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凝膠過濾法圖譜中只有一個峰

發布時間:2022-03-24 06:57:14

Ⅰ 凝膠過濾分離蛋白質實驗圖中若只出現一個峰的原因是什麼還有出現前面的峰小於後面的峰又是為什麼

您好!抄凝膠過濾分離蛋白襲質實驗圖中若只出現一個峰的原因:
① 蛋白純度很好:)這個可能性不大。
② 選用的分子篩顆粒尺寸不對,或者太大或者太小,太大的話,所有蛋白都在內水體積出,太小的話,所有蛋白都在外水出了。
③ 分子篩凝膠因為壓力太大等原因,顆粒破碎了。。。
出現前面的峰小於後面的峰:
① 如果出現兩個以上峰,至少說明它有一定的分離效果啦。
② 說明選用的這個凝膠對於待純化蛋白溶液來說,進入外水體積的蛋白就是顆粒較大蛋白含量少,進入內水體積的蛋白就是顆粒較小蛋白含量少。具體的根據電泳結果來判斷,看你的目的蛋白在哪一段,是否還能優化分子篩孔徑。

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感謝您的採納,O(∩_∩)O 如有疑問,歡迎追問。

Ⅱ 經初步純化後的蛋白質樣品,如果用層析法檢測顯示只有一個峰,是否可以認為該純化樣品只含有一種蛋白

二者均不能。需要考慮純化的原理。柱層析法的原理是根據蛋白質的分子量來進行純化,所以可能存在和目的蛋白相同分子量的雜蛋白。(不考慮蛋白之間的相互作用)證明方法:可以用某種特定的蛋白酶去切蛋白質樣品。切完後再過柱子。如果還有原來的峰則證明有雜蛋白存在。
第二種方法也類似。離子交換層析的原理是根據蛋白質的等電點來純化的。
電泳法也是根據分子量來判斷。超速離心是根據沉降系數來分離的。這些都沒辦法徹底排除雜蛋白的影響。要排除得去考慮蛋白質的氨基酸序列。這樣才能徹底排除干擾。

Ⅲ 凝膠過濾法分離蛋白質時,從層析柱上先被洗脫下來的是什麼

選 A
凝膠過濾,與帶點多少沒關系!因為凝膠過濾是根絕分子大小來工作的!
分子量小的,會經過凝膠珠上的孔隙,路程較長,後洗脫下來;
分子量大的,會直接經過凝膠顆粒之間的縫隙,路程較短,會先先脫下來!

Ⅳ 多糖樣品做凝膠層析為什麼會有多個洗脫峰

多糖樣品做凝膠層析為什麼會有多個洗脫峰
凝膠層析操作中應注意的一些具體問題.
(1)層析柱的選擇
層析柱大小主要是根據樣品量的多少以及對解析度的要求來進行選擇.一般來講,主要是層析柱的長度對解析度影響較大,長的層析柱解析度要比短的高;但層析柱長度不能過長,否則會引起柱子不均一、流速過慢等實驗上的一些困難.一般柱長度不超過100cm,為得到高解析度,可以將柱子串聯使用.層析柱的直徑和長度比一般在1:25-1:100之間.用於分組分離的凝膠柱,如脫鹽柱由於對解析度要求較低,所以一般比較短.
(2)凝膠柱的鑒定
凝膠柱的填裝情況將直接影響分離效果,關於填裝的方法前面已有介紹,這里主要介紹對填裝好的凝膠柱的鑒定.凝膠柱填裝後用肉眼觀察應均勻、無紋路、無氣泡.另外通常可以採用一種有色的物質,如藍色葡聚糖-2000、血紅蛋白等上柱,觀察有色區帶在柱中的洗脫行為以檢測凝膠柱的均勻程度.如果色帶狹窄、平整、均勻下降,則表明柱中的凝膠填裝情況較好,可以使用;如果色帶彌散、歪曲,則需重新裝柱.另外值得一提的是,有時為了防止新凝膠柱對樣品的吸附,可以用一些物質預先過柱,以消除吸附.
(3)洗脫液的選擇
由於凝膠層析的分離原理是分子篩作用,它不象其它層析分離方式主要依賴於溶劑強度和選擇性的改變來進行分離,在凝膠層析中流動相只是起運載工具的作用,一般不依賴於流動相性質和組成的改變來提高解析度,改變洗脫液的主要目的是為了消除組分與固定相的吸附等相互作用,所以和其它層析方法相比,凝膠層析洗脫液的選擇不那麼嚴格.由於凝膠層析的分離機理簡單以及凝膠穩定工作的pH 范圍較廣,所以洗脫液的選擇主要取決於待分離樣品,一般來說只要能溶解被洗脫物質並不使其變性的緩沖液都可以用於凝膠層析.為了防止凝膠可能有吸附作用,一般洗脫液都含有一定濃度的鹽.
(4)加樣量
關於加樣前面已經有所介紹,要盡量快速、均勻.另外加樣量對實驗結果也可能造成較大的影響,加樣過多,會造成洗脫峰的重疊,影響分離效果;加樣過少,提純後各組分量少、濃度較低,實驗效率低.加樣量的多少要根據具體的實驗要求而定:凝膠柱較大,當然加樣量就可以較大;樣品中各組分分子量差異較大,加樣量也可以較大;一般分級分離時加樣體積約為凝膠柱床體積的1%-5%左右,而分組分離時加樣體積可以較大,一般約為凝膠柱床體積的10%-25%.如果有條件可以首先以較小的加樣量先進行一次分析,根據洗脫峰的情況來選擇合適的加樣量.設要分離的兩個組分的洗脫體積分別為Ve1和Ve2,那麼加樣量不能超過(Ve1-Ve2).實際由於樣品擴散,所以加樣量應小於這個值.
從洗脫峰上看,如果所要的各個組分的洗脫峰分得很開,為了提高效率,可以適當增加加樣量;如果各個組分的洗脫峰只是剛好分開或沒有完全分開,則不能再加大加樣量,甚至要減小加樣量.另外加樣前要注意,樣品中的不溶物必須在上樣前去掉,以免污染凝膠柱.樣品的粘度不能過大,否則會影響分離效果.

