㈠ 微生物實驗室的安全操作規程
抄的哦
1 實驗室安全
1.1 微生物實驗室的生物安全性
1.2 科室安全文檔
（a）生物危害防護：實際操作規程見（《實驗室生物安全通用要求》，中華人民共和國國家標准GB19489-2004。2004-01-05發布，2004-10-01實施。）
（b）實驗室安全：原則和措施見（《微生物和生物醫學實驗室生物安全通用准則》，中華人民共和國衛生行業標准WS 233-2002。2002-12-03發布，2003-08-01實施。）
1.3 應用：
以上的操作規程應用於微生物科室的所有部門。工作人員或訪問人員必須遵守各項規定。
1.4 關於新規定或現行規定的修改案：
任何新規定或現行規定的修改案必須通知負責科室安全的人員及相關人員，他們將建議科室主任考慮實施。
1.5 生物性危害
1.5.1 與各種操作有關的生物危害水平取決於：
a.處理的傳染性物質的本身：
按照傳染性物質對個人和社區和潛在危險性以及經空氣傳播的可能性，其劃分成不同等級。所採用的等級劃分詳見」《實驗室生物安全通用要求》」；原則和措施（見《微生物和生物醫學實驗室生物安全通用准則》）。
b.使用的設備和設施：
處理不同等級的傳染性物質的要求在」實驗室安全」中已規定。這些符合要求的設備都要承擔重要臨床工作，科室負責人必須保證中應污染物水平。
c.培訓，特別是員工的安全性培訓和安全性經驗積累。所有員工應該接受一定訓練，能安全處理任何實驗室可能碰到的物質，避免將實驗不能處理或規定之外的傳染性物質暴露在實驗室，即使暴露事故在實驗室，即使暴露事故發生也要會正確處理。
1.5.2 傳染性物質的分類
1.5.2.1分類系統
生物危害防護：〔見1.2 (a)〕，根據生物因子對個體和群體的危害程度將其分為4級，危害等級Ⅳ最具危害性。
1.5.2.2危險群/生物安全水平：1－4
a.危險群/生物安全水平：1——對健康成人無致病性，對社區無危害性。通常一般微生物操作就足夠，不需特殊安全設備，工作的附近要有洗手設施。培養基上包含未鑒定物，因此，妥善處理對各級安全水平都至著重要。
b.危險群/生物安全水平：2——人類疾病相關物質，這種物質對實驗室工作人員有中度危險，並具有一定程度社區危險性。醫院微生物室所涉及的絕大多數物質屬此安全水平，生物危害警告應張貼，並且限制接近，應用醒目標語，若是能產生空氣傳播或飛濺的I，II類物質都就使用相就的操作台。實驗室就提供類似防護衣和手套，眼罩尤其是配戴隱形眼鏡者，也應提供類似安全水平的洗手設施，並且臨近工作區也應有高壓滅菌裝置。所有廢物和反復使用設備的去污染應有特定的程序。
c.危險群/生物安全水平：3——人類疾病相關物質，具有潛在空氣傳播性，能引起嚴重，致命疾病，對實驗室工作人員高度危險，並具有一定程度社區危險性。所有含有或懷疑含有生物案的標本必須標以」小心污染」標簽，並且同時標於盛放標本容器和申清單。然而作為預防保護還不足夠。應對所有血液，體液，分離的人體組織等有普通防護意識，它們都應視作傳染源。在此生物安全級，實驗室應控制對其接近。凡涉及該類物質都應使用I或II類工作台操作，也可以遵循II級操作注意事項，對所有廢物進行去污染處理，包括工作服和重復使用設備。
d.危險群/生物安全水平：4——對個人的危險如生物安全3級，但對社區有高度危險性。這些傳染性物質包括：
蜱源性腦炎病毒
支里半亞－剛果牛血熱病毒
Marburg Virus
艾波拉病毒
Lagsa fever Virus
Junin HF Virus
Machupo HF Virus
Guanaruto HF Virus
Herpesvirus simiae (B Virus)
1.6 以下預防措施，所有實驗工作人員必須遵守：
1.6.1 工作服
a.所有實驗室成員在工作期間必須始終穿著所提供的工作服。離開實驗室時，工作服須掛在指定地方，不得在實驗室外冼工作服。
b.在處理含有或懷疑含有生物安全3級物質的標本時，必須在工作服外穿隔離衣。
c.在生物安全操作台內處理標本和培養基時，必須戴手套。
1.6.2 洗手池
洗手池須供應洗潔劑和紙巾。
1.6.3 洗手
所有工作人員在離開工作區必須洗手，並且要先脫去工作服和手套。
1.6.4 食物，飲水，吸煙，化妝品
食物和飲料不允許帶入任何處理標本的房間.不允許在處理標本的任何地方吸煙.不允許在處理標本的任何地方使用化妝品。
1.6.5 傷口和擦傷
手上的傷口和擦傷必須覆蓋保護物。
1.6.6 個人衣物
個人衣物不允許帶入實驗室，並且必須保存在帶鎖的櫃子里。
1.6.7 口吸移液管
這是禁用的。要求使用機械移液裝置。
1.7 常規預防措施應用於所有血液、體液、組織標本的操作中：
