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超濾後怎麼取沉澱

發布時間:2022-04-17 03:20:32

過濾後如何洗滌沉澱

向漏斗中加少量蒸餾水至沒過沉澱,濾干後重復操作2~3次.

㈡ 蛋白用超濾管濃縮容易沉澱怎麼辦

可能是抄這個蛋白的水溶性較差,也就是只能保持在一定濃度不能太高
另外就和這個蛋白的穩定性有關了,超濾時保持低溫,體積縮小一點後就把濾液混勻避免局部濃度過高,選擇更合適的緩沖液,添加一點甘油等小分子物質等都可以增加蛋白的穩定性。

㈢ 過濾後,若要洗滌沉澱,應該怎樣洗滌

向漏斗中加少量蒸餾水至沒過沉澱,濾干後重復操作2~3次。

祝學習進步~

㈣ 超濾機過濾後,水中為什麼還是有沉澱物

目前市場上抄的家用凈水器主要分為純水襲類型凈水機和超濾類凈水機兩大類型。而純水機由於過濾精度極高(這種機型需要用電),
在過濾掉水中的有害物質以及微量元素都過濾掉了。而超濾類機型在過濾有害物質的同時,保留了水中的鈣、鎂離子以及微量元素。而水中的鈣、鎂離子隨著溫度的不斷升高,就會被氧化還原,形成白色的結晶物,這是一種氧化還原現象,而並非水中雜質。(如果用礦泉水燒開水一樣會有這種現象發生)。所以樓主大可放心使用。個人建議,一般不泡茶時,最好不要把水燒開,加溫到人體體溫接近就可以了。(這樣水中的鈣、鎂離子就不會被氧化還原)因為燒開始是中國傳統的凈水模式,主要目的是為了殺菌,而通過超濾型凈水機能把水中細菌過濾掉,是可以直接飲用的。

㈤ 蛋白在超濾管濃縮過程中出現沉澱怎麼辦

1、選擇合抄適的超濾管,主要考慮襲MWCO和濃縮體積,最常見的是Ultra-15(10kD)。
通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。
若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同,表格中有。

2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。

3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。

注意,一定要等離心機達到目的轉速之後,方可離開
離心機,否則離心機出問題時,無法第一時間處理,後果不可預測!膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。

㈥ 超濾離心管怎麼使用

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管(MWCO10kD)。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時,【取50ul國產Bradford溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mg/ml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測】,繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱,導致堵管。若發生沉澱,要確定沉澱的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,後者的方法是換不同的Buffer,直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續三次,最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多於500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,用黃槍頭(200ul)取,輕輕順著邊緣插入槍頭,輕輕吹打、混勻蛋白液,注意不要碰到超濾膜,然後吸取濃縮液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取,否則難度太大,有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中,沒過超濾膜,防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管,重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤洗幾次,【若管底有可見的蛋白沉澱,可以先加入水,然後用槍頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉澱懸起,然後倒掉,不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗,內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯,加至接近滿的MilliQ水,50ml管也加滿MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml
離心管,排出部分水,然後蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來說,按照上述步驟和注意事項,每根管用三四年不會壞。

㈦ 過濾法是最常用的的分離方法之一,常用的三種過濾方法是什麼各自的操作注意事

1 常壓過濾:漏斗要放在漏斗架上,調整好漏斗架的高度,使漏斗的出口靠在接收器的內壁版上,這樣,濾液可權順著器壁流下,不致四濺。先轉移溶液,後轉移沉澱。這樣就不會因沉澱堵塞濾紙的孔隙而減慢過濾速率。轉移溶液和沉澱時,均應使用攪拌棒。轉移溶液時,應把溶液滴在三層濾紙的側面,以防液滴把單層濾紙沖破。加入漏斗中的溶液不能超過圓錐濾紙的總容積的2/3。
2 減壓過濾(抽吸過濾):濾紙的大小應剪得比布氏漏斗的內徑略小,以能恰好蓋住瓷板上的所有小孔為佳。先由洗瓶吹出少量蒸餾水潤濕濾紙,再開啟水泵,使濾紙緊貼在漏斗內的瓷板上,然後才能進行過濾。從吸濾瓶上口倒出濾液時,支管必須向上。在吸濾過程中,不得突然關閉水泵,防止倒吸現象發生。過濾完畢後,先拔掉橡皮管,後關水泵。用手指或玻璃棒輕輕揭起濾紙邊,取下濾紙和沉澱。吸濾瓶中的濾液最後從其上口傾出。
3 熱過濾:選用玻璃漏斗的頸部越短越好,以免過濾時溶液在漏斗頸內停留過久,因散熱降溫析出晶體而發生堵塞

