過濾滅菌培養基

Ⅰ 請問制備培養基時如何過濾除菌

1、滅菌方法
培養基的滅菌方法主要有兩種，高壓除菌及.22um微孔濾膜過濾除菌。與過濾相比，高壓滅菌的工作強度小，成本較低，但易造成營養成分的流失，而且在多次加樣（無菌谷氨醯胺溶液，無菌碳酸氫鈉溶液等）過程中容易造成二次污染。大多數培養基採用0.1～0.2μm孔徑的微孔濾膜進行過濾滅菌，並且已成為培養基除菌的發展方向，它可低限度地減少培養基的營養損失。
1.1 高壓滅菌

某些培養基（如MEM）可進行高壓滅菌，例如清大天一的MEM培養基中的MD605、MD609等。這類培養基一般不含有L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉，一般是在培養基高壓滅菌後加入L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉的無菌的液體。另外可高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨醯-L-谷氨醯胺）可代替L-谷氨醯胺。
可高壓滅菌的培養基在121℃、15psi，15分鍾的條件下完全可達到滅菌效果及營養成分的最小損失，不需將滅菌時間延長。為保證高壓滅菌的效果，滅菌設備的驗證很關鍵。
1.2 過濾滅菌
可供過濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。一般情況下採取正壓過濾，正壓過濾較之負壓過濾具有流速高、過濾快、不易污染，可避免蛋白質產生大量氣泡等優點。一般使用過濾器可參照各供應商的產品說明書。
目前大多數實驗室和制葯企業採用微孔濾膜濾器（如Zeiss濾器）或立式微孔濾器（Millipore、Pall）除菌。微孔濾膜濾器為不銹鋼，中間可夾放0.22um濾膜。使用這種濾器最重要步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。如在使用Zeiss濾器時，先要用培養用水將濾膜充分潤濕，在安裝濾膜時可在其上放置一層定性濾紙再固定。消毒時旋鈕不要扭太緊，凡與空氣接觸部位都要包好（可用牛皮紙、紗布、無紡布等）；高壓滅菌後，在無菌環境中立即將旋鈕扭緊。過濾除菌結束後，要打開濾器，檢查濾膜是否完整，如果濾膜破裂，需重新進行過濾除菌過程。立式微孔濾器可以選用不同的微孔濾柱體積，因為濾膜的折疊，膜面積顯著增大，液體處理量大，而且不容易發生堵塞現象。

Ⅱ 微生物培養需要對培養基採用什麼方法進行滅菌

高溫滅菌。
在實驗室，是把配製好的培養基放在封閉的容器中，放到高壓滅菌鍋中滅菌。
在生產中，是把配製好的培養基放在封閉的大型設備中，在外面的夾套或內部的盤管中通入高壓蒸汽，加熱裡面的培養基滅菌。
產生滅菌效果的不是高壓，而是高壓產生的高溫。高溫使微生物死亡。

Ⅲ 如何對已滅菌的培養基進行無菌檢查

一般滅完菌後將培養基放在30-37度的環境中培養一天，看其有沒有長菌（液體看是否變渾濁，固體看是否長菌落），即可知是否滅菌後為無菌。

培養基配製完畢後，應立即滅菌，通常在高壓蒸汽滅菌鍋內，汽相120℃條件下，滅菌20分鍾。也可採用間歇滅菌法進行滅菌，即將培養基煮沸10分鍾，24小時後再煮沸20分鍾，如此連續滅菌三次，即可達到完全滅菌的目的。

經過滅菌的培養基應置於10℃下保存，特別是含有生長調節物質的培養基，在4～5℃低溫下保存要更好些。

(3)過濾滅菌培養基擴展閱讀

培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌，防止污染應該注意以下事項：

（1）確認工作細胞庫是否被污染，確認毒種工作種子批是否被污染，確認所用培養基及其添加成分（如小牛血清、NaHCO3等）是否被污染，均可用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認並排除。

同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中，可以從配製好的培養液中取少量加入營養瓊脂於恆溫培養箱內培養，48小時即可觀察有無污染。