1> 無論何時都應盡可能避免使用注射器，針頭或其它銳器。
2> 使用過的針頭和一次性切割器必須丟入專門的帶有蓋子和桶內，以備安全處理、防止容器過滿盛裝。
3> 使用過的針頭不許重新使用或再用手操作。
4> 打爛的玻璃必須放入堅硬的容器（不要用手），然後再放入黑色垃圾袋，如果是污染的，使用黃色垃圾袋。
5> 在接觸具有潛在性傳染性標本培養基、組織，必戴保護性手套，防止皮膚直接接觸。如果手套有可見的污染，必須先除去污染，再更換。手上有皮炎或傷口的工作人員的需要間接接觸傳染性物質的人員應戴保護性手套。
6> 在處理完標本、結束工作，甚至在上述規定帶手套時，應常規洗手。
7> 當血液、血液製品或其它體液污染發生時，應停止工作洗手，戴一次性手套再清除污染區。建議用含有效氯1000ppm的次氯酸鈉溶液。如果污染區較大用浸有次氯酸鈉溶液的濕布覆蓋10min去污染，並標示相應的警告，丟棄廢物及手套到生物安全級物理容器。注意飛濺的水滴和流淌會將污染帶到主污染區以外。
8> 所有在實驗室使用的具有潛在污染性的物質都需去污染，最好先高壓，再做處理。
9> 任何可能產生飛濺或氣霧的操作都應在生物安全操作台里進行。這些操作包括離心，分離血清，混合，超聲，收集組織受精卵，以及處理含有濃集的感染物質標本。
1.8 實驗室物質處理
a> 黑色塑料袋用來收集未污染或經高壓過需處理的廢物。
b> 廢紙屢用來收未污染的廢紙，用過的紙巾等。
c> 所有可能傳染的物質必須高壓或焚化。
d> 所有丟棄的標本，培養基和實驗室廢物必須放在專門容器里
e> 用白色聚丙烯罐盛裝2%新鮮配置次氯酸液，以供工作中丟棄標本，污染吸頭，棉拭子臨時處理待一天工作結束之後，再經高壓處理。
f> 黃色塑料袋用來處理污染的實驗室廢物。它們應封口再由工人拿去焚燒。
g> 帶蓋，帶標簽硬質容器用來盛裝針頭的銳器。
1.9 實驗室傳染性物的消毒
高壓
a.所有培養基的傳染性物質都要高壓，除非准備焚燒的，高壓的最大好處是使傳染性物質離開實驗室可保證安全。
b.用作此目的的高壓設備應在醫學技師監督下由實驗室工人操作。
c.高壓設備應定期由醫院設備組測試，檢修。這些測試包括商業使有的芽胞試紙實驗。多個高壓設備應有使用記錄，並自使用之日起由醫學技師連續記錄。任何不符都要向安全人員報告。
1.10 去污染
去污染劑：
1> 次氯酸溶液：用白色聚丙烯罐裝新鮮配置的含有效氯1000ppm的2％次氯酸溶液，放在多個工作室。
2> 5%的Printol：其50％水溶液用來處理濺在地板和傢具上的污染。
3> 戊二醛：新鮮配製成一定濃度，主要用於不能使用次氯酸鈉的儀器去污染，如離心機等。
4> 75％乙醇：主要用於對清潔表面的快速去污染。
1.11 離心機
1.11.1 注意事項：
a> 使離心機用的試管應具是厚管或塑料的，離心前應仔細檢查是否缺損。
b> 離心機需放置在合適的位置，操作都應能看見離心缸，以便能正確地將離心架放在轉子上。
c> 離心桶和離心架配對使用，負載後需仔細平衡。
d> 為避免脫架和試管內溶液濺出，開始採用低轉速，然後逐漸升高。
e> 離心機內缸應由高級人員定期檢索，內壁必須用戊二醛定期清潔，去污染。
f> 在對含有或懷疑含有生物安全操作3級標本離心時，必須加蓋密封，密封蓋只有在一級生物安全操作台內才能打開。
1.11.2 離心時，試管破裂
a> 如果正在離心時，發生或懷疑發生試管破裂，電動機應立即斷電，並在30min後才能打開離心機蓋。
b> 如離心後發現破裂，應立刻關閉機蓋，保持至少30min。
c> 立即通知安全員。
d> 戴厚手套，使用鑷子或用鑷子夾棉鑒清除破碎玻璃碎片。
e> 所有破裂試管，玻璃碎片，離心桶和轉子必須放在專門消毒劑中去污染，要求消毒劑不具腐蝕性，對浸生物安全物質有效。然後，或者浸泡至24小時，或者高壓。
f> 未破裂，帶蓋的試管也應放在另一含有消毒劑的容器中1後，再對其內容物處理。
i> 離心缸必須用戊二醛棉拭子清潔，過夜，再重復擦拭，再用水清潔洗凈並乾燥。
g> 含有生物安全3級物質的密封離心桶必須在密封狀態下取出，在一級生物安全操作台內打開。如果試管破裂，離心桶密封蓋應鬆鬆地蓋上，對離心桶高壓。
1.12 破裂和溢出
任何重要的破裂的溢出都應通知安全人員。在處理含有或懷疑含有生物案例的溢出物，應先得到安全人員的建議。
1.12.1 病毒培養基的泄漏
a> 用浸有20％次氯酸鈉的紙巾覆蓋濺灑出的污染物用容器碎片。
b> 覆蓋10－15min。
c> 戴一次性手套，清掃紙巾和碎片於合適的容器（如塑料袋，但不包括含有碎玻璃或其它銳利物體），用一片硬紙板去清掃，不能用刷子或塵撣，除非它們適於高壓。手指遠離碎玻璃。
