胺含量波動很大，而如果是奶粉生產過程中加入的，由於有標準的工藝和自動化設備，不同批次的奶粉中三聚氰胺含量波動很小。
教你測試奶粉中是否含三聚氰胺(詳細步驟)
由於奶粉安全影響到孩子的健康，這對家長是頭等大事。想了一個簡易方法給大家，僅供參考。
(2)測試奶粉中是否含三聚氰胺：
1。按比平常濃的分量用熱水沖奶粉，充分攪拌到不見固塊，然後放入冰箱，待牛奶靜置降溫。
2。准備黑布一塊和空杯一個。把黑布蒙在空杯口上作為過濾器。
3。將冷卻的牛奶倒在黑布上過濾。
4。如果有白色固體濾出，則用清水沖洗幾次，排除其它可溶物。
5。如果沖洗後發現有白色晶體，可以將晶體放入清水中，該晶體如果沉入水底。那就很可能是三聚氰胺，這種奶粉不能用了。
這種方法可能無法發現微量的三聚氰胺，但微量的三聚氰胺使孩子得結石的可能性也低得多，至少可以把把關。
以上方法僅供參考。
編輯本段專業的化學檢測法測試三聚氰胺
GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺
Spectra-Quad實現三聚氰胺含量在線檢測
超高效液相色譜_電噴霧串聯質譜法測定飼料中殘留的三聚氰胺
反相高效液相色譜法測定飼料中三聚氰胺的含量
高效液相色譜-二極體陣列法測定高蛋白食品中的三聚氰胺
高效液相色譜法(HPLC)測定飼料中三聚氰胺的含量
高效液相色譜-四極桿質譜聯用測定飼料中三聚氰胺含量
固相萃取與高效液相色譜聯用測定寵物食品中三聚氰胺
液相色譜串聯質譜法(LC-MSMS)分析寵物食品中三聚氰胺
液相色譜-串聯質譜法測定飼料中三聚氰胺殘留
GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺
2.1儀器與條件
Agilent1100高效液相色譜儀(美國，Agilent公司);二極體陣列檢測器(DAD)，檢測波長240nm，柱溫：40℃。
(1)AgelaVenusilTMASBC18(4.6×250mm);緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min。
(2)AgelaVenusilTMASBC8(4.6×250mm);流動相：緩沖液：乙腈=85：15;緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0;流速：1.0mL/min;
離子交換固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾傑爾科技有限公司)
2.2試劑與樣品
寵物飼料樣品(農業部飼料供應中心提供);甲醇、乙腈為北京艾傑爾科技有限公司提供;氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購於北京化學試劑公司;三聚氰胺標准品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉(Sigma公司);甲醇為色譜純，其他均為化學純。
3實驗方法
3.1樣品前處理方法
(1)標准樣品配製：
取50mg三聚氰胺標准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標准溶液，使用時，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。
(2)提取：
稱取飼料樣品5g，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL2%乙酸鉛溶液，超聲20min。
然後取部分溶液轉移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過混合型陽離子交換小柱(PCX)。
(3)凈化(PCX小柱，60mg/3mL)：
a)活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
b)上樣：加入提取液3mL
c)淋洗：3mL水;3mL甲醇;棄去淋洗液並將小柱抽干。
d)洗脫：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配製：5mL氨水+95mL甲醇)。
e)濃縮：50℃，氮氣吹乾，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生後GC/MS分析。
3.2HPLC檢測方法
3.2.1三聚氰胺HPLC-UV檢測方法
三聚氰胺是強極性化合物，在傳統的反相C18柱上保留很差，需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國食品葯品監督管理局(FDA)的三聚氰胺檢測方法和中國農業部公布的三聚氰胺檢測方法，採用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，可以得到良好的分離效果，分析色譜圖如下：
圖2VenusilASB色譜柱分離三聚氰胺的譜圖
(a)色譜柱：VenusilASBC84.6×250mm;標准：FDA方法;流動相：緩沖液：乙腈=85：15;緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0;流速：1.0mL/min;柱溫：40oC;波長：240nm
(b)色譜柱：VenusilASB-C184.6×250mm;標准：中國農業部頒標准方法;緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min;柱溫：40℃;波長：240nm
3.2.2三聚氰胺LC-MS檢測方法
由於FDA公布的HPLC-UV方法中，流動相添加了離子對試劑，因此限制了液質聯用方法的使用;但不用離子對試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統的C18柱上保留很差，不能得到較好的分離定量〔3〕。
基於此問題，艾傑爾科技公司自主開發了新的方法，採用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，不用離子對試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動相不含離子對試劑，可以用於質譜檢測。
與FDA2007年4月公布的《(HPLC-UV)》相比較，該方法大大降低了最低檢測限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)，提高了檢測靈敏度。
以該方法分別在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到的譜圖如下：
圖3LC-MS方法檢測三聚氰胺的譜圖
緩沖液：10mM的NH4AC;流動相：Buffer:：ACN=95：5;流速：1.0mL/min;進樣量：樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL，用ACN稀釋成0.1mg/mL，進10uL;柱溫：40℃;波長：240nm
4結果與討論
4.1陽離子交換柱(PCX)
三聚氰胺呈弱鹼性(弱陽離子化合物)，凈化過程一般應選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱(PCX)通過將磺酸基團(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附劑上，具有陽離子交換和反相吸附兩種機理，並具有以下優點：
a)可通過兩種不同溶液的洗滌(水/一定pH值的緩沖溶液和有機溶劑)，使樣品更干凈，提高檢測的靈敏度。
b)批次重復性好。
c)回收率高，重現性好，即使小柱跑干也可以得到較高回收率。
4.2LC-MS方法優點：
(1)檢測過程簡便：無須添加離子對試劑，三聚氰胺就可得到良好的保留與分離，避免了配製離子對流動相的復雜過程。
(2)提高了檢測的靈敏度：無離子對試劑，可以用於質譜檢測器，大大降低了最低檢測限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)。
(3)降低了檢測成本：不用離子對試劑，就不再需要買價格較貴的離子對試劑了，從而降低了檢測成本。
(4)延長了色譜柱的使用壽命：避免了使用離子對試劑減少色譜柱壽命的影響。
(5)該方法所使用的色譜柱具有通用性：無論是用FDA方法、中國農業部部頒標准方法和本公司開發的LC-MS方法，使用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱均能得到一個很好的檢測結果，從而給客戶提供了多種選擇空間。
國家食品質量監督檢測中心有關人士說，在現有的國家標准奶粉檢測中，主要進行蛋白質、脂肪、細菌等檢測。三聚氰胺屬於化工原料，是不允許添加到食品中的，所以現有標准不會包含相應內容。也就是說，三聚氰胺不屬於常規檢測項目，正常情況下，很少有人會想到去檢測它。
來源：中科院上海有機化學研究所 化學專業資料庫

