1. 離子色譜是干什麼的,能為用戶解決什麼問題
離子色譜是高效液相色譜HPLC的一種,是分析陰陽離子的一種液相色譜方法,該方法具有選擇性好、靈敏、快速、簡便等優點,並且可以同時測定多種組分。
通常情況下,離子色譜可以分為三種類型:離子交換色譜、離子排斥色譜、離子對色譜。
離子交換色譜
離子交換色譜以離子間作用力不同為原理,主要用於有機和無機陰、陽離子的分離。
離子排斥色譜
離子排斥色譜基於Donnan排斥作用,是利用溶質和固定相之間的非離子性相互作用進行分離的。它主要用於機弱酸和有機酸的分離,也可以用於醇類、醛類、氨基酸和糖類的分離。
離子對色譜
離子對色譜的分離機理是吸附、分離的選擇性主要由流動相決定。
該方法主要用於表面活性陰離子和陽離子以及金屬絡合物的分離。
2. 色譜分離法按操作方式不同,可分為哪三種
按操作形式可分為:紙色譜法(PC)、薄層色譜法(TLC)、柱色譜法。
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【色譜法分類】
按兩相的物理狀態可分為:氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC)。氣相色譜法適用於分離揮發性化合物。GC根據固定相 不同又可分為氣固色譜法(GSC)和氣液色譜法(GLC),其中以GLC應用最廣。液相色譜法適用於分離低揮發性或非揮發性、熱穩定性差的物質。LC同樣 可分為液固色譜法(LSC)和液液色譜法(LLC)。此外還有超臨界流體色譜法(SFC),它以超臨界流體(界於氣體和液體之間的一種物相)為流動相(常 用CO2),因其擴散系數大,能很快達到平衡,故分析時間短,特別適用於手性化合物的拆分。
按原理分為:吸附色譜法(AC)、分配色譜法(DC)、離子交換色譜法(IEC)、排阻色譜法(EC,又稱分子篩、凝膠過濾(GFC)、凝膠滲透色譜法(GPC)和親和色譜法。(此外還有電泳。)
按操作形式可分為:紙色譜法(PC)、薄層色譜法(TLC)、柱色譜法。
【色譜分離原理】
高效液相色譜法按分離機制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法(正相與反相)、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法。
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3. 離子交換色譜法的原理,裝置及應用
原理:
離子交換色譜(ion exchange chromatography,IEC)以離子交換樹脂作為固定相,樹脂上具有固定離子基團及可交換的離子基團。當流動相帶著組分電離生成的離子通過固定相時,組分離子與樹脂上可交換的離子基團進行可逆變換。根據組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。
裝置:
(1)分離柱 裝有離子交換樹脂,如陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂或螯合離子交換樹脂。為了減小擴散阻力,提高色譜分離效率,要使用均勻粒度的小球形樹脂。最常用的陽離子交換樹脂是在有機聚合物分子(如苯乙烯-二乙烯基苯共聚物)上連接磺酸基官能團(─SO3─)。最常用的陰離子交換劑是在有機聚合物分子上連接季銨官能團(─NH4)。這些都是常規高交換容量的離子交換樹脂,由於它們的傳質速度低,使柱效和分離速度都低。C.霍瓦特描述了一種薄膜陰離子交換樹脂,它是在苯乙烯-二乙烯基苯共聚物核心上沉澱一薄層陰離子交換樹脂,就象雞蛋有一薄層外皮那樣,離子交換反應只在外皮上進行,因此縮短了擴散的路徑,所以離子交換速度高,傳質快,提高了柱效。同樣,在小顆粒多孔硅膠上塗一薄層離子交換材料也可得到相同類型的樹脂。螯合離子交換樹脂具有絡合某些金屬離子而同時排斥另一些金屬離子的能力,因此這種樹脂具有很高的選擇性。除了離子交換柱外,其他高效液相色譜柱也可用於分離離子。
(2)抑制柱和柱後衍生作用 常用的檢測器不僅能檢測樣品離子,而且也對移動相中的離子有響應,所以必須消除移動相離子的干擾。在離子色譜中,消除(抑制)移動相離子干擾的常用方法有兩種。