d> 將碎片和使用後的廢物放在實驗室廢物箱。
e> 用常規工作消毒劑擦拭污染區及其周圍可能飛濺區。
1.13 泄漏的標本
實驗室不泄漏的標本，但要以塑料密封後退還到病房。
1.14 紫外線消毒：培養基，試劑分裝和病人血清應存放－70°C和－30°C冰箱。操作存放於－30°C或以下溫度冰箱物質，應戴手套，例如當標本從低溫冰箱取出或放入時。
1.15 生物安全櫃（台）
實驗室應配備II級生物安全櫃。
1.15.1 級別
I ：基本要求：定向流動保護，要求氣流從外流入安全櫃，並且遠離操作者，指向傳染物。經HEPA過濾排後，緊好由導管引向室外，以便清除去污染後的各種蒸汽。
II：基本要求：經過濾氣體垂直流向，既保護操作者也要保護工作不受污染。
IIA：70％的過濾氣體重新循環至工作區，廢氣導向室外經HEPA過濾。和內流經式工作區的氣流速度平均0.4m/s或略高。
IIB：流進氣體流速平均0.5m/s或更好。按照不同型別（IIB1，IIB2，IIB3），氣體排出比例從70％到100％。根據工作選擇不同型。如有毒化學物質和放射線同位素不能再循環至工作區。
III ：基本要求：操作者與傳染物安全隔離，並且整個操作過程都要提高。安全櫃所在的環境也要一定程度隔離，以防手套破裂。
1.15.2 生物安全櫃的安裝
安全櫃要發揮某安全防護功能必須注意安裝位置，廢氣應通過管道以保護環境不受污染。如果需購置這類設備應聯系CUHK安全辦公室，在種類，牌子，樣式，安裝位置和安裝以及與其它設施的相鄰關繫上獲得指導。
1.15.3 常規檢查和安全操作以及工作區的消毒
有一份操作規程詳盡地敘安全櫃的常規使用也應包括安全櫃發生意外時應採取的行動。每一個使用者必須閱讀規程使後簽名。
1.15.4 注意：
安全櫃應盡可能避免使其處於不安全狀態，但有時因為安全櫃的意外，使用者被迫這樣做。此時，應張貼注意以警告其它人不得再使用。
1.15.5 去污染和再認證
由受過訓練的人員,配戴個人防護用具,來做污染工作。要求：安全櫃在密閉條件下用乾燥多聚甲醛蒸汽醺蒸，使用濃度8500ppm。（安全櫃的體積應包括外周供應和廢氣過濾設備。）在溫度20－25°c，相對溫度不低於60％環境保持4h，甲醛蒸汽，如果允許，可直接抽出室外，若不允許可在安全櫃內用氨基重碳鹽吸收。
因為空氣有限的穿透力，在處理潛在傳染性物質時最好使用HEPA過濾器，以及高壓或焚化後再丟棄。
1.17.5.2 再認證
這項工作由專門人員進行，去污染後安全櫃性能再認證定，及過濾器的更換，測試是否有漏氣，調試空氣流速是否合規定，以及檢測過濾器的性能。再認證應至少一年做一次，或是裝置移動，過濾器維修後。應備有去污染，維修和再認證的記錄，並且應方便使用者的查閱。
2. 實驗安全操作程序：
2.1 工作人員在採集標本過程中應當防止病原微生物擴散和感染，並對標本的來源、採集過程和方法等作詳細記錄。
2.3 實驗過程中絕對禁止吸煙、飲食等，不要以手撫頭面部等。
2.4 處理樣本的過程中易產生高危害氣溶膠時，要求同時使用適當的個人防護裝備、生物安全櫃和/或其它物理防護設備。如可產生含生物因子的氣溶膠，應在適當的生物安全櫃中操作。細菌的分離培養、菌種開封、轉種、研磨、稀釋等操作，均應在生物安全櫃中進行。
2.5 使用接種環進行操作時，接種環應在工作燈的內焰中燃燒，以避免菌液或菌塊飛濺。
2.6 稀釋菌液時，吸管、針管要緩慢插入試管或燒瓶底部，小心操作避免產生氣泡或氣溶膠。
2.7 使用注射器加樣時，用過的針頭切勿再重新入套或拔開注射器與針頭，應直接放入銳器收集器，以免劃破皮膚造成接種感染。
2.8 菌株庫要設專人管理，並按照國家微生物菌毒種管理辦法執行。2.9進行毒菌操作過程中，不要穿戴巳經污染的防護性手套觸摸門柄、儀器或毒菌區以外區域，避免由於粗心擴大污染范圍。
2.10 試驗結束後，操作過程中所有可能與生物危險物接觸或被污染的試驗器械和物品，能夠高壓消毒的必須高壓消毒，不能進行高壓消毒的設備、儀器，應使用有效的消毒劑擦洗後再以紫外燈近距離長時間消毒。
2.11 實驗中發生意外污染情況，應立即通知主管人員並做好處理污染物和相應區域的准備，不得擅自採用其它禁止的方法進行消毒處理。
2.12 實驗室內任何微生物的樣本，廢棄物都必須經高溫高壓滅菌後，方可按一般垃圾處理。
2.13 實驗室所用任何個人防護裝備應符合國家有關標準的要求。實驗室應確保具備足夠的有適當防護水平的清潔防護服供使用。還應穿戴其它的個人防護裝備，如手套、防護鏡、面具、頭部面部保護罩等。
3. 實驗室污物處理及消毒操作程序：