參考資料：http://ke..com/view/298398.htm

Ⅳ 王教授你好，我想問一下關於三聚氰胺的檢測方法，都有哪些謝謝你的幫助。

三聚氰胺(melamine)簡稱三胺, 學名三氨三嗪, 別名蜜胺、氰尿醯胺、三聚醯胺，分子式：C3N6H6、 C3N3(NH2)3 。分子量：126.12，是一種重要的氮雜環有機化工原料〔2〕。三聚氰胺顯弱鹼性，能夠與各種酸反應生成三聚氰胺鹽。在強酸或強鹼液中，三聚氰胺發生水解，胺基逐步被羥基取代，生成三聚氰酸二醯胺、三聚氰酸一醯胺和三聚氰酸。三聚氰胺與醛類反應生成加成化合物。三聚氰胺與醛反應製成樹脂，三聚氰胺樹脂是一種多種用途的材料，防火耐熱且有很高的穩定性，用於生產塑料、廚房用具、防火纖維、商業濾膜、膠水和阻燃劑，部分亞洲國家，也被用來製造化肥。
2 材料與試劑
2.1 儀器與條件
Agilent 1100高效液相色譜儀（美國，Agilent公司）；二極體陣列檢測器（DAD），檢測波長240nm，柱溫：40℃。
（1）Agela VenusilTM ASB C18（ 4.6×250mm）；緩沖液：10mM檸檬酸, 10mM庚烷磺酸鈉； 流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min。
（2）Agela VenusilTM ASB C8（ 4.6×250mm）；流動相：緩沖液：乙腈=85：15；緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0；流速：1.0mL/min；
離子交換固相萃取柱Agela ClearnertTM PCX(北京艾傑爾科技有限公司)
2.2 試劑與樣品
寵物飼料樣品（農業部飼料供應中心提供）；甲醇、乙腈為北京艾傑爾科技有限公司提供；氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購於北京化學試劑公司；三聚氰胺標准品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉（Sigma公司）；甲醇為色譜純，其他均為化學純。
3 實驗方法
3.1樣品前處理方法
(1) 標准樣品配製：
取50mg三聚氰胺標准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標准溶液，使用時，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。