①抑制反應,用抑制反應來改變移動相,使移動相離子不被檢測器測出。離子色譜通常使用電導檢測器。在抑制反應中??綞匝衾胱佣?裕?把高電導率移動相的氫氧化物轉變成水,而樣品離子則轉變成它們相應的酸:
NaOH+H+─→Na++H2O
NaX+H+─→HX+Na+
在裝有強酸性陽離子交換樹脂的柱中進行抑制反應,使用一段時間後,這種樹脂就需要再生,很不方便。改用連接有磺酸基(─SO3H)的離子交換膜(陽離子交換膜)或用連接有銨基(─NH4)的離子交換膜(陰離子交換膜),就可以連續進行抑制反應。例如,陽離子交換膜可使陽離子通過它擴散過去,而陰離子則不能擴散過去。
1981年,T.S.史蒂文斯和斯莫爾等報道了中空纖維抑製法。這種纖維是由陽離子交換膜材料拉制而成。用這種方法不僅不需要再生抑制柱而且減小了峰的加寬,提高了柱效。一種比較新的膜技術是加一電場以加速離子的傳遞,該法與中空纖維法比較,其優點是反應時間短、交換能力高,並且可以用於陽離子和陰離子兩者。
②柱後衍生作用,將從柱子流出的洗出液與對被測物有特效作用的試劑相混合,在一反應器中生成帶色的絡合物(見配位化合物)。對衍生試劑最重要的要求是它們與被測物能生成絡合物,但不與移動相生成絡合物。柱後衍生法能用於測定重金屬離子,所用的衍生試劑有茜素紅S等。
(3)檢測器 分為通用型和專用型。通用型檢測器對存在於檢測池中的所有離子都有響應。離子色譜中最常用的電導檢測器就是通用型的一種。紫外-可見分光光度計是專用型的檢測器,對離子具有選擇性響應。可變波長紫外檢測器與電導檢測器聯用,能幫助鑒定未知峰,分辨重疊峰和提供電導檢測器不能測定的陰離子,如硫化物及亞砷酸中的陰離子的檢測。
在離子色譜中,電導檢測法總是和抑制反應配合使用。這種檢測器對分子不響應,如水、乙醇或者不離解的弱酸分子等。對於電導檢測器,一個重要的條件是溫度要穩定,所以檢測池要放在恆溫箱中,1982年H.薩托設計一種雙示差電導檢測器,消除了溫度變化對檢測的影響,可測定10-9摩爾的陰離子。
應用:
離子色譜主要用於測定各種離子的含量,特別適於測定水溶液中低濃度的陰離子,例如飲用水水質分析,高純水的離子分析,礦泉水、雨水、各種廢水和電廠水的分析,紙漿和漂白液的分析,食品分析,生物體液(尿和血等)中的離子測定,以及鋼鐵工業、環境保護等方面的應用。離子色譜能測定下列類型的離子:有機陰離子、鹼金屬、鹼土金屬、重金屬、稀土離子和有機酸,以及胺和銨鹽等。
4. 色譜儀都有哪些分類
色譜儀是利用樣品各組分在固定相和流動相中分配、吸附、離子交換、空間排阻或生物親和等作用的差異,使各組分在作相對運動的兩相中反復多次受到上述各作用而達到相互分離,分類有多種。
一、按流動相物態可分:
1、氣相色譜儀:流動相為氣體。
2、液相色譜儀:流動相為液體。
二、按固定相物態可分:
1、氣液色譜儀:流動相為氣體(稱為載氣),固定相為液體。
2、氣固色譜儀:流動相為氣體(稱為載氣),固定相為固體吸附劑。
3、液液色譜儀:流動相為液體(稱為淋洗液),固定相為液體。
4、液固色譜儀:流動相為液體(稱為淋洗液),固定相為固體吸附劑。
三、按固定相使用形式可分:
1、柱色譜儀:固定相裝於柱內。
2、平板色譜儀:固定相均勻塗在玻璃板或塑料板上。
3、紙色譜儀:用濾紙作固定相或固定相的載體。
四、按色譜柱結構可分:
1、填充柱色譜儀:色譜柱為填充柱。
2、毛細管柱色譜儀:色譜柱為毛細管柱。
五、按分離機理可分:
1、分配色譜儀:利用組分在固定液(固定相)中的溶解度大小不同進行分離。
2、吸附色譜儀:利用組分在吸附劑(固定相)上的吸附能力強弱不同進行分離。
3、離子交換色譜儀:利用組分在離子交換劑(固定相)上的親和力大小不同進行分離。
4、凝膠色譜儀:利用大小不同的分子在多孔固定相中的選擇性滲透進行分離。
5、生物親和色譜儀:利用生物大分子與固定相表面存在某種特異性親和力進行分離。
5. 分離純化常用的色譜分離方法有哪些它們的原理是什麼