3.1 實驗室含有生物危險物的臨床標本及被污染的一次性用品，試驗完成後，應在操作台或實驗區域內以紫外燈近距離照射消毒 2小時以上，再經高壓消毒後方可丟棄或焚燒。
3.2 可重復使用的實驗用品及器材，完成實驗後，應在操作台或實驗區域內經紫外燈近距離照射消毒2小時以上後，再交有關人員進行高壓消毒和煮沸洗刷。
3.3 實驗用的試管、吸管、注射器，須裝在加蓋不漏的容器內，經高壓滅菌後取出。
3.4 培養物或實驗室垃圾，在丟棄前必須經高壓消毒和紫外燈近距離長時間照射處理。不允許積存垃圾和實驗室廢棄物。已裝滿的容器應定期運走。在去污染或最終處置之前，應存放在指定的安全地方，通常在實驗室區內。
3.5 實驗室廢棄物應置於適當的密封且防漏容器中安全運出實驗室。有害氣體、氣溶膠、污水、廢液應經適當的無害化處理後排放，應符合國家相關的要求。
3.6 實驗過程中，如標本或含標本的前消化處理液被打翻污染了操作台或地面，應以吸滿70%酒精的衛生紙覆蓋污染區，15分鍾以後衛生紙方可移去。
3.7實驗室內未經消毒的污水，禁止直接排入公共排水系統，更不允許混入居民生活垃圾。
4. 意外事故處理程序：
4.1 如果發生意外，必須立即通知實驗室主管人員和醫院生物安全辦公室，並在有關人員的指導監督下對出事現場進行處理，絕對禁止未經報告而私自對出事現場給予非規范的處理。
4.2 實驗過程中，如污染物濺落到身體表面，或有割傷、刺傷、燒傷、燙傷等情況發生，應立即停止實驗工作進行緊急處理，更換被污染的實驗服，皮膚表面用消毒液清洗，傷口以碘酒或酒精消毒，眼睛用無菌生理鹽水沖洗。
4.3 如果發生菌液溢出，含菌種的培養管破碎等，造成中 、小面積污染，可用比污染面積大25%以上的紗布覆蓋污染區域，邊緣用脫脂棉圍住，向紗布傾倒5%苯酚溶液或70%的酒精，浸泡2小時以上（其間適量加溶液防止乾燥），再經紫外燈近距離（1米內）照射2小時以上；被污染的器械、容器等立即浸泡於70%酒精中2小時以上，再次著防護衣進入房間，將污染溢出物和用於清潔的紗布放入可耐受高壓的雙層塑料袋內並盡快高壓。
4.4 如果發生氣溶膠污染或大面積污染，應立即停止實驗並關閉實驗室，對污染區域進行紫外燈照射消毒過夜；第二天對污染區進行24小時封閉空氣熏蒸消毒（乙醛消毒法：5ml乙醛＋2g高錳酸鉀/m3空間）。
4.5 臨床醫務人員應對事故受害者和消毒人員進行醫學隨訪。
㈡ 為什麼除菌過濾器前的微生物負荷需要監控
除菌過濾器也叫呼吸器，主要用於防止空氣中的雜質和有害細菌、微生物等回進入罐體、引起變化答，目前廣泛應用於食品、生化、醫葯、電子等行業。想了解更多可以去石家莊凱德過濾設備有限公司。
很高興為你解答希望我的回答對你有幫助滿意請採納謝謝
㈢ 如何理解直接入葯的中葯粉末入葯前的微生物限度檢查
看你葯材要做微生物檢測應該是比較好的飲片了，但是又要進行前處理----凈洗，又像普通的葯材，而一般直接入葯的原葯材粉基本都會經過滅菌的過程。但是如何控制也不是絕對的，其實質量控制的問題，如果飲片有報告單上有微生物項目，說明供應商在生產上有控制能力，如果是普通葯材那就什麼也保證不了，但是作為新產品應該採用每味中葯粉檢測合格後在進行下一步的投料，特別是在沒有滅菌的過程下，有了一些數據後，那個葯材比如說易滋生菌，就重點控制，或者有些葯材很穩定，經過處理不會產生微生物的變化，可以評估的，到時再制訂合適的內控方法，這樣就很有說服力了。
㈣ 氯化鈉溶液和氯化鈉注射液檢微生物限度的區別
注射液要求無菌，溶液對細菌沒有硬性的要求
㈤ 原料葯生產所用原料是否也必須每批留樣其留樣時間如何確定
例如，片劑在壓片後進行內包裝，壓片結束後檢測鑒別、含量均勻度等理化項目，而內包裝之後僅取樣檢測微生物限度，最後成品放行的檢驗報告數據採用壓片之後的理化項目數據和內包裝之後的微生物限度數據，這樣做是否可行？ 答：放行，系指對一批物料或產品進行質量評價，作出批准使用或投放市場或其他決定的操作。一般情況下，如果企業對成品進行質量評價，能夠確認中間產品的關鍵質量屬性到成品時未發生變化，中間產品的檢驗結果能夠代表成品放行前的檢驗結果，則可以引用中間產品的檢驗數據和結果。 企業如果採用這種方式，則必須對中間產品的關鍵質量屬性到成品狀態時的變化情形進行科學研究或評價，確保中間產品的檢驗數據能夠代表最終包裝完成的成品。應當注意，並非所有中間體的關鍵質量屬性到最終放行時都不會產生變化。 2.問： 答：《葯品生產質量管理規范（2010年修訂）》明確要求制劑生產用每批原輔料和與葯品直接接觸的包裝材料均應當有留樣，並對留樣作出了詳細要求，而對於原料葯則沒有詳細規定，但在第十二條（七）中明確規定：物料和最終包裝的成品應當有足夠的留樣，以備必要的檢查或檢驗。 