(2) 提取：
稱取飼料樣品5g，加入50ml 0.1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL 2%乙酸鉛溶液，超聲20min。然後取部分溶液轉移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過混合型陽離子交換小柱(PCX)。

(3) 凈化(PCX小柱，60mg/3mL) ：
a) 活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
b) 上樣：加入提取液3mL
c) 淋洗：3mL水；3mL 甲醇；棄去淋洗液並將小柱抽干。
d) 洗脫：5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配製：5mL氨水+95mL甲醇)。
e) 濃縮：50℃，氮氣吹乾，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生後GC/MS分析。

3.2 HPLC檢測方法

3.2.1 三聚氰胺HPLC-UV檢測方法

三聚氰胺是強極性化合物，在傳統的反相C18柱上保留很差，需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國食品葯品監督管理局（FDA）的三聚氰胺檢測方法和中國農業部公布的三聚氰胺檢測方法，採用艾傑爾(Agela) ASB系列親水色譜柱，可以得到良好的分離效果，分析色譜圖如下：

圖2 Venusil ASB 色譜柱分離三聚氰胺的譜圖

(a) 色譜柱：Venusil ASB C8 4.6×250mm；標准：FDA方法；流動相：緩沖液：乙腈=85：15；緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0；流速：1.0mL/min；柱溫：40 oC；波長：240nm
(b) 色譜柱：Venusil ASB-C18 4.6×250mm；標准：中國農業部頒標准方法；緩沖液：10mM檸檬酸, 10mM庚烷磺酸鈉； 流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min;柱溫：40℃；波長：240nm
空白加水平（mg/L） 回收率
0.01 116%
0.1 108%
0.5 92%
2 96%

由上表1可以看出：用PCX柱凈化樣品，可以得到滿意的回收率，此方法處理樣品，比FDA公布的前處理方法更加准確、可靠。

3.2.2 三聚氰胺LC-MS檢測方法

由於FDA公布的HPLC-UV方法中，流動相添加了離子對試劑，因此限制了液質聯用方法的使用；但不用離子對試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統的C18柱上保留很差，不能得到較好的分離定量〔3〕。
基於此問題，艾傑爾科技公司自主開發了新的方法，採用艾傑爾(Agela) ASB系列親水色譜柱，不用離子對試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動相不含離子對試劑，可以用於質譜檢測。
與FDA 2007年4月公布的《Updated FCC Developmental Melamine Quantitation (HPLC-UV)》相比較，該方法大大降低了最低檢測限（MSD：0.5ppm；UV：2ppm），提高了檢測靈敏度。
以該方法分別在ASB-C8 4.6×250mm ASB-C18 4.6×250mm 得到的譜圖如下：

圖3 LC-MS方法檢測三聚氰胺的譜圖

緩沖液：10mM的NH4AC；流動相：Buffer:：ACN=95：5；流速：1.0mL/min；進樣量：樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL，用ACN稀釋成0.1mg/mL，進10uL；柱溫：40℃；波長：240nm
4 結果與討論

4.1陽離子交換柱(PCX)

三聚氰胺呈弱鹼性(弱陽離子化合物)，凈化過程一般應選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱(PCX)通過將磺酸基團(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附劑上，具有陽離子交換和反相吸附兩種機理，並具有以下優點：
a) 可通過兩種不同溶液的洗滌(水/一定pH值的緩沖溶液和有機溶劑)，使樣品更干凈，提高檢測的靈敏度。
b) 批次重復性好。
c) 回收率高，重現性好，即使小柱跑干也可以得到較高回收率。

4.2 LC-MS方法優點：

（1）檢測過程簡便：無須添加離子對試劑，三聚氰胺就可得到良好的保留與分離，避免了配製離子對流動相的復雜過程。
（2）提高了檢測的靈敏度：無離子對試劑，可以用於質譜檢測器，大大降低了最低檢測限（MSD：0.5ppm；UV：2ppm）。
（3）降低了檢測成本：不用離子對試劑，就不再需要買價格較貴的離子對試劑了，從而降低了檢測成本。
（4）延長了色譜柱的使用壽命：避免了使用離子對試劑減少色譜柱壽命的影響。
（5）該方法所使用的色譜柱具有通用性：無論是用FDA方法、中國農業部部頒標准方法和本公司開發的LC-MS方法，使用艾傑爾(Agela) ASB系列親水色譜柱均能得到一個很好的檢測結果，從而給客戶提供了多種選擇空間。