（2）其它：高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證，確保滅菌和除菌效果；前者應在投產前及其後的每6個月進行驗證，後者應在每次除菌前、後進行驗證工作（至少應在除菌後進行一次）。

（3）另外，應將有毒區與無毒區嚴格分開，並有各自獨立的空氣凈化系統及孵室，有毒區對無毒區應保持相對負壓，防止病毒對培養細胞（尤其是細胞庫）的污染。

Ⅳ 使培養基達到徹底滅菌的方法是什麼

目前對於培養基的滅菌的一般方法是高壓蒸汽滅菌法，如果培養基中含有不耐高溫的活性成份，則可以採用過濾除菌或間歇滅菌法。

Ⅳ 檢測固體培養基滅菌效果的常用方法

檢測固體培養基滅菌效果的常用方法：每個菌種生產者和栽培戶，當採用一種新培養基，或使用新滅菌設備，或對滅菌壓力變更時，要通過試驗對培養基滅菌效果進行嚴格檢驗。具體檢驗方法如下：

1、滅菌結束後，在鍋內不同位置，取若干支試管或菌種瓶（袋），貼上標簽，置25℃～30℃下空白培養6天進行檢查。如果所有試管或菌種瓶（袋）培養基表面和內部無變化，表明已達到滅菌目的，可供接種使用。

2、如果個別試管或菌種瓶（袋）培養基上出現雜菌菌落，可能是在擺放試管、菌種瓶（袋）時，放得過緊，沒有間隙，導致熱蒸汽流通不暢，或滅菌鍋結構不合理等原因所致，應根據具體情況進行改進。

3、如果是大部分或全部試管、菌種瓶（袋）培養基上出現雜菌菌落，可判斷為溫度或滅菌時間不夠，要提高滅菌壓力或延長滅菌時間。經多批次滅菌和檢驗後，培養基都能達到徹底滅菌要求，以後在採用同樣培養基和同樣滅菌方法時，就不用每批都進行檢驗了。

檢測培養基滅菌是否合格的方法

滅菌是殺滅培養基中本身的原著菌或在空氣中附著的雜菌，更好的讓目標菌生長（減少雜菌消耗培養基中的營養，而且有些雜菌會抑制你目標菌的生長）。一般滅完菌後將培養基放在30-37度的環境中培養一天，看其有沒有長菌（液體看是否變渾濁，固體看是否長菌落），即知是否滅菌後為無菌。

把滅菌後的培養基按滅菌鍋內的不同位置，每處抽取數管（瓶）,標上記號，置25℃～30℃培養一周左右進行檢查。如果培養基沒有什麼變化，說明滅菌效果良好。

Ⅵ 這種培養基用什麼方法滅菌啊，只能濾膜過濾嗎

如果是乾粉培養基的話，你直接看瓶上的使用說明即可。
過濾一般是處理樣品的，培養基的滅菌一般不用過濾。
如果是自己配置就參照相應國家標准。 GB 4789.2008 或者 GB 4789.2010 上面有具體配方以及滅菌條件
一般都是121℃的 時間一般15.20.30min
切莫過濾，裡面或許會有CA鹽生成的，如果過濾就會造成鈣鹽不足。就會影響細菌生長了。就121℃滅菌吧 20-30 都行。
（其實滅菌最短的15分鍾，因為裡面含糖，不能高度過久）