1、色譜方法根據分離機制的不同可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠過濾內(分子容篩)色譜和親和色譜等。2、(1)吸附色譜法是指混合物隨流動相通過吸附劑時,由於該吸附劑對不同物質有不同的吸附力而使混合物分離的方法。(2)分配色譜系法是利用固定相與流動相之間對待分離組分溶解度的差異來實現分離。(3)離子交換色譜法是利用離子交換原理和液相色譜技術的結合來測定溶液中陽離子和陰離子的一種分離分析方法。凡在溶液中能夠電離的物質通常都可以用離子交換色譜法進行分離。(4)凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術,是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術,由於設備簡單、操作方便,不需要有機溶劑,對高分子物質有很高的分離效果。(5)親和色譜法是將相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相,利用與固定相不同程度的親和性,使成分與雜質分離的色譜法。
6. 色譜法分幾種
2. 液相色譜法 (liquid chromatography 簡稱 LC)用液體作流動相的色譜法。 3. 超臨界流體色譜法 (SFC) 用超臨界狀態的流體作流動相的色譜法。 超臨界狀態的流體不是一般的氣體或流體 , 而是臨界壓力和臨界溫度以上高度壓縮的氣體 , 其密度比一般氣體大得多而與液體相似 , 故又稱為 「 高密度氣相色譜法 」 (二)按分離原理分 1. 吸附色譜法( adsorption chromatography ): 根據吸附劑表面對不同組分物理吸附能力的強弱差異進行分離的方法。 如:氣一固色譜法、液-固色譜法——吸附色譜 2. 分配色譜法 (partition chromatography ): 根據不同組分在固定相中的溶解能力和在兩相間分配系數的差異進行分離的方法。 如:氣-液色譜法、液-液色譜法——分配色譜 3. 離子交換色譜法(ion exchange chromatography ) 根據不同組分離子對固定相親和力的差異進行分離的方法。 4. 排阻色譜法( size exclusion chromatography): 又稱凝膠色譜法 (gel chromatography ), 根據不同組分的分子體積大小的差異進行分離的方法。 其中:以水溶液作流動相的稱為凝膠過濾色譜法 ;以有機溶劑作流動相的稱為凝膠滲透色譜法。 5. 親合色譜法 (affinity chromatography) 利用不同組分與固定相共價鍵合的高專屬反應進行分離的方法。 (三)按固定相的形式 1. 柱色譜法(column chromatography ): 固定相裝在柱中 , 試樣沿著一個方向移動而進行分離。 包括 填充柱色譜法:固定相填充滿玻璃管和金屬管中 開管柱色譜法:固定相固定在細管內壁(毛細管柱色譜法) 2. 平板色譜法 (planer chromatography ): 固定相呈平面狀的色譜法。 包括 紙色譜法: 以吸附水分的濾紙作固定相; 薄層色譜法:以塗敷在玻璃板上的吸附劑作固定相。|||色譜法(又稱層析法)根據其分離原理可分為:吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜等。吸附色譜法是利用被分離物質在吸附劑上被吸附能力的不同,用溶劑或氣體洗脫使組分分離;常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚醯胺等有吸附活性的物質。分配色譜是利用被分離物質在兩相中分配系數的不同使組分分離;其中一相被塗布或鍵合在固體載體上,稱為固定相,另一相為液體或氣體,稱為流動相。常用的載體有硅膠、硅藻土、硅鎂型吸附劑與纖維素粉等。離子交換色譜是利用被分離物質在離子交換樹脂上交換能力的不同使組分分離;常用的有不同強度的陽、陰離子交換樹脂,流動相為水或含有機溶劑的緩沖液。分子排阻色譜法又稱凝膠色譜法,是利用被分離物質分子量大小的不同導致在填料上滲透程度不同使組分分離;常用的填料有分子篩、葡聚糖凝膠、微孔聚合物、微孔硅膠或玻璃珠等,根據固定相和供試品的性質選用水或有機溶劑作為流動相。 色譜法又可根據分離方法分為:紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。所用溶劑應與供試品不起化學反應,純度要求較高。分析時的溫度,除氣相色譜法或另有規定外,系指在室溫操作。分離後各成分的檢出,應採用各品種項下所規定的方法。