Ⅳ 我的液相C18反相柱，用純乙腈沖洗的壓力由開始的3、4MPa上升到現在的20幾MPa，怎麼回事急需解救！

如果你接其他的柱子沒有問題的話，肯定是你的柱子之前的鹽沒有專沖洗干凈導致鹽結晶了。屬鹽用有機相是沖不掉的，只能用水沖，但是像這種反相柱不能用純水沖，純水會溶解硅膠，導致相坍塌。

你可以視情況改變有機相與水的比例來沖。一般可用5%的甲醇溶液小流速沖洗。 不行就反沖吧。

希望對你有幫助，望採納！！

Ⅵ 離子色譜柱做有機物,流動相應加入什麼

根據需要加入乙腈，5%-20%差不多，用外接水模式

Ⅶ 液相色譜柱怎麼換

先用95%乙腈+5%水沖洗舊柱子（沖去柱子中殘留的緩沖鹽和之前難以洗脫的組分），關掉流速，待流速降至0後，把柱子兩邊的PEAK頭擰下來，用配套的塞子將換下的柱子兩頭堵上，密封保存更換新的色譜柱時，應先將需換上的柱子兩邊的塞子旋開。

確定好柱子標示的方向後，先接柱子入口端，並使柱子出口端略高於入口端，這樣就使流動相流過柱子時能將其中的氣泡排出，待氣泡排盡後，再接上柱子的出口端，用純的乙腈小流速沖洗半小時，再用流動相按0.2， 0.5， 1.0逐漸加大流速來沖洗。

(7)乙腈相過陽離子交換柱擴展閱讀：

操作注意事項：

為使柱外效應減至最小，使檢測結果更加准確，液相色譜儀各裝備的管路連接非常重要一般而言，液相色譜儀的第一次安裝都是由色譜儀廠家技術員安裝完成的，整個液相色譜儀及其配套裝備都是安裝的很完美的客戶後期在更換色譜柱要注意的問題是接頭的處理。

一般柱子入口和出口接頭為不銹鋼卡套接頭，當完成第一次安裝後，不銹鋼卡套已固定死，因此，早更換色譜柱時應當注意的問題是柱子接頭處的形狀和長度，否則會產生一個非常大的死體積

Ⅷ 什麼情況下需要更換液相色譜柱有什麼現象液相色譜保護柱的使用壽命是多少啊

轉載：《分析測試網路網》
色譜柱預防性保護與柱壽命的延長

通常，一根色譜柱在分析數千個樣品之後性能仍然保持良好，但也有的柱僅分析不多的樣品後幾乎就報廢了。影響柱壽命和其它問題的因素很多，而有些因素是操作者很難控制的，如果被分析的樣品（如分析生物樣品），怎麼凈化樣品也是「臟」的，好於色譜柱的影響是非常大的。然而採取下列措施後，在多數情況下總能夠人為地減少柱上故障，達到延長柱壽命的目的。

1．加流路過濾器和保護柱
流路過濾器緊靠進樣閥後面，位於分析柱前。0.5μm燒結不銹鋼片夾在死體積很小的套子中，擋住來源於樣品和進樣閥墊圈的微粒入柱。因為每個樣品都過濾既費事又帶來誤差，樣品量少過濾更困難，因此流路上裝過濾器是比較省事的辦法。也可以在流路加上保護柱，放在流路過濾器和分析柱之間，或者代替流路過濾器。保護柱的使命是收集阻塞柱進口的來自樣品的化學「垃圾」。這程垃圾最終隱藏低柱效能。保護柱應該是小體積，用分析柱的同種填料填裝。保護柱使用得當，對分離無影響，好像未裝保護柱一樣。有些廠商的商品將保護柱都是用短柱、不超過3cm長，內徑2～3mm，用較大粒度的填粒（15～20μm）干法填裝，會使分析柱的效能有所降低。

2．避免高壓沖擊
一般色譜柱都能經得起高壓，但經不起突然變化的高壓沖擊。引起高壓突然沖擊，主要是因樣品閥的緩慢轉動、泵起動快，柱切換操作等。等面已討論過，轉動六通進樣閥時從泵到柱的液流會瞬時切斷。在閥的泵側壓力升高，在閥的柱側壓力降低（變化超過20%）。閥轉到底後壓力突然沖擊一下恢復正常，手動進樣閥的變化不大，自動進樣閥比較慢，可能造成壓力沖擊，可用氦氣代替空氣驅動進樣閥。因氨壓縮系數小。另外泵起動不應過快，可分步操作。如用3ml/min流速，先從1mL/min到2mL/min，然後再3ml/min，每個間隔應大於20s。
柱切換技術的應用也很廣泛，切換過程中在色譜柱的入口處壓力在零到很大數字之間變化，會很快使柱報廢。