Ⅶ 培養基的滅菌流程

原理
培養基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養料。由於微生物具有不同的營養類型，對營養物質的要求也各不相同，加之實驗和研究的目的不同，所以培養基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養角度分析，培養基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外，培養基還應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。
瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質，是應用最廣的凝固劑。加瓊脂製成的培養基在98～100℃下融化，於45℃以下凝固。但多次反復融化，其凝固性降低。
任何一種培養基一經製成就應及時徹底滅菌，以備純培養用。一般培養基的滅菌採用高壓蒸汽滅菌。
3材料
3.1器皿及材料
天平、稱量紙、牛角匙、精密pH試紙、量筒、刻度搪瓷杯、試管、三角瓶、漏斗、分裝架、移液管及移液管筒、培養皿及培養皿盒、玻璃棒、燒杯、試管架、鐵絲筐、剪刀、酒精燈、棉花、線繩、牛皮紙或報紙、紗布、乳膠管、電爐、滅菌鍋、乾燥箱。
3.2葯品試劑
蛋白腖、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、瓊脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麥芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽計、磷酸銨、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。
4流程
稱葯品→溶解→調pH值→融化瓊脂→過濾分裝→包紮標記→滅菌→擺斜面或倒平板。
5步驟
5.1培養基的制備
5.1.1稱量葯品
根據培養基配方依次准確稱取各種葯品，放入適當大小的燒杯中，瓊脂不要加入。蛋白腖極易吸潮，故稱量時要迅速。
5.1.2溶解
用量筒取一定量(約占總量的1/2)蒸餾水倒入燒杯中，在放有石棉網的電爐上小火加熱，並用玻棒攪拌，以防液體溢出。待各種葯品完全溶解後，停止加熱，補足水分。如果配方中有澱粉，則先將澱粉用少量冷水調成糊狀，並在火上加熱攪拌，然後加足水分及其它原料，待完全溶化後，補足水分。
5.1.3調節pH
根據培養基對pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液調至所需pH。測定pH可用pH試紙或酸度計等。
5.1.4溶化瓊脂
固體或半固體培養基須加入一定量瓊脂。瓊脂加入後，置電爐上一面攪拌一面加熱，直至瓊脂完全融化後才能停止攪拌，並補足水分(水需預熱)。注意控制火力不要使培養基溢出或燒焦。
5.1.5過濾分裝
先將過濾裝置安裝好（圖3-1）。如果是液體培養基，玻璃漏斗中放一層濾紙，如果是固體或半固體培養基，則需在漏斗中放多層紗布，或兩層紗布夾一層薄薄的脫脂棉趁熱進行過濾。過濾後立即進行分裝。分裝時注意不要使培養基沾染在管口或瓶口，以免浸濕棉塞， 引起污染。液體分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。固體分裝裝量為管高的1/5，半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜；分裝三角瓶，其裝量以不超過三角瓶容積的一半為宜。
5.1.6包紮標記
培養基分裝後加好棉塞或試管帽，再包上一層防潮紙，用棉繩系好。在包裝紙上標明培養基名稱，制備組別和姓名、日期等。
5.1.7滅菌
上述培養基應按培養基配方中規定的條件及時進行滅菌。普通培養基為121℃20min，以保證滅菌效果和不損傷培養基的有效成份。培養基經滅菌後，如需要作斜面固體培養基，則滅菌後立即擺放成斜面(圖3-2)，斜面長度一般以不超過試管長度的1/2為宜；半固體培養基滅菌後，垂直冷凝成半固體深層瓊脂。
5.1.8倒平板
將需倒平板的培養基，於水浴鍋中冷卻到45～50℃,立刻倒平板。
5.2滅菌方法
滅菌是指殺死或消滅一定環境中的所有微生物，滅菌的方法分物理和化學滅菌法兩大類。本實驗主要介紹物理方法的一種，即加熱滅菌。
加熱滅菌包括濕熱和乾熱滅菌兩種。通過加熱使菌體內蛋白質凝固變性，從而達到殺菌目的。蛋白質的凝固變性與其自身含水量有關，含水量越高，其凝固所需要的溫度越低。在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比乾熱大，因為在濕熱情況下，菌體吸收水分，使蛋白質易於凝固；同時濕熱的穿透力強，可增加滅菌效力。
5.2.1.高壓蒸汽滅菌法
高壓蒸汽滅菌用途廣，效率高，是微生物學實驗中最常用的滅菌方法。這種滅菌方法是基於水的沸點隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設計的。當蒸汽壓力達到1.05kg/cm2時，水蒸氣的溫度升高到121℃，經15～30min，可全部殺死鍋內物品上的各種微生物和它們的孢子或芽孢。一般培養基、玻璃器皿以及傳染性標本和工作服等都可應用此法滅菌（圖3-4）。
5.2.1.1操作方法和注意事項如下
加水
打開滅菌鍋蓋，向鍋內加水到水位線。立式消毒鍋最好用已煮開過的水，以便減少水垢在鍋內的積存。注意水要加夠，防止滅菌過程中干鍋。
裝料、加蓋
滅菌材料放好後，關閉滅菌器蓋，採用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，使蒸汽鍋密閉，勿使漏氣。
排氣