採用紙色譜法、薄層色譜法或柱色譜法分離有色物質時,可根據其色帶進行區分,分離無色物質時,可在短波(254nm)或長波(365nm)紫外光燈下檢視,其中紙色譜或薄層色譜也可噴以顯色劑使之顯色,或在薄層色譜中用加有熒光物質的薄層硅膠,採用熒光猝滅法檢視;柱色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法可用接於色譜柱出口處的各種檢測器檢測;柱色譜法還可分部收集流出液後用適宜方法測定。|||氣相色譜法系採用氣體為流動相(載氣)流經裝有填充劑的色譜柱進行分離測定的色譜方法。物質或其衍生物氣化後,被載氣帶入色譜柱進行分離,各組分先後進入檢測器,用記錄儀、積分儀或數據處理系統記錄色譜信號。 高效液相色譜法是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,經進樣閥注入供試品,由流動相帶入柱內,在柱內各成分被分離後,依次進入檢測器,色譜信號由記錄儀或積分儀記錄。 氣相色譜和液相色譜各有其優缺點和應用范圍: 氣相色譜採用氣體作為流動相,由於物質在氣相中的流速比在液相中快得多,氣體又比液體的滲透性強,因而相比液相色譜,氣相色譜柱阻力小,可以採用長柱,例如毛細管柱,所以分離效率高。 由於氣相色譜毋需使用有機溶劑和價格昂貴的高壓泵,因此氣相色譜儀的價格和運行費用較低,且不易出故障。 能和氣相色譜分離相匹配的檢測器種類很多,因而可用於各種物質的分離與檢測。特別是當使用質譜儀作為檢測器時,氣相色譜很容易把分離分析與定性鑒定結合起來,成為未知物質剖析的有力工具。 氣相色譜不能分析在柱工作溫度下不汽化的組分,例如,各種離子狀態的化合物和許多高分子化合物 氣相色譜也不能分析在高溫下不穩定的化合物,例如蛋白質等。 液相色譜則不能分析在色譜條件下為氣體的物質,但卻能分離不揮發、在某溶劑中具有一定溶解度的化合物,例如高分子化合物、各種離子型化合物以及受熱不穩定的化合物(蛋白質、核酸及其它生化物質)。|||色譜法分類 (一)按兩相物理狀態分 1. 氣相色譜法 (gas chromatography 簡稱 GC)用氣體作流動相的色譜法。 2. 液相色譜法 (liquid chromatography 簡稱 LC)用液體作流動相的色譜法。 3. 超臨界流體色譜法 (SFC) 用超臨界狀態的流體作流動相的色譜法。 超臨界狀態的流體不是一般的氣體或流體 , 而是臨界壓力和臨界溫度以上高度壓縮的氣體 , 其密度比一般氣體大得多而與液體相似 , 故又稱為 「 高密度氣相色譜法 」(二)按分離原理分 1. 吸附色譜法( adsorption chromatography ): 根據吸附劑表面對不同組分物理吸附能力的強弱差異進行分離的方法。 如:氣一固色譜法、液-固色譜法——吸附色譜 2. 分配色譜法 (partition chromatography ): 根據不同組分在固定相中的溶解能力和在兩相間分配系數的差異進行分離的方法。 如:氣-液色譜法、液-液色譜法——分配色譜 3. 離子交換色譜法(ion exchange chromatography ) 根據不同組分離子對固定相親和力的差異進行分離的方法。 4. 排阻色譜法( size exclusion chromatography): 又稱凝膠色譜法 (gel chromatography ), 根據不同組分的分子體積大小的差異進行分離的方法。 其中:以水溶液作流動相的稱為凝膠過濾色譜法 ;以有機溶劑作流動相的稱為凝膠滲透色譜法。 5. 親合色譜法 (affinity chromatography) 利用不同組分與固定相共價鍵合的高專屬反應進行分離的方法。 (三)按固定相的形式 1. 柱色譜法(column chromatography ): 固定相裝在柱中 , 試樣沿著一個方向移動而進行分離。 包括 填充柱色譜法:固定相填充滿玻璃管和金屬管中 開管柱色譜法:固定相固定在細管內壁(毛細管柱色譜法) 2. 平板色譜法 (planer chromatography ): 固定相呈平面狀的色譜法。 包括 紙色譜法: 以吸附水分的濾紙作固定相; 薄層色譜法:以塗敷在玻璃板上的吸附劑作固定相。|||還有一種現在常用的色譜即:高速逆流色譜,它屬於液-液分配色譜。利用樣品中各組分在兩相溶劑間分配比的差異,進行分離。它是不用固態載體的全液態的液-液分配色譜技術.