3．分離條件
多數色譜柱有很寬的試驗條件范圍，但具體應用又受到限制，主要是pH值、柱溫和流動相的選擇。
硅膠為基質的鍵合相要求pH在2.5～7之間，極端pH的流動相能「溶解」硅膠，使鍵合相流失。結果非鹼性組分峰變寬。如果一定要用高或低pH的流動相，可加預柱（飽和柱）。預柱裝在泵和進樣閥之間，用分析柱相同的填料填裝，或者用普通硅膠。硅膠飽和了流動相。減少了分析柱填料的損失。預柱不要求柱效高，用價格低的一般硅膠疏鬆地填裝，按期檢查硅膠的溶解情況。用預柱也有不利的影響。即新流動相難以平衡，保留時間不穩定或穩定慢。使用了預柱一定要加流路過濾器，以防止硅膠微粒引起的麻煩。
以硅膠為基質的柱和陰離子交換柱超過60℃後，會增加對流動相中化學物質的吸附。在高溫下用小顆粒柱引起柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。在4℃以上使用3μm柱，70℃以上使用5μm柱，會使N值降低50%。
有些流動相中的溶劑不能用於某些柱，如小顆粒的聚苯乙烯填料不能用於非水的排阻色譜。另一方面，有些柱與某些溶劑（如四氫呋喃）一旦達到平衡，不要隨意改用其它溶劑。有關這些特殊填料，可以參見有關資料。
水溶性流動相會引起微生物生長而造成阻塞柱。色譜柱應存放在純有機溶劑或加了50%有機溶劑的水中。凝膠柱可存放在水溶性緩沖液中，同時加0.01%疊氮鈉以防止微生物的生長。

4．凈化樣品
用溶劑溶解的樣品，多數組分在一定的時間內能完全從柱中流出來，不會造成危害。
有些樣品可能含有微粒物質，樣品中的某種組分（如蛋白質）在柱頭上沉積下來，組分在固定相上保留很強，溶劑帶走柱填料，等等，這些都會造成柱效能下降或柱壽命的影響，有必要採取措施防止柱變壞。
如在光線照射下觀察樣品是渾濁的或帶有乳白色，進樣前必須要過濾。雖然流路上裝有過濾器和保護柱，但不能代替樣品的前處理，樣品中過多的微粒會使過濾器和保護柱超載，很快阻塞，或者微粒進入分析柱，所以在進樣前必須過濾樣品。
若懷疑樣品與流動相混合有沉澱而對色譜柱有阻塞，應先試驗一下，看樣品溶液加入流動相中有無變渾或乳白色出現。如果進樣後壓力突然增加而後又慢慢減小，表明樣品中有微粒或發生沉澱。如有沉澱要設法改變分離條件，包括換樣品溶劑和流動相；或處理樣品去掉不溶物質。應盡量用小體積的樣品。
有些樣品能很強地吸附在柱填料上，這樣會降低塔板數，改變樣品的保留時間、峰形，並且使得基線變差。除了用預處理的方法除去強保留物質外，還要加保護柱，定期清洗色譜柱。有時因為疏忽，用對柱有害的溶劑溶解樣品，比如用6mol/L的氫氧化鈉溶解樣品，這樣的樣品只要進50～100μL到硅膠基質柱中，硅膠就很快溶解而使柱報廢。在這種情況下，應立即中和樣品，或除去原溶劑中的有害成分。

5．用強溶劑定期沖洗柱
每次工作結束，用強溶劑沖洗柱是良好的習慣。可用甲醇、乙腈沖反相柱，沖去留在柱上的強吸附組分。用甲醇/水為流動相時也應沖洗。沖洗的程序在以下章節中介紹。
柱頭的燒結不銹鋼濾片，要求平整，死體積小，孔徑適當（2～5μm）。過濾片選擇不好會改變色譜峰形，增加阻力或起不到阻擋污染物的作用（填料很快變色）。

