⑴ DEAE-纖維素陰離子柱層析分離多糖的原理是什麼
DEAE纖維素陰離子柱層板分離多糖的原理主要是其可吸附離子型物質,比如蛋白質、酸性多糖等,而作為大多數的中性多糖則可順利流出,從而去粗取精、達到分離的目的。當然,DEAE的細度很細,也可起到分子篩的作用,但其分離效果會和柱高、洗脫溶劑、粒徑的關系很大,效果並不很好,且在大量水沖的情況下,中性多糖基本均可洗脫下來。
⑵ DEAE纖維素陰離子交換柱,看到很多地方講到流穿模式,什麼叫做流穿模式呢
流穿模式指的是樣品沒掛柱,都留下來了。
⑶ DEAE纖維素柱的原理
DEAE纖維素柱原理,基於離子交換層析:離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖回維素組成。
陰離子答交換基質結合,帶有負電荷的蛋白質,然後這類蛋白質被留在柱子上,然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質從而洗脫下來。
(3)deae52陰離子交換柱擴展閱讀:
基本信息:
性狀:乾燥纖維狀。
用途:用於柱色譜分析,用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等,陰離子交換填料。
保存:常溫乾燥封袋保存。
DEAE—纖維素的使用方法:
稱取IgDEAE32或52,放入5ml量筒中,加蒸餾水浸泡過夜,觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量,稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜,其間換幾次水,每次除去細小顆粒。
抽干,改用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1h以上,抽干(可用布氏漏斗),用無離子水漂洗,使pH至8左右(用pH試紙檢查)。再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡1h以上,去酸溶液,用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應以0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩沖液,浸泡平衡後使用。
⑷ Deae52陰離子交換柱上樣量怎麼確定,想盡可能上很多樣品,但是不會影響分離效果
陰離子交換器 又叫陰床,作用是用陰樹脂中的氫氧根交換掉水中的其他陰離版子。離子交換器分為權:鈉離子交換器、陰陽床、混合床等種類,。離子交換柱(器)外殼一般採用硬聚氯乙烯(PVC)、硬聚氯乙烯復合玻璃鋼(PVC-FRP)、有機玻璃(PMMA)、有機玻璃復合透明玻璃鋼(PMMA-FRP)、鋼襯膠(JR)、不銹鋼襯膠等材質。主要用於鍋爐、熱電站、化工、輕工、紡織、醫葯、生物、電子、原子能及純水處理的前道處理,工業生產所需進行硬水軟化、去離子水制備的場合,還可用於食品葯物的脫色提純,貴重金屬、化工原料的回收,電鍍廢水的處理等。 有機玻璃離子交換裝置耐腐蝕、無色透明、適用於食品、醫葯、製糖及電子工業小規模純水制備。碳鋼襯膠離子交換裝置具有制水量大、強度高、成本低等特點,適用於大型鍋爐軟化水及大規模純水制備。
⑸ 如果蛋白質等電點是6.2,用deae柱子,應選用多大ph值上柱子
如果蛋白質等抄電點是6.2,用DEAE柱子襲,應選用8.0左右的pH值上柱子
DEAE是陰離子交換柱,當環境pH高於蛋白質等電點的時候,蛋白質可以結合上陰離子柱。考慮到要穩定的結合一般選擇的環境pH要高於等電點值1.5左右。同時考慮維持蛋白質的穩定,環境pH一般選擇偏中性的值。
⑹ deae-陰離子纖維素的使用方法
DEAE-纖維素的處理及裝柱
(1)處理
本實驗採用的是DEAE-纖維素DE 52 是弱酸型陰離子交換劑,具體處理方法為:先將DE52陰離子交換劑乾粉浸泡於蒸餾水中,去除雜質;再在0.5N的HCL溶液中浸泡1-2h,再用無離子水或蒸餾水洗至pH值中性或PH4以上,並將其在抽濾漏斗中抽干;將抽乾的離子交換劑浸泡在0.5N的NaOH溶液中1-2h,再用無離子水或蒸餾水將其洗至中性。
(2)裝柱
將層析柱清洗干凈垂直固定到層析架上,加1/3體積的無離子水,打開下出液口,水流暢通,即刻將小燒杯中裝有適宜濃度的柱材,輕輕倒入層析柱中,凝膠自然慢慢沉降再層析柱底部,凝膠沉積直到離層析柱上端1.5-2cm處,停止裝柱。層析柱上端進液口連接恆流泵,下出口連接蛋白質監測儀,待層析柱的平衡。
(3)平衡
在柱層析上樣前必須對層析柱進行平衡,所謂平衡就是將層析柱中的溶液用層析過程的緩沖液(洗脫液)置換出來,使層析柱中的緩沖系統與柱層析過程中的系統一致。其方法是:利用層析柱上端的恆流泵將平衡緩沖液泵入到層析柱內,打開層析柱下端的出口,平衡液流速在0.5-1ml/min,當下出口流出液的PH值與平衡緩沖液的PH值一致時,層析柱達到了平衡。在本實驗中,用0.002M Tris-HCL緩沖液PH7.4(內含0.0001M EDTA),預先將DE-52柱進行平衡。
⑺ DE-52纖維素再生中,使用 NaOH洗脫吸附的球蛋白,洗下來的球蛋白是原來的結構還是已經變性
DEAE-纖維素 DEAE cellulose DEAE-纖維素 DEAE cellulose 為二乙氨乙基纖維素。是陰離子交換纖維素之一。 DEAE—纖維素的活化:稱取IgDEAE32或52,放入5ml量筒中,加蒸餾水浸泡過夜,觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量,稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜,其間換幾次水,每次除去細小顆粒。抽干,改用0.5ml/LNaOH溶液浸泡1h以上,抽干(可用布氏漏斗),用無離子水漂洗,使pH至8左右(用pH試紙檢查)。再改用0.5ml/LHCl溶液浸泡1h以上,去酸溶液,用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應以0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩沖液,浸泡平衡後使用。 用過的離子交換劑可以反復使用,使其恢復原狀的方法俗稱「再生」。再生並非每次用酸、鹼反復處理,通常只要「轉型」處理即可。所謂轉型就是使交換劑帶上所希望的某種離子,如希望陽離子交換劑帶上NH+4則可用NH4OH浸泡,如希望陰離子交換劑帶上Cl—則用NaCl溶液處理。本實驗中DEAE—纖維素在酸鹼處理後,用0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩沖溶液浸泡即可轉型,以HPO4取代DEAE中的OH—。一般由於DEAE—纖維素使用後因帶有大量雜蛋白,所以再生時,先用0.5ml/L NaOH浸洗,用無離子洗至pH8左右,再轉型,即可再使用。
⑻ DEAE-52纖維素柱求助
DEAE-纖維素復 DEAE cellulose DEAE-纖維素 DEAE cellulose 為二乙氨乙基纖制維素。是陰離子交換纖維素之一。 DEAE—纖維素的活化:稱取IgDEAE32或52,放入5ml量筒中,加蒸餾水浸泡過夜,觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE
⑼ deae陰離子交換柱去除內毒素需要在一定的緩沖體系中嗎
DEAE是陰離子交換柱,一般適合於等電點比較低的酸性蛋白。
另外DEAE在結合內毒素上有很好的效果,所以在很多蛋白去除內毒素時可以用到DEAE。