㈧ 常壓過濾去除沉澱的要法

常壓過濾操作可總結為「一角」、「二低」和「三靠」。「一角」是濾紙的折疊,必須和漏斗的角度相符,使它緊貼漏斗壁,並用水濕潤。「二低」是濾紙的邊緣須低於漏鬥口5毫米左右,漏斗內液面又要略低於濾紙邊緣,以防固體混入濾液。「三靠」是過濾時,盛待過濾液的燒杯嘴和玻璃棒相靠,液體沿玻棒流進過濾器;玻璃棒末端和濾紙三層部分相靠;漏斗下端的管口與用來裝盛濾液的燒杯內壁相靠;使過濾後的清液成細流沿漏斗頸和燒杯內壁流入燒杯中。
操作時應根據沉澱性質選擇濾紙,一般粗大晶形沉澱用中速濾紙,細晶或無定性沉澱選用慢速濾紙,沉澱為膠體狀時應用快速濾紙。所謂快慢之分是按濾紙孔隙大小而定,快則孔隙大。首先選擇合適的濾紙,將濾紙沿圓心對折兩次,但先不要折死。按三層一層比例將其撐開呈圓錐狀放入漏斗中,如果上沿不十分密合,可改變濾紙的折疊角度,且要求濾紙邊緣應低於漏斗沿0.5~1.0cm,直到與漏斗密合為止。這時可將濾紙的折邊折死。撕去濾紙三層外面兩層的一角,要橫撕不要豎撕,撕角的目的是使濾紙能緊貼漏斗。將濾紙放入漏斗,加少量蒸餾水潤濕濾紙,輕壓濾紙趕走氣泡。加水至濾紙邊緣,使漏斗頸中充滿水,形成水柱,以便過濾時該水柱重力可起到抽濾作用,加快過濾速度。 如不能形成完整的水柱,可用手指堵住漏斗下口,繼續向漏斗內加蒸餾水,趕盡濾紙與漏斗間的氣泡,同時慢慢放開手指,即可形成水柱。若再不行,應考慮換頸細的漏斗。此時可開始過濾操作。
過濾時,置漏斗於漏斗架上,漏斗頸與接收容器緊靠,用玻璃棒貼近三層濾紙一邊,a.首先沿玻棒傾入沉澱上層清液,一次傾入的溶液一般最多隻充滿濾紙的2/3,以免少量沉澱因毛細作用越過濾紙上沿而損失。傾析完成後,在燒杯內將沉澱用少量洗滌液攪拌洗滌,靜置沉澱,再如上法傾出上清液。如此3-4次。殘留的少量沉澱可用如下方法全部轉移干凈。左手持燒杯傾斜著拿在漏鬥上方,燒杯嘴向著漏斗。用食指將玻璃棒橫架在燒杯口上,玻璃棒的下端向著濾紙的三層處,用洗瓶吹出洗液,沖洗燒杯內壁,沉澱連同溶液沿玻璃棒流入漏斗中。B.沉澱全部轉移到濾紙上以後,仍需在濾紙上洗滌沉澱,以除去沉澱表面吸附的雜質和殘留的母液。其方法是從濾紙邊沿稍下部位開始,用洗瓶吹出的水流,按螺旋形向下移動。並藉此將沉澱集中到濾紙錐體的下部。洗滌時應注意,切勿使洗滌液突然沖在沉澱上,這樣容易濺失。
為了提高洗滌效率,每次使用少量洗滌液,洗後盡量瀝干,多洗幾次,通常稱為「少量多次」的原則。
沉澱洗滌至最後,用干凈的試管接取幾滴濾液,選擇靈敏的定性反應來檢驗共存離子,判斷洗滌是否完成。

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