優點:高效提純,能將樣品中有效成分提純至98%以上理論回收率為100% ,不存在樣品的不可逆吸附,極大地避免了樣品的變性問題操作簡單,無需太多樣品前處理等。相對於HPLC,溶質的分離原理僅於分配有關,避免了HPLC柱子與柱子之間的重現性差的現象。現在廣泛用於天然產物的制備分離。相關書籍參考《高速逆流色譜分離技術及應用》曹學麗 編著 化學工業出版社|||一)按兩相所處的狀態分類 液體作為流動相,稱為「液相色譜」(liquid chromatograp-hy);用氣體作為流動相,稱為「氣相色譜」(gas chromatogr-aphy)。固定相也有兩種狀態,以固體吸附劑作為固定相和以附載在固體上的液體作為固定相,所以層析法按兩相所處的狀態可以分為: 液-固色譜(liquid-solid chromatography)液-液色譜(liquid-liquid chromatography) 氣-固色譜(gas-solid chromatography) 氣-液色譜(gas-liquid chromatography)(二)按層析過程的機理分類 吸附層析(adsorption chromatography )利用吸附劑表面對不同組分吸附性能的差異,達到分離鑒定的目的。分配層析(partition chromatography)利用不同組分在流動相和固定相之間的分配系數(或溶解度)不同,而使之分離的方法。 離子交換層析(ion-exchange chromatography )利用不同組分對離子交換劑親和力的不同,而進行分離的方法。凝膠層析(gelchromatography)利用某些凝膠對於不同組分因分子大小不同而阻滯作用不同的差異,進行分離的技術。 (三)按操作形式不同分類 柱層析(colum chromatography)將固定相裝於柱內,使樣品沿一個方向移動而達到分離。紙層析(paper chrmatography)用濾紙作液體的載體(擔體support),點樣後,用流動相展開,以達到分離鑒定的目的。薄層層析(thin layper chromatography)將適當粒度的吸附劑鋪成薄層,以紙層析類似的方法進行物質的分離和鑒定。 >|||色譜法根據其分離原理可分為:吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜等 色譜法又可根據分離方法分為:紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。
7. 簡述離子交換色譜法
離子交換色譜法(ion exchange chromatography,IEC)
離子色譜分析法出現在20世紀70年代,80年代迅速發展起來,以無機、特別是無機陰離子混合物為主要分析對象。
離子交換色譜利用被分離組分與固定相之間發生離子交換的能力差異來實現分離。離子交換色譜的固定相一般為離子交換樹脂,樹脂分子結構中存在許多可以電離的活性中心,待分離組分中的離子會與這些活性中心發生離子交換,形成離子交換平衡,從而在流動相與固定相之間形成分配。固定相的固有離子與待分離組分中的離子之間相互爭奪固定相中的離子交換中心,並隨著流動相的運動而運動,最終實現分離。
表達式
離子交換色譜的分配系數又叫做選擇系數,其表達式為:
K_s=\frac{[RX^+]}{[X^+]}
其中[RX + ]表示與離子交換樹脂活性中心結合的離子濃度,[X + ]表示游離於流動相中的離子濃度
分離原理
離子交換色譜(ion exchange chromatography,IEC)以離子交換樹脂作為固定相,樹脂上具有固定離子基團及可交換的離子基團。當流動相帶著組分電離生成的離子通過固定相時,組分離子與樹脂上可交換的離子基團進行可逆變換。根據組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。
陽離子交換:
陰離子交換:
式中"--"表示在固定相上,Kxy和Kzm是交換反應的平衡常數,Z+和X-代表被分析的組分離子。M+和Y-表示樹脂上可交換的離子團。
離子交換反應的平衡常數分別為:
陽離子交換:
陰離子交換:
平衡常數K值越大,表示組分的離子與離子交換樹脂的相互作用越強。由於不同的物質在溶劑中離解後,對離子交換中心具有不同的親合力,因此具有不同的平衡常數。親合力大的,在柱中的停留時間長,具有高的保留值。