打開排氣口(也叫放氣閥)。用電爐加熱，待水煮沸後，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出，當有大量蒸汽排出時，維持5min，使鍋內冷空氣完全排凈。
升壓、保壓和降壓
當鍋內冷空氣排凈時，即可關閉排氣閥，壓力開始上升。當壓力上升至所需壓力時，控制電壓以維持恆溫，並開始計算滅菌時間，待時間達到要求（一般培養基和器皿滅菌控制在121℃，20min）後，停止加熱，待壓力降至接近「0」時，打開放氣閥。注意不能過早過急地排氣，否則會由於瓶內壓力下降的速度比鍋內慢而造成瓶內液體沖出容器之外。
滅菌後的培養基空白培養
滅菌後的培養基放於37℃培養箱中培養，經24h培養無菌生長，可保存備用；斜面培養基取出後，立即擺成斜面後空白培養；半固體的培養基垂直放置凝成半固體深層瓊脂後，空白培養。
5.2.2乾熱滅菌法
通過使用乾熱空氣殺滅微生物的方法叫乾熱滅菌。一般是把待滅菌的物品包裝就緒後，放入電烘箱中烘烤，即加熱至160～170℃維持1～2h。
乾熱滅菌法常用於空玻璃器皿、金屬器具的滅菌。凡帶有膠皮的物品，液體及固體培養基等都不能用此法滅菌。
5.2.2.1滅菌前的准備
玻璃器皿等在滅菌前必須經正確包裹和加塞，以保證玻璃器皿於滅菌後不被外界雜菌所污染。常用玻璃器皿的包紮和加塞方法如下：平皿用紙包紮或裝在金屬平皿筒內；三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙，用棉繩以活結扎緊，以防滅菌後瓶口被外部雜菌所污染；吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心，輕輕捅入管口，松緊必須適中，管口外露的棉花纖維統一通過火焰燒去，滅菌時將吸管裝入金屬管筒內進行滅菌，也可用紙條斜著從吸管尖端包起，逐步向上卷，頭端的紙卷捏扁並擰幾下，再將包好的吸管集中滅菌。
5.2.2.2乾燥箱滅菌
將包紮好的物品放入乾燥烘箱內，注意不要擺放太密，以免妨礙空氣流通；不得使器皿與烘箱的內層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至160～170℃並恆溫1～2h，注意勿使溫度過高，超過170℃，器皿外包裹的紙張、棉花會被烤焦燃燒。如果是為了烤乾玻璃器皿，溫度為120℃持續30分鍾即可。溫度降至60～70℃時方可打開箱門，取出物品，否則玻璃器皿會因驟冷而爆裂。
用此法滅菌時，絕不能用油、蠟紙包紮物品。
5.2.2.3火焰滅菌
直接用火焰灼燒滅菌，迅速徹底。對於接種環，接種針或其它金屬用具，可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進行滅菌。此外，在接種過程中，試管或三角瓶口，也採用通過火焰而達到滅菌的目的。

Ⅷ 培養基，培養器皿和植物材料通常怎樣滅菌

常用的滅菌方法可分為物理的和化學的兩類，即：物理方法如乾熱（烘燒和灼燒）、濕熱（常壓或高壓蒸煮）、射線處理（紫外線、超聲波、微波）、過濾、清洗和大量無菌水沖洗等措施；化學方法是使用升汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇水、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學葯品處理。這些方法和葯劑要根據工作中的不同材料不同目的適當選用。