原輔料留樣的目的是為了能夠有追溯性，一旦上市或未上市產品出現問題，企業能夠從物料角度查找分析可能產生的原因。因此，企業還是應當根據其對成品質量影響的情形進行分析，從而決定是否留樣、如何留樣並形成操作規程。一般而言，原料葯生產所用的起始物料、對原料葯質量有直接或關鍵影響的那些關鍵物料均應當留樣。 3.問：我們生產最終滅菌的大容量注射劑，從配製到滅菌的時限，工藝規程描述為不超過12小時，但實際工作中最多也超不過8小時，那麼，12小時的時限是否必須要通過驗證？8小時的時限也是否必須要通過驗證？ 答：《葯品生產質量管理規范（2010年修訂）》第五十七條規定：應當盡可能縮短葯液從開始配製到滅菌（或除菌過濾）的間隔時間。應當根據產品的特性及貯存條件建立相應的間隔時間控制標准。 滅菌工藝的有效性不僅與滅菌參數有關，還與待滅菌物品的微生物負荷量有關。建立間隔時間控制標準的目的是為了控制待滅菌產品的微生物負荷量，使滅菌工藝能夠達到相應的效果。 葯液的微生物負荷量會隨著時間的延長而增加。企業根據滅菌工藝能力確定可接受的最大微生物負荷量之後，應根據產品特性和貯存條件考察、建立並控制葯液從配製至滅菌的時間，以控制微生物負荷量在可接受的最大范圍之內。 問題中工藝規程規定的時限應當是經過驗證的。如果最長的12小時時限已經過驗證，根據實際工作情況，在其他條件不變的情形下，將時限縮短至8小時可不再驗證。 4.問：檢驗人員須經過與所從事的檢驗操作相關的實踐培訓且通過考核。是不是葯企的QC只要經過公司內部的崗位培訓並考核合格就能上崗，不再需要經過葯檢或葯品監管部門認可的機構培訓後發證上崗？ 答：《葯品生產質量管理規范（2010年修訂）》對檢驗人員提出了要求：質量控制實驗室的檢驗人員至少應當具有相關專業中專或高中以上學歷，並經過與所從事的檢驗操作相關的實踐培訓且通過考核。 該規范沒有強制規定企業的檢驗人員需經過葯檢或葯監部門認可的機構培訓後發證上崗，其注重的是培訓的有效性，企業應確保培訓後檢驗人員檢驗的准確性。企業可採取理論培訓、實踐培訓、或者師傅帶徒弟等多種方式，也可以採取委託第三方機構進行培訓的方式對檢驗人員進行培訓，但必須注意，培訓和考核僅僅是確保檢驗結果准確性的手段。
㈥ 生化需氧量的測定
容量法
方法提要
生化需氧量是指在有氧條件下，微生物分解水中有機有物的生物化學過程所需溶解氧的量。
取原水或經過稀釋的水樣，使其中含足夠的溶解氧，將該樣品同時分為兩份。一份測定當日溶解氧的質量濃度，另一份放入20℃培養箱內培養5d後再測其溶解氧的質量濃度，兩者之差即為5d生化需氧量(BOD5)。
儀器
恆溫培養箱(20±1)℃。
細口玻璃瓶2000mL。
量筒1000mL。
玻璃攪拌棒玻璃棒底端套上一塊比量筒口徑略小於1mm厚的硬橡膠圓塊，棒的長度以可伸至量筒底部為宜。
培養瓶250mL。
試劑
硫酸。
氯化鈣溶液(27.5g/L)。
氯化鐵溶液(0.25g/L)稱取0.25gFeCl3·6H2O溶於蒸餾水中，稀釋至1000mL。
硫酸鎂溶液(22.5g/L)稱取22.5gMgSO4·7H2O溶於蒸餾水中，稀釋至1000mL。
磷酸鹽緩沖溶液(pH7.2)稱取8.5gKH2PO4、21.75g磷酸氫二鉀和(K2HPO4)、33.4gNa2HPO4和1.7gNH4Cl，溶於蒸餾水中，稀釋至1000mL。
稀釋水在2000mL玻璃瓶內裝入一定量的蒸餾水(含銅量小於0.01mg/L)，在20℃條件下用水泵或無油空氣壓縮機連續通入經活性炭過濾的空氣8h，予以曝氣，靜置5～7d，使溶解氧穩定，其溶解氧質量濃度應為8～9mg/L。
臨用時，每升稀釋水中加入無機鹽溶液(CaCl2、FeCl3·6H2O、MgSO4·7H2O和磷酸鹽緩沖液)各1.0mL，混勻，稀釋水的20℃5d生化需氧量應在0.2mg/L以下。
接種稀釋水
接種液將生活污水在20℃條件下放置24～36h取上清液，備用。
接種稀釋水於每升稀釋水中加入接種液10～100mL。
葡萄糖-谷氨酸溶液稱取於103℃烘烤1h的葡萄糖和谷氯酸各150mg於純水中，稀釋至1000mL，臨用時配製。
氫氧化鈉溶液c(NaOH)=1mol/L。
氟化鉀溶液(40g/L)。
疊氮化鈉溶液(2g/L)。
硫酸錳溶液(480g/L)稱取480g硫酸錳(MnSO4·4H2O)或400gMnSO4·2H2O或380gMnCl2·2H2O溶於蒸餾水中，過濾後稀釋至1000mL。
鹼性碘化鉀溶液稱取500gNaOH溶於300～400mL蒸餾水中，稱取150gKI(或NaI)溶於250mL蒸餾水中，將以上兩液合並，加水至1000mL，靜置，加0.05mol/LNa2S2O3標准溶液，用新煮沸放冷的蒸餾水準確稀釋為0.02500mol/L。