固定相
離子交換色譜常用的固定相為離子交換樹脂。目前常用的離子交換樹脂分為三種形式,一是常見的純離子交換樹脂。第二種是玻璃珠等硬芯子表面塗一層樹脂薄層構成的表面層離子交換樹脂,第三種為大孔徑網路型樹脂。它們各有特點,例如第二種樹脂有很高的柱效,但它的柱容量不大;第三種樹脂適用於非水溶液中物質的分離,因為它們的孔徑和內表面積大,不需要用水溶脹,便可滿意地使用。
典型的離子交換樹脂是由苯乙烯和二乙烯基苯交聯共聚而成:
其中,二乙烯基苯起了交聯和加牢整個構型的作用,其含量決定了樹脂交聯度大小。交聯度一般控制在4%~16%范圍內,高度交聯的樹脂較硬而且脆,也較滲透,但選擇性較好。在基體網狀結構上引入各種不同酸鹼基團作為可交換的離於基團。
按結合的基團不同,離子交換樹脂可分為陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂。陽離子交換樹脂上具有與樣品中陽離子交換的基團。陽離子交換樹脂又可分為強酸性和弱酸性樹脂。強酸性陽離子交換樹脂所帶的基團為磷酸基(一),其中和有機聚合物牢固結合形成固定部分,是可流動的能為其他陽離子所交換的離子。
陰離子交換樹脂具有與樣品中陰離子交換的基團。陰離子交換樹脂也可分為強鹼性和弱鹼性樹脂。
陰離子交換樹脂屬強鹼性,它是由有機聚合物骨架和一季胺鹼基團所組成,它帶有正電荷。而與相反的是可以移動的部分,它能被其它陰離子所交換
流動相
離子交換色譜的流動相最常使用水緩沖溶液,有時也使用有機溶劑如甲醇,或乙醇同水緩沖溶液混合使用,以提供特殊的選擇性,並改善樣品的溶解度。
離子交換色譜所用的緩沖液,通常用下列化合物配製:鈉、鉀、被的檸檬酸鹽,磷酸鹽,甲酸鹽與其相應的酸混合成酸性緩沖液或氫氧化鈉混合成鹼性緩沖液等。
8. 色譜法按原理分為幾類
按色譜法分離所依據的物理或物理化學性質的不同,又可將其分為5類,分別是:
1、吸附色譜法:利用吸附劑表面對不同組分物理吸附性能的差別而使之分離的色譜法稱為吸附色譜法。適於分離不同種類的化合物(例如,分離醇類與芳香烴)。
2、分配色譜法:利用固定液對不同組分分配性能的差別而使之分離的色譜法稱為分配色譜法。
3、離子交換色譜法:利用離子交換原理和液相色譜技術的結合來測定溶液中陽離子和陰離子的一種分離分析方法,利用被分離組分與固定相之間發生離子交換的能力差異來實現分離。
離子交換色譜主要是用來分離離子或可離解的化合物。它不僅廣泛地應用於無機離子的分離,而且廣泛地應用於有機和生物物質,如氨基酸、核酸、蛋白質等的分離。
4、尺寸排阻色譜法:是按分子大小順序進行分離的一種色譜方法,體積大的分子不能滲透到凝膠孔穴中去而被排阻,較早的淋洗出來;中等體積的分子部分滲透;
小分子可完全滲透入內,最後洗出色譜柱。這樣,樣品分子基本按其分子大小先後排阻,從柱中流出。被廣泛應用於大分子分級,即用來分析大分子物質相對分子質量的分布。
5、親和色譜法:相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相,利用與固定相不同程度的親和性,使成分與雜質分離的色譜法。例如利用酶與基質(或抑制劑)、抗原與抗體,激素與受體、外源凝集素與多糖類及核酸的鹼基對等之間的專一的相互作用;
使相互作用物質之一方與不溶性擔體形成共價結合化合物,用來作為層析用固定相,將另一方從復雜的混合物中選擇可逆地截獲,達到純化的目的。可用於分離活體高分子物質、過濾性病毒及細胞。或用於對特異的相互作用進行研究。
其應用:
色譜法的應用可以根據目的分為制備性色譜和分析性色譜兩大類。
制備性色譜的目的是分離混合物,獲得一定數量的純凈組分,這包括對有機合成產物的純化、天然產物的分離純化以及去離子水的制備等。
相對於色譜法出現之前的純化分離技術如重結晶,色譜法能夠在一步操作之內完成對混合物的分離,但是色譜法分離純化的產量有限,只適合於實驗室應用。
分析性色譜的目的是定量或者定性測定混合物中各組分的性質和含量。定性的分析性色譜有薄層色譜、紙色譜等,定量的分析性色譜有氣相色譜、高效液相色譜等。色譜法應用於分析領域使得分離和測定的過程合二為一,降低了混合物分析的難度縮短了分析的周期,是比較主流的分析方法。
在中華人民共和國葯典中,共有超過約600種化學合成葯和超過約400種中葯的質量控制應用了高效液相色譜的方法。