1、培養基用濕熱滅菌
培養基在制備後的24小時內完成滅菌工序。高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內溫度也隨之增加。在0.1mpa的壓力下，鍋內溫度達121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。

注意完全排除鍋內空氣，使鍋內全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關閉放氣閥，通電後，待壓力上升到0.05mpa時，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零後，再關閉放氣閥。

關閥再通電後，壓力表上升達到0.1mpa時，開始計時，維持壓力0.1-0.15mpa，20分鍾。
按容器大小不同，保壓時間有所不同。見表1。該表所列數字是徹底滅菌很保險的數字，如果容器體積較大，但是放置的數量很少，也可以減少時間。
表1. 培養基高壓蒸汽滅菌所必需的最少時間

容器的體積/ml

在121℃滅菌所需最少時間/min

20-50

15

75-150

20

250-500

25

1000

30

到達保壓時間後，即可切斷電源，在壓力到0.5mpa，可緩慢放出蒸汽，應注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。當壓力降到零後，才能開蓋，取出培養基，擺在平台上，以待冷凝。不可久不放氣，引起培養基成分變化，以至培養基無法擺斜面。一旦放置過久，由於鍋爐內有負壓，蓋子打不開，只要將放氣閥打開，大氣壓入，內外壓力平衡，蓋子便易打開了。

對高壓滅菌後不變質的物品，如無菌水、栽培介質、接種工具，可以延長滅菌時間或提高壓力。而培養基要嚴格遵守保壓時間，既要保壓徹底，又要防止培養基中的成分變質或效力降低，不能隨意延長時間。

對於一些布製品，如實驗衣、口罩等也可用高壓滅菌。洗凈晾乾後用耐高壓塑料袋裝好，高壓滅局20-30分鍾。
高壓滅菌前後的培養基，其ph值下降0.2-0.3單位。高壓後培養基ph值的變化方向和幅度取決於多種因素。培養基中成分單一時和培養基中含有高或較高濃度物質時，高壓滅菌後的ph值變化幅度較大，甚至可大於2個ph值單位。環境ph值的變化大於0.5單位就有可能產生明顯的生理影響。

高壓滅菌通常會使培養基中的蔗糖水解為單糖，從而改變培養基的滲透壓。在8%-20%蔗糖范圍內，高壓滅菌後的培養基約升高0.43倍。

培養基中的鐵在高壓滅菌時會催化蔗糖水解，可使15%-25%的蔗糖水解為葡萄糖和果糖。培養基值小於5.5，其水解量更多，培養基中添加0.1%活性炭時，高壓下蔗糖水解大大增強，添加1%活性炭，蔗糖水解率可達5%。