Ⅳ 在核磁共振氫譜圖(1H核磁共振譜圖)中,只有一個吸收峰的物質是()A.CH3CH2OHB.CH3CH2CH3C.CH2=

核磁共振氫譜中只給出一種峰,說明該分子中的H原子都是等效的,只有1種H原子.
A.CH3CH2OH中有3種不同的氫原子,核磁共振氫譜中有3個峰,故A錯誤;
B.CH3CH2CH3有2種H原子,核磁共振氫譜中有2個峰,故B錯誤;
C.CH2=CH-CH3有3種H原子,核磁共振氫譜中有3個峰,故C錯誤;
D.CH3CH3有1種H原子,核磁共振氫譜中有1個峰,故D正確.
故選D.

Ⅵ 凝膠過濾法提取蛋白質的洗脫圖譜為什麼只出現一個峰值阿本來應該是有兩個的

我是做了兩次實驗才成功,第一次只得到一個峰,第二次得到了兩個峰。
原因我總結有如下幾點:
1)、每支管收集的溶液量不一致,誤差較大,導致只有一個吸收峰。

2)、可能是流速過快,小分子物質來不及擴散,與大分子物質一起被洗脫出來;或者是流速過慢,層析時間過長,小分子物質追上了大分子物質一起被洗脫出來。
3)、也可能是未能及時去接被洗脫出來的物質,有些成分已流出,只接到了後面流出來的物質,則為一個峰。
4)、樣品未洗脫完全就終止了反應,小分子物質還停留在層析柱內,所以只收集到一種物質,只得到了一個峰。

【希望能幫到廣大查詢此問題的朋友們,因為我是被做實驗報告討論題給逼出來的。^_^】

Ⅶ DSC圖譜顯示出現兩個峰,怎麼解釋

樣品中含有水分,是正常的,都有水分,只是多少的問題,
如何快速檢測樣品含有多少水分含量?
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Ⅷ XRD圖譜只有一個峰如何分析

樓上的回答有誤。如果你做的是粉末衍射的話,只有一個峰,你要先在pdf卡片中找到最可能的物相是哪一個,然後看你的物質和標准卡片對比少了的峰是哪些,還有就是你測試的物質這個唯一的峰對應的是不是標准卡片上的最強峰。就你單獨給個這個條件我還不好具體說,不過樓上的回答應該改為某一晶面的衍射峰越強,說明該晶面越多,因此取向越好,而不是取向弱。

Ⅸ 凝膠過濾法提取蛋白質的洗脫圖譜為什麼只出現一個峰值阿

分子篩層析通常要加入大於150毫摩的Nacl來防止蛋白質聚集沉澱的,你的平衡液中有嗎?可能聚集而沉澱在柱子上了。

你跑完一個柱體積了嗎?兩個蛋白質相對分子質量相差大嗎?若是不大,若果你的柱子解析度不高的話,可能都在一個峰裡面了。

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