Ⅰ 求助：第一次使用超濾離心管應該怎麼處理
可能不同廠家的產品保存運輸條件不一樣。
如果有甘油等保護劑，那就一定要洗干凈再加樣品。版權
乾的超濾管也要先潤濕再用，否則可能不能完全利用膜面積。
最好，用樣品buffer潤洗下再加樣，最大程度保證蛋白活性。尤其是用過後保存在NaOH或乙醇中後。
一般還是離心機甩一下好，使膜充分浸潤。
降低吸附的辦法有：
1，蛋白濃度不要過低
2，盡量選用纖維素的低吸附超濾管
3，用前可以用Tween 80等去垢劑潤洗（不影響蛋白活性的前提下）
4，加入保護蛋白，如BSA(不影響蛋白後續使用的前提下)
用完保存在20% EtOH中，4C保存，防止長菌，依不同樣品可以重復使用不同的次數。
Ⅱ 超濾離心管怎麼使用
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱，導致堵管。若發生沉澱，要確定沉澱的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，後者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾），再濃縮至1ml左右，連續三次，最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多於500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然後吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉澱，可以先加入水，然後用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉澱懸起，然後倒掉，不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml
離心管，排出部分水，然後蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。
Ⅲ 超濾管能慮含有DMSO的水溶液嗎
現在的膜過濾技術包括「氣膜」和「液膜」，不管是氣膜還是液膜，他們都不是單一的進行「分子過濾或顆粒過濾」，同時還有「選擇過濾」，選擇過濾是利用超濾管的選擇特性來分離兩種物質，而不像分子過濾一樣只區分大小，選擇過濾區分的是不同特性的物質。所以說，超濾是可以過濾等尺寸不同物質分子的。
Ⅳ 請問DMSO作溶劑效果怎麼樣，毒性很大嗎想用它替代甲醇來配溶液
你好！DMSO學名是二甲基亞碸，是一種含硫有機化合物，分子式為C2H6OS，常溫下為無色無臭的透明液體，是一種吸濕性的可燃液體。具有高極性、高沸點、熱穩定性好、非質子、與水混溶的特性，能溶於乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多數有機物，被譽為「萬能溶劑」。在酸存在時加熱會產生少量甲基硫醇、甲 醛、二甲基硫、甲磺酸等化合物。在高溫下有分解現象，遇氯能發生劇烈反應,在空氣中燃燒發出淡藍色火焰。可作有機溶劑、反應介質和有機合成中間體。也可用作合成纖維的染 色溶劑、去染劑、染色載體,以及回收乙炔、二氧化硫的吸收劑。 綜上所述，DMSO是一種不錯的溶劑，如果你原來配溶液是用甲醇做溶劑，建議還用甲醇好，因為甲醇相對DMSO來說不僅毒性小，且純度高，而且DMSO做溶劑，容易產生干擾（S）。供參考吧！
Ⅳ 離心管和離心超濾管
離心管就來是一個簡單的可自以承受高轉速壓力的管子，比如離一些樣品，分離出上清沉澱。
離心超濾管會有一個類似於內管和外管的兩個部分，內管中是帶有一定分子量的膜，當高速離心時，分子量比它小的就漏到下面的管子（即外管）中了，分子量比它大的就截留在上面（即內管中），就是超濾的原理。。。。常用於濃縮樣品。
Ⅵ 做HPLC或者紫外用DMSO做溶劑可以嗎
做紫外的時候沒有問題，拿dmso做參比就是了。
做hplc的時候有點問題就是，dmso與流動相的相溶性問題，相容性不好，出的峰肯定很醜。還有就是你的分析物如果只能溶在dmso里，遇到流動相會有析出的話，我勸你還是不
...
呵呵，本來想查一下甲醇跟dmso是不是互溶，突然一想直接把兩個加起來實驗一下就好了嘛，結果顯示：兩者互溶良好。因為hplc流動相有甲醇跟水的組合，而dmso跟水也任意混的，所以二者相溶性很好。謝謝啦~~cooldogcl(站內聯系ta)dmso要是量大會影響,會影響目標峰的觀察.阿拉9983(站內聯系ta)originally
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cooldogcl
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2010-09-06
09:07:28:
dmso要是量大會影響,會影響目標峰的觀察.