為防止高壓滅菌產生的上述一些變化可用下列方法：
（1）經常注意搜集有關高壓滅菌影響培養基成分的資料，以便及時採取有效措施。
（2）設計培養基配方時盡量採用效果類似的穩定試劑並准確掌握劑量。如避免使用果糖和山梨醇而用甘露醇，以IBA代替IAA，控制活性炭的用量（在0.1%以下）注意ph值對高壓滅菌下培養基中成分的影響等。
（3）配製培養基時應注意成分的適當分組與加入的順序。如將磷、鈣和鐵放在最後加入。
（4）注意高壓滅菌後培養基ph值的變化及恢復動態。如高壓滅菌後的ph值常由5.8升高至6.48。而96小時後又會降至5.8左右。這樣在實驗中就可以根據這一規律加以掌握。
2、用於無菌操作的器械採用灼燒滅菌
在無菌操作時，把鑷子、剪刀、解剖刀等浸入95%的酒精中，使用之前取出在酒精燈火焰上灼燒滅菌。冷卻後，立即使用。操作中可採用250或500毫升的廣口瓶，放入95%的酒精，以便插入工具。
3、玻璃器皿及耐熱用具採用乾熱滅菌
乾熱滅菌是利用烘箱加熱到160-180℃的溫度來殺死微生物。由於在乾熱條件下，細菌的營養細胞的抗熱性大為提高，接近芽孢的抗熱水平，通常採用170℃持續90分鍾來滅菌。乾熱滅菌的物品要預先洗凈並乾燥，工具等要妥為包紮，以免滅菌後取用時重新污染。包紮可用耐高溫的塑料。滅菌時應漸進升溫，達到預定溫度後記錄時間。烘箱內放置的物品的數量不宜過多，以免防礙熱對流和穿透，到指定時間斷電後，待充分冷涼，才能打開烘箱，以免因驟冷而使器皿破裂。乾熱滅菌能源消耗太大，浪費時間。
4、不耐熱的物質採用過濾滅菌
一些生長調節劑，如赤黴素、玉米素、脫落酸和某些微生物是不耐熱的，不能用高壓滅菌處理，通常採用過濾滅菌方法。
一些化學成分在高溫高壓下會發生降解而失去效能或降低效能。經高溫滅菌後赤黴素GA3的活性僅及不經高溫滅菌的新鮮溶液的10%。蔗糖經高溫後部分被降解成d-葡萄糖和d-果糖，果糖又可被部分水解，產生抑制培養的植物組織生長的物質。高溫還可使碳水化合物和氨基酸發生反應。維生素具有不同程度的熱穩定性，但如果培養基的ph值高於5.5，則維生素b1會被迅速降解。泛酸鈣、植物組織提取物等要過濾滅菌，不能高溫滅菌，否則會失去作用。
防細菌濾膜的網孔的直徑為0.45微米以下，當溶液通過濾液後，細菌的細胞和真菌的孢子等因大於濾膜直徑而被阻，在需要過濾滅菌的液體量大時，常使用抽濾裝置；液量小時，可用注射器。使用前對其高壓滅菌，將濾膜裝在注射器的靠針管處，將待過濾的液體裝入注射器，推壓注射器活塞桿，溶液壓出濾膜，從針管壓出的溶液就是無菌溶液。
過濾除菌操作步驟：首先將過濾器、接液瓶用紙包好，濾膜可放在培養皿內用紙包好。使用前先經121℃高壓蒸汽滅菌30分鍾；在超凈工作台上，將濾器裝置裝好，用滅菌無齒鑷子將濾膜安放在隔板上，濾膜粗糙面向上；然後將待除菌的液體注入濾器內，開動真空泵即可過濾除菌。濾液經培養證明無菌生長後可保存備用。
5、空間採用紫外線和熏蒸滅菌
（1）紫外線滅菌在接種室、超凈台上或接種箱用紫外燈滅菌。紫外線滅菌是利用輻射因子滅菌，細菌吸收紫外線後，蛋白質和核酸發生結構變化，引起細菌的染色體變異，造成死亡。紫外線的波長為200-300nm，其中260nm的殺菌能力最強，但是由於紫外線的穿透能力很弱，所以只適於空氣和物體表面的滅菌，而且要求距照射物以不超過1.2米為宜。
（2）熏蒸滅菌用加熱焚燒、氧化等方法，使化學葯劑變為氣體狀態擴散到空氣中，以殺死空氣和物體表面的微生物。這種方法簡便，只需要把消毒的空間關閉緊密即可。
化學消毒劑的種類很多，它們使微生物的蛋白質變性，或競爭其酶系統，或降低其表面張力，增加菌體細胞漿膜的通透性，使細胞破裂或溶解。一般說來，溫度越高，作用時間越長，殺菌效果越好。另外，由於消毒劑必須溶解於水才能發揮作用，所以要製成水溶狀態，如升汞與高錳酸鉀。還有消毒劑的濃度一般是濃度越大，殺菌能力越強，但石炭酸和酒精例外。
常用熏蒸劑是甲醛，熏蒸時，房間關閉緊密，按5-8ml/m3用量，將甲醛置於廣口容器中，加5g/m3高錳酸鉀氧化揮發。熏蒸時，房間可預先噴濕以加強效果。冰醋酸也可進行加熱熏蒸，但效果不如甲醛。
6、一些物體表面用葯劑噴霧滅菌
物體表面可用一些葯劑塗搽，噴霧滅菌。如桌面、牆面、雙手、植物材料表面等，可用75%的酒精反復塗搽滅菌，1%-2%的來蘇兒溶液以及0.25%-1%的新潔爾滅也可以。
7、植物材料表面用消毒劑滅菌
從外界或室內選取的植物材料，都不同程度地帶有各種微生物。這些污染源一旦帶入培養基，便會造成培養基污染。因此，植物材料必須經嚴格的表面滅菌處理，再經無菌操作手續接種到培養基上，這一過程叫做接種。接種的植物材料叫做外植體（explant)。
啟維益成代理的植物組培抗菌劑（PPM）它是一種廣譜抗微生物劑，可以殺死細菌和真菌細胞，防止真菌孢子的萌發，並在較高濃度下能消除內源性污染的外植體。
首先，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細洗干凈，如用適當的刷子等刷洗。把材料切割成適當大小，即滅菌容器能放入為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鍾至數小時，沖洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細小的材料，可裝入紗布袋內沖洗。流水沖洗在污染嚴重時特別有用。
洗時可加入洗衣粉清洗，然後再用自來水沖洗洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表面的污物，除去脂質性的物質，便於滅菌液的直接接觸。當然，最理想的清洗物質是表面活性物質吐溫。
第二步是對材料的表面浸潤滅菌。要在超凈台或接種箱內完成，准備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手錶等。用70%酒精浸泡10-30秒。由於酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強，也很易殺傷植物細胞，所以浸潤時間不能過長。有一些特殊的材料，如果實、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內部的材料，則可只用70%酒精處理稍長的時間。處理完的材料在無菌條件下，待酒精蒸發後再剝除外層，取用內部材料。
第三步是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多，可根據情況選取1-2種使用（表2）。
表2. 常用滅菌劑使用濃度及效果比較

