1. 蛋白在超濾管濃縮過程中出現沉澱怎麼辦
1、選擇合抄適的超濾管,主要考慮襲MWCO和濃縮體積,最常見的是Ultra-15(10kD)。
通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。
若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。
注意,一定要等離心機達到目的轉速之後,方可離開
離心機,否則離心機出問題時,無法第一時間處理,後果不可預測!膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
2. 如何檢測超濾管的膜是否破損
可以根據產水的指標以及儀表參數變化來進行間接地判斷,當然還有其他的方法,直接方法倒是沒聽說
3. 蛋白用超濾管濃縮容易沉澱怎麼辦
可能是抄這個蛋白的水溶性較差,也就是只能保持在一定濃度不能太高
另外就和這個蛋白的穩定性有關了,超濾時保持低溫,體積縮小一點後就把濾液混勻避免局部濃度過高,選擇更合適的緩沖液,添加一點甘油等小分子物質等都可以增加蛋白的穩定性。
4. 超濾離心管離心蛋白時離心幹了怎麼辦
不建議用離心管離蛋白。最好還是膜處理比較好。
蛋白會粘附在渣里,只有用緩沖液再潤洗咯。
5. 蛋白分子量為45KD應選用截留分子量30kd的超濾管合適嗎
3KD指的是截留分子量截留分子量(MWCO:molecularweightcutoff)是使用分子量大小表示的超濾膜的截留性能,專又稱作切割分子量。由屬於直接測定超濾膜的孔徑相當困難,所以使用已知分子量的球狀物質進行測定。如膜對被截留物質的截留率大於90%時,就用被截留物質的分子量表示膜的截留性能,稱為膜的截留分子量。實際上,所使用的物質並非絕對的球形,由於試驗條件的限制,所測定的截留率也有一定的誤差,所以截留分子量不能絕對表示膜的分離性能。也就是說3KD分子量的產品有可能透過膜也有可能被膜攔截,一般來說希望3KD的產品全部透過,需要選擇截留分子量更大的膜,比如5KD
6. 超濾離心管濃縮蛋白會損失嗎
會有少量損失。取決於緩沖液,濾網的網眼大小和蛋白質的分子量
7. 超濾離心管能分離蛋白和聚乙二醇嗎
超濾離心管可以用來分離蛋白和聚乙二醇的
聚乙二醇(PEG)是一種分子量內很小的試劑,而超濾管的容截留分子量一般是在3000道爾頓~10000道爾頓之間。絕大多數蛋白可以被截留在超濾管上層,而聚乙二醇可以穿透濾膜到達超濾管下層
所以超濾離心管可以用來分離蛋白和聚乙二醇的
8. 取50ul國產Bradford溶液 ,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白.
先回答你的問題:
Bradford溶液現在自己配也行(其實就是考馬斯亮藍溶液),不過買商品化的也很多,可以買Bradford蛋白定量試劑盒之類的東西。可以用這個試劑檢測溶液中蛋白的濃度。如果要自己配,可以參考:http://..com/link?url=7UwTia_b3FPpAaia
在用超濾管的時候,保留在上方的是所需蛋白樣品,超濾膜下方收集到的溶液就是流穿液。
這個意思應該是說,如果超濾完全保留蛋白,流穿液中理論是沒有蛋白的,所以加入bradford溶液(棕紅色)是不應該引起溶液變色的。但是如果有蛋白,會與Bradford溶液反應,變成藍色。但是也有問題,超濾膜只能保留一定分子量以上的蛋白,如果截留分子量比較大,例如30K或者更大,有一些小的蛋白還是會進到流穿液的,會產生變色反應,而且肉眼觀察變色,也沒有辦法給出具體蛋白的量,可能還是用儀器檢測一下比較好。
9. 蛋白大小為27.8kd,應該用多大的超濾管截流
3KD指的是截留分子量
截留分子量(MWCO:molecular weight cutoff)是使用分子量大小表示的超濾膜的內截留性能,又稱容作切割分子量。
由於直接測定超濾膜的孔徑相當困難,所以使用已知分子量的球狀物質進行測定。如膜對被截留物質的截留率大於90%時,就用被截留物質的分子量表示膜的截留性能,稱為膜的截留分子量。實際上,所使用的物質並非絕對的球形,由於試驗條件的限制,所測定的截留率也有一定的誤差,所以截留分子量不能絕對表示膜的分離性能。也就是說3KD分子量的產品有可能透過膜也有可能被膜攔截,一般來說希望3KD的產品全部透過,需要選擇截留分子量更大的膜,比如5KD
10. 使用超濾管濃縮蛋白需要再脫鹽嗎
是否脫鹽,是根據您要達到的最終效果!