此外，對柱硬體的保養也不可忽視。實際操作中應注意以下幾點：
1、 接頭要配套，用同一廠商的組接件；
2 、接頭之間、柱壓帽螺母與密封卡磁之間無微粒（填料），否則收緊時容易咬死；
3 、密封卡套與柱管一次性卡緊後再也不能松動，所以拆開柱頭再上緊時要小心，不能使卡套移動，原來柱端的不銹鋼濾片和墊片的厚度和強度也不能改變（改變這些附件的性能就促使卡套移動）；
4 、接頭等組接件不要擰得過緊，適當上緊後接上泵試驗，分步擰緊，直到不漏為止。還有非常重要的是柱硬體的損壞往往會造成不可挽回的損失。

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Ⅸ 為什麼液相進完樣後 用100%乙腈沖柱的時候還會有峰出現

有些物質在柱頭有強保留，用高濃度有機溶劑才能快速沖洗出來，就看到有峰了，這是完成檢測後要清潔色譜柱的原因。
還有前後成分或濃度差異大的流動相通過檢測器時，有比較強的紊流，看起來就像一個很大的峰。

Ⅹ 市場上常見的手性色譜柱有那幾種類型呀

手性色譜柱是由具有光學活性的單體，固定在硅膠或其它聚合物上製成手性固定相。通過引入手性環境使對映異構體間呈現物理特徵的差異，從而達到光學異構體拆分的目的。要實現手性識別，手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵、偶級-偶級作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用或空間作用。手性分離效果是多種相互作用共同作用的結果。這些相互作用通過影響包埋復合物的形成，特殊位點與分析物的鍵合等而改變手性分離結果。由於這種作用力較微弱，因此需要仔細調節、優化流動相和溫度以達到最佳分離效果。常見的手性色譜柱有以下兩種類型：
A、配位交換型：
手性配位交換色譜(，CLEC)由Davankov發明，是通過形成光學活性的金屬絡合物而達到手性分離，屬於IrvingWainer分類中的第4類手性固定相，主要用於分離氨基酸類。
由於此類固定相是由手性氨基酸—銅離子絡合物鍵合到硅膠或聚合物上形成，因此流動相中必須含有銅離子以保證手性固定相上的銅離子不至流失。其它的過渡金屬元素也已用於手性配位交換色譜，但銅離子應用最廣。形成絡合物的過程十分緩慢，因此有時需提高柱溫，最佳溫度約50℃。
手性配位交換色譜僅對α-氨基酸和其類似物有效。β-氨基酸很難用手性配位交換色譜得以分離。手性配位交換色譜可用於制備，由於流動相中存在銅離子，雖然銅離子能用離子交換柱除去，但增加了樣品處理的困難。
B、大環抗生素型：
大環抗生素型手性色譜柱是最近發展起來的，通過將大環抗生素鍵合到硅膠上製成的新型手性色譜柱。大環抗生素型手性色譜柱的出現歸功於DanArmstrong的貢獻。此類色譜柱常用的大環抗生素主要由三種：利福黴素(Rifamycin)，萬古黴素(Vancomycin)，替考拉寧(Ticoplanin)。利福黴素作為手性添加劑在毛細管電泳分離手性化合物方面得到了成功運用。萬古黴素和替考拉寧分子結構中存在「杯」狀結構區和糖「平面」結構區。此類色譜柱性質穩定，可用於多種分離模式。手性分離基於氫鍵、π-π作用、形成包合物、離子作用和肽鍵等。
替考拉寧分子量為1885，結構中存在20個手性中心，3個糖基和4個環。酸性基團在多肽杯」/「裂層」的一端，鹼性基團在它的另一端。酸性基團和鹼性基團提供了離子作用點。糖基在三個平面上，可折疊起來將化合物分子包埋在多肽「杯」中。
萬古黴素分子量為1449，結構中存在18個手性中心，3個環。萬古黴素具有「籃狀」結構，它的附近還有一個可彎曲的糖平面，可將分析物分子包埋在「籃子」中。羧基和仲氨基分布在「籃子」的邊緣，參與和分析物分子產生離子作用。萬古黴素手性色譜柱可用於反相模式、正相模式和極性模式。萬古黴素手性色譜柱可以分離胺類、中性醯胺、脂類。但對於酸性化合物選擇性較低。在反相模式中，有機相常用四氫呋喃、乙腈和甲醇。水相常用三乙胺-乙酸緩沖液。色譜柱適用的pH范圍為4-7。通常優化鹼性化合物手性分離條件時，選擇pH=7為起點比較好。另外四氫呋喃、乙腈有最好的選擇性。有時採用純的甲醇和乙醇作流動相也可達到好的分離效果。萬古黴素手性色譜柱也可用正相模式，採用正己烷/乙醇為流動相。