滅菌劑名稱

使用濃度

滅菌時間/min

滅菌效果

酒精

70-75%

0.1-3

好

氯化汞

0.1-0.2%

2-10

很好

漂白粉

飽和溶液%

5-30

很好

次氯酸鈣

9-10%

5-30

很好

次氯酸鈉

2%

5-30

很好

過氧化氫

10-12%

5-15

好

抗菌素

4-50mg/L

30-60

較好

上述滅菌劑應在使用前臨時配製，氯化汞可短期內儲用。次氯酸鈉和次氯酸鈣都是利用分解產生氯氣來殺菌的，故滅菌時用廣口瓶加蓋較好；升汞是由重金屬汞離子來達到滅菌的；過氧化氫是分解中釋放原子態氧來殺菌的，這種葯劑殘留的影響較小，滅菌後用無菌水漂洗3-4次即可；由於升汞液滅菌的材料，難以對升汞殘毒去除，所以應當用無菌水漂洗8-10次，每次不少於3分鍾，以盡量去除殘毒。

滅菌時，不瀝乾的植物材料轉放到燒杯或其他器皿中，記好時間，倒入消毒溶液，不時用玻璃棒輕輕攪動，以促進材料各部分與消毒溶液充分接觸，驅除氣泡，使消毒徹底。在快到時間之前1-2分鍾，開始把消毒液傾入一備好的大燒杯內，要注意勿使材料倒出，傾倒干凈後立即倒入無菌水，輕攪漂洗。滅菌時間是從倒入消毒液開始，至倒入無菌水時為止。記錄時間還便於比較消毒效果，以便改正。滅菌液要充分浸沒材料。寧可多用些滅菌液，切勿勉強在一個體積偏小的容器中使用很多材料滅菌。

在滅菌溶液中加吐溫-80或triton X效果較好，這些表面活性劑主要作用是使葯劑更易於展布，更容易浸入到滅菌的材料表面。但吐溫加入後對材料的傷害也在增加，應注意吐溫的用量和滅菌時間，一般加入滅菌液的0.5%，即在100ml加入15滴。

最後一步是用無菌水漂洗，漂洗要求3分鍾左右，視採用的消毒液種類，漂洗3-10次左右。無菌水漂洗作用是免除消毒劑殺傷植物細胞的副作用。