澱粉溶液(5g/L)。
分析步驟
水樣採集後應盡快分析，采樣後2h以內開始分析則不需冷藏。如不能及時分析，采樣後即保存在4℃或低於4℃的冷藏箱內，應在采樣後6h內進行分析。
1)樣品預處理。水樣pH應為6.5～7.5，水受到廢水污染時，可用0.5mol/LH2SO4或NaOH溶液予以調整。
含有少量余氯水樣，放置1～2h後即可消失。余氯大於0.1mg/L，可加入Na2S2O3除去，其加入量可用碘量法測定。
受工業廢水污染的水樣，由於其中可能含有其他有害物質，如金屬離子等，應根據具體情況予以處理。
當水樣中含有0.1mg/L以上的亞硝酸鹽時，可於每升稀釋水中加入2mg亞甲藍或3mL疊氮化鈉溶液處理。
當水樣中含有1mg/L以下的亞鐵鹽時，可於每升水中加入2mLKF溶液。
2)直接培養法。適用於較清潔的水樣。用虹吸法吸出兩份水樣於溶解氧瓶中，一瓶立即測定溶解氧，另一瓶立即放入(20±1)℃恆溫培養箱中，培養5d後取出，再測定溶解氧。兩者之差即為水樣的生化需氧量。
3)稀釋培養法。確定水樣稀釋倍數:根據酸性KMnO4測得耗氧量(mg/L)，以1～3除之，其商即為水樣的需稀釋的倍數。
4)稀釋方法。
A.連續稀釋法，先從稀釋倍數小的配起，繼用第1個稀釋倍數的剩餘水，再注入適量稀釋用水配製成第2個稀釋倍數，以此類推。
B.稀釋操作方法。
a.將水樣小心混勻(注意勿產生氣泡)，根據稀釋培養法確定的稀釋比例，取出所需體積的水樣，沿筒壁移入量筒中，然後細心地用虹吸管將配好的稀釋水或接種稀釋水加至刻度，用特製的攪拌棒在水面以下緩緩上下攪動4～5次，立即將筒中稀釋水樣用虹吸法注入兩個預先編號的培養瓶中，注入時使水沿瓶口緩緩流下，以防產生氣泡。水樣滿後，塞緊瓶塞，並於瓶口凹處注滿稀釋水，此為第1個稀釋度。
b.在上述分析步驟中，量筒內尚剩有水樣，根據第2個稀釋度需要用虹吸法向筒中注入稀釋水或接種稀釋水以下分析步驟重復上述操作，即為第2個稀釋度，按同法可做第3個稀釋度。
c.另取兩個編號的溶解氧瓶，用虹吸法注入稀釋水或接種稀釋水，塞緊後用稀釋水封口作為空白。
d.檢查各瓶編號，從空白及每一個稀釋水樣瓶中各取1瓶放入(20±1)℃培養箱中培養5d，剩餘各一瓶測定培養前溶解氧。
5)溶解氧固定。立即將分度吸管插入培養瓶液面以下，加1mLMnSO4溶液，再按同方法加入1mL鹼性溶液。蓋緊瓶塞(瓶內勿留氣泡)，將水樣顛倒混勻一次，靜置數分鍾，使沉澱重新下降至瓶中部。
6)釋出碘。用分度吸管沿瓶口加入1mLH2SO4蓋緊瓶塞，顛倒混勻，靜置5min。
7)滴定。將上述溶液倒入250mL碘量瓶中，並用蒸餾水洗滌解氧瓶2～3次，用Na2S2O3標准溶液滴定至溶液呈淡黃色，加入1mL澱粉溶液，繼續至藍色剛好褪去為止，記錄用量(V1)。
8)計算:
岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術
式中:ρ(O2)為水中溶解氧的質量濃度(以O2計)，mg/L;c為硫代硫酸鈉標准溶液的濃度，mol/L;V1為硫代硫酸鈉標准溶液用量，mL;8為1/2氧的摩爾質量的數值，單位用g/mL;V為水樣體積，mL。
每天檢查瓶口是否保持水封，經常添加封口水及控制培養箱溫度;
培養5d後取出培養瓶，倒盡封口水，立即測定培養後的溶解氧，溶解氧測定方法同上。
9)標准溶液校核。將葡萄糖-谷氨酸標准溶液，以2%稀釋比例，其BOD5結果應為(200±37)mg/L。如不在此范圍內，說明實驗有誤，應找原因。
分析結果的計算
1)直接培養法。按下式計算5d生化需氧量(BOD5)的質量濃度:
岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術
2)稀釋培養法。按下式計算5d生化需氧量(BOD5)的質量濃度:
岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術
式中:ρ(BOD5)為水樣的5d生化需氧量的質量濃度，mg/L;ρ1為水樣培養液在培養前的溶解氧的質量濃度，mg/L;ρ2為水樣培養液在培養5d後的溶解氧的質量濃度，mg/L;ρ3為稀釋水(或接種稀釋水)在培養前的溶解氧的質量濃度，mg/L;ρ4為稀釋水(或接種稀釋水)在培養5d後溶解氧的質量濃度，mg/L;f1為稀釋水(或接種稀釋水)在培養液中所佔比例;f2為水樣在稀釋培養液中所佔比例。f1、f2的計算為:
岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術