你好！能講詳細一些嗎？如果我的樣品直接就是用dmso溶解的，做液相進一針也就是幾微升啊，不知道「量大」是怎麼講啊？cooldogcl(站內聯系ta)我說的量大是dmso的濃度或者說是dmso在溶劑中的比例,要是直接溶解的話就是很大了.dmso的液相峰很大,會掩蓋其他的峰.你那個不能用dmso溶解後加入其他溶劑來稀釋dmso嗎阿拉9983(站內聯系ta)originally
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2010-09-07
09:23:57:
我說的量大是dmso的濃度或者說是dmso在溶劑中的比例,要是直接溶解的話就是很大了.dmso的液相峰很大,會掩蓋其他的峰.你那個不能用dmso溶解後加入其他溶劑來稀釋dmso嗎
哦，可以用其他溶劑來稀釋的，甲醇就可以，但是要稀釋到多大比例呢，用甲醇跟dmso1:1稀釋可以嗎？
Ⅶ 【求助】做HPLC或者紫外用DMSO做溶劑可以嗎
做紫外的時候沒有問題，拿DMSO做參比就是了。
做HPLC的時候有點問題就是，DMSO與流動相的相溶性問題，相容性不好，出的峰肯定很醜。還有就是你的分析物如果只能溶在DMSO里，遇到流動相會有析出的話，我勸你還是不 ... 呵呵，本來想查一下甲醇跟DMSO是不是互溶，突然一想直接把兩個加起來實驗一下就好了嘛，結果顯示：兩者互溶良好。因為HPLC流動相有甲醇跟水的組合，而DMSO跟水也任意混的，所以二者相溶性很好。謝謝啦~~cooldogcl(站內聯系TA)DMSO要是量大會影響,會影響目標峰的觀察.阿拉9983(站內聯系TA)Originally posted by cooldogcl at 2010-09-06 09:07:28:
DMSO要是量大會影響,會影響目標峰的觀察. 你好！能講詳細一些嗎？如果我的樣品直接就是用DMSO溶解的，做液相進一針也就是幾微升啊，不知道「量大」是怎麼講啊？cooldogcl(站內聯系TA)我說的量大是DMSO的濃度或者說是DMSO在溶劑中的比例,要是直接溶解的話就是很大了.DMSO的液相峰很大,會掩蓋其他的峰.你那個不能用DMSO溶解後加入其他溶劑來稀釋DMSO嗎阿拉9983(站內聯系TA)Originally posted by cooldogcl at 2010-09-07 09:23:57:
我說的量大是DMSO的濃度或者說是DMSO在溶劑中的比例,要是直接溶解的話就是很大了.DMSO的液相峰很大,會掩蓋其他的峰.你那個不能用DMSO溶解後加入其他溶劑來稀釋DMSO嗎 哦，可以用其他溶劑來稀釋的，甲醇就可以，但是要稀釋到多大比例呢，用甲醇跟DMSO1:1稀釋可以嗎？
Ⅷ 請問DMSO和ep管會發生什麼化學反應么
不會。ep管 離心管 等試驗用耗材都是多聚物的 很穩定。我們做核磁氫譜碳譜時用DMSO在EP管里溶解樣品，在轉移到核磁管中去測試，沒有任何干擾信號。這都是純DMSO呢，你溶解葯品再稀釋，就更不會有事了。做細胞培養也都是用DMSO，也接觸到了同樣材質的一次性耗材，也對細胞沒有影響。況且，葯理實驗中允許DMSO溶解再用溶媒稀釋葯品，對實驗結果沒有影響的，放心吧。
Ⅸ 超濾離心管能耐受甲醇等有機溶劑嗎
超濾機的超濾膜，很多都是用酒精（乙醇）試劑來殺菌的
Ⅹ 超濾離心管用材要求
摘要 （1）選擇合適的超濾離心管。通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的產品。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。