3)結果確定。測定2個或2個以上稀釋度的溶解氧降低量應為40%～70%，即可取平均值計算。
水樣稀釋後溶解降低率:
岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術
式中:ρ5為水樣稀釋後溶解氧降低率，%;ρ1、ρ2同上。
㈦ 中葯飲片微生物限度如何操作
哇塞，去借本葯典一看就明白了嘛
㈧ 如何篩選微生物葯物
市面上有很多微生物制劑的菌種，多種多樣，造成在選擇上產生很大困惑，下邊是選擇菌種的方法：
1、微生物菌種選擇
動物消化道微生物具有多樣性和特異性，不同動物種類對菌種的要求不同，同一菌株用於不同動物，產生的效果差異也較大。使用時一定要掌握菌種的特性和功效，選擇不當起不到應有效果，反而會破壞原有菌群，甚至引發疾病
2、微生物菌種應用時間
微生物制劑應用要從子畜開始使用，以保證有益菌優先定植。因為制劑進入體內後要有一段時間進行微生物菌群調整才能定植下來。
一般認為，乳酸菌類在各種動物的各階段添加均較好，芽孢桿菌類在生長期添加較好，在幼齡期可以添加;麴黴菌類在幼齡期，水產動物全期不必添加;酵母菌類在生長期不必添加;在水產動物養殖中，以改善水質為目的時，可將微生物制劑或光合細菌直接灑於水中。
3、微生物菌種添加方式
一般粉狀飼料添加微生物制劑效果較好，顆粒飼料和膨化飼料在加工過程中的高溫可造成10%~30%的芽孢桿菌，90%以上的腸球菌以及99%以上的酵母失活，而乳酸桿菌幾乎全部被殺滅。因此，在顆粒飼料中要使用耐熱，耐擠壓的芽孢桿菌制劑。乳酸菌不耐高溫，應採用凍干後包被或採用噴霧乾燥的方式製成的乳酸菌制劑。使用時最好採用飲水方式，以利於乳酸菌優先粘附於腸壁。
4、微生物菌種劑量與濃度
微生物制劑中必須含有相當數量的活菌才能達到效果。當進入動物腸道食糜中外源菌數大於1000萬個每克時，都會對腸道內原有菌群產生較大的影響。因此，微生物制劑在產品中活菌數含量為10億~20億每克時效果最佳。
我國正式批准生產的微生物制劑中規定每克芽孢桿菌含量要多於5億個。以酵母菌產品為例，目前市場上銷售的產品活菌數從每克幾億到200億不等，在選擇是要認真鑒別。
5、微生物菌種抗生素的影響
細菌類的微生物制劑對抗生素敏感，不宜與抗生素同時使用，使用微生物制劑的前後二天應停止使用抗生素。最好先用抗菌葯物清理腸道，為益生菌的定植和繁殖掃除障礙，然後再飼喂微生物制劑，可提高使用效果。酵母菌類屬於真核生物，生物學活性與細菌完全不同，對抗生素、磺胺類葯物和一些抗菌劑有天然抗性，可與抗生素同時使用。
6、微生物菌種保存條件和期限
微生物制劑均為活菌制劑，由於大多數菌種在飼料加工、運輸中容易失活，應用中要注意保存期限。通常微生物制劑應密封保存於陰涼避光處，儲存時間不宜過長，有效期一般為一年左右，隨著保存時間的延長，活菌數量不斷減少。厭氧菌類暴露在空氣中容易死亡，有的產品對其進行了包被或真空包裝處理，應在打開包裝後規定的時間內用完。酵母類屬於兼性厭氧菌，可以保存較長時間。芽孢桿菌類有效期比其他類型長，可達2年左右。
㈨ 中國葯典中葯物微生物檢測在哪部
你好，微生物檢測方法在中國葯典2010年版二部附錄XI J，具體方法為附錄XI J微生物限度檢查法
微生物限度檢査法系檢查非規定滅菌制劑及其原料、輔
料受微生物污染程度的方法。檢查項目包括細菌數、黴菌數、
酵母菌數及控制菌檢查。
微生物限度檢查應在環境潔凈度10 000級下的局部潔
凈度100級的單向流空氣區域內進行。檢驗全過程必須嚴格
遵守無菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品
中微生物的檢出。單向流空氣區域、工作檯面及環境應定期
按《醫葯工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方
法》的現行國家標准進行潔凈度驗證。
供試品檢查時，如果使用了表面活性劑、中和劑或滅活
劑，應證明其有效性及對微生物無毒性。
除另有規定外，本檢査法中細菌及控制菌培養溫度為
30〜35°C;黴菌、酵母菌培養溫度為23〜28°C
檢驗結果以lg,lml、10g、10ml或10cm
2為單位報告，特
殊品種可以最小包裝單位報告。
檢驗量
檢驗量即一次試驗所用的供試品量(g、ml或cm
2
)。
除另有規定外，一般供試品的檢驗量為10g或10ml;膜劑
為100cm
2
»貴重葯品、微量包裝葯品的檢驗量可以酌減。要
求檢查沙門菌的供試品，其檢驗量應增加20g或20ml(其中
10g或10ml用於陽性對照試驗）。
檢驗時，應從2個以上最小包裝單位中抽取供試品，膜劑
還不得少於4片。
一般應隨機抽取不少於檢驗用量（兩個以上最小包裝單
位）的3倍量供試品。
供試液的制備
根據供試品的理化特性與生物學特性，採取適宜的方法
制備供試液。供試液制備若需加溫時，應均勻加熱，且溫度不
應超過451C。供試液從制備至加人檢驗用培養基，不得超過
1小時。
除另有規定外，常用的供試液制備方法如下。
1. 液體供試品
取供試品10ml ，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液至
100ml，混勻，作為1 ： 10的供試液。油劑可加人適量的無菌
聚山梨酯80使供試品分散均勻。水溶性液體制劑也可用混
合的供試品原液作為供試液。
2. 固體、半固體或黏稠性供試品
取供試品10g ，加PH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液至
100ml，用勻漿儀或其他適宜的方法，混勻，作為1 ： 10的供試
液。必要時加適量的無菌聚山梨酯80，並置水浴中適當加溫
使供試品分散均勻。
3. 需用特殊方法制備供試液的供試品
(1) 非水溶性供試品
方法1取供試品5g(或5ml)，加至含溶化的（溫度不超
過45'C)5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無
菌混合物的燒杯中，用無菌玻棒攪拌成團後，慢慢加人45"的
pH7. 0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液至100ml，邊加邊攪拌，使供
試品充分乳化，作為1 ： 20的供試液。
方法2 取供試品10g，加至含20ml無菌十四烷酸異丙
酯（製法見附錄H H無菌檢査法中供試品的無菌檢查項下）
和無菌玻璃珠的適宜容器中，必要時可增加十四烷酸異丙酯
的用量，充分振搖，使供試品溶解。然後加人45\：的pH7.0
無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液100ml,振搖5〜：L0分鍾，萃取，靜
置使油水明顯分層，取其水層作為1 •• 10的供試液。
(2) 膜劑供試品.
取供試品100cm
2
，剪碎，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩
沖液lOOmK必要時可增加稀釋液），浸泡，振搖，作為1 ： 10的
供試液(3) 腸溶及結腸溶制劑供試品
取供試品10g,加pH6. 8無菌磷酸鹽緩沖液（用於腸溶制
劑）或pH7. 6無菌磷酸鹽緩沖液（用於結腸溶制劑）至100ml，
置45t:水浴中，振搖，使溶解，作為1 :
10的供試液。
(4) 氣霧劑、噴II劑供試品
取規定量供試品，置冰凍室冷凍約1小時，取出，迅速消
毒供試品開啟部位，用無菌鋼錐在該部位鑽一小孔，放至室
溫，並輕輕轉動容器,使拋射劑緩緩全部釋出。用無菌注射器
吸出全部葯液，加至適量的PH7. 0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液
(若含非水溶性成分，加適量的無菌聚山梨酯80)中，混勻，取
相當於10g或10ml的供試品，再稀釋成1 ： 10的供試液。
(5) 貼劑供試品
取規定量供試品，去掉貼劑的保護層，放置在無菌玻璃或
塑料片上，粘貼面朝上。用適宜的無菌多孔材料（如無菌紗
布）覆蓋貼劑的粘貼面以避免貼劑粘貼在一起。然後將其置
於適宜體積並含有表面活性劑（如聚山梨酯80或卵磷脂）的
稀釋劑中，用力振盪至少30分鍾，製成供試液。貼劑也可采
用其他適宜的方法制備成供試液。
(6) 具抑菌活性的供試品
當供試品有抑菌活性時，採用下列方法進行處理，以消除
供試液的抑菌活性，再依法檢查。常用的方法如下。
① 培養基稀釋法取規定量的供試液，至較大量的培養
基中，使單位體積內的供試品含量減少，至不含抑菌作用。測
定細菌、黴菌及酵母菌的菌數時，取同稀釋級的供試液2ml,每
lml供試液可等量分注多個平皿，傾注瓊脂培養基,混勻，凝固，
培養，計數。每lml供試液所注的平皿中生長的菌落數之和即
為lml的菌落數，計算每lml供試液的平均菌落數，按平皿法
計數規則報告菌數;控制菌檢查時，可加大增菌培養基的用量。
② 離心沉澱法取一定量的供試液，500轉/分鍾離心3
分鍾，取全部上清液混合。用於細菌檢査。
③ 薄膜過濾法見細菌、黴菌及酵母菌計數項下的"薄
膜過濾法"。
④ 中和法凡含汞、砷或防腐劑等具有抑菌作用的供試
品，可用適宜的中和劑或滅活劑消除其抑菌成分。中和劑或
滅活劑可加在所用的稀釋液或培養基中。