離子交換柱純化病毒

㈠ DEAE纖維素柱的原理

DEAE纖維素柱原理，基於離子交換層析：離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖回維素組成。

陰離子答交換基質結合，帶有負電荷的蛋白質，然後這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質從而洗脫下來。

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基本信息：

性狀：乾燥纖維狀。

用途：用於柱色譜分析，用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等，陰離子交換填料。

保存：常溫乾燥封袋保存。

DEAE—纖維素的使用方法：

稱取IgDEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸餾水浸泡過夜，觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量，稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜，其間換幾次水，每次除去細小顆粒。

抽干，改用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1h以上，抽干（可用布氏漏斗），用無離子水漂洗，使pH至8左右（用pH試紙檢查）。再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡1h以上，去酸溶液，用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應以0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖液，浸泡平衡後使用。

㈡ 離子交換柱的工作原理是什麼

離子復交換柱的原理制

採用離子交換方法，可以把水中呈離子態的陽、陰離子去除，以氯化鈉（NaCl）代表水中無機鹽類，水質除鹽的基本反應可以用下列方程式表達：

1、陽離子交換樹脂：R—H+Na+→R-Na+H+

2、陰離子交換樹脂：R—OH+CL-→R-CL+OH+

陽、陰離子交換樹脂總的反應式即可寫成：

RH+ROH+NaCL—RNa+RCL+H2O

由此可看出，水中的Nacl已分別被樹脂上的H+和OH-所取代，而反應生成物只有H2O，故達到了去除水中鹽的作用。

3、混合離子交換柱（混床）：混床是裝陽、陰樹脂按一定比例（一般為1:2,以便陽、陰樹脂同時達到交換終點而同時再生）裝入混合柱而成，實際上它組合成了水中的H+和OH-立即生成電離度很小的水分子（H2O）,幾乎不存在陽床或陰床交換時產生的逆交換現象，故可以使交換反應進行得十分徹底，因而混合床的出水水質優於陽、陰床串聯組成的復床所能達到的水質，能製取純度相當高的成品水。

㈢ 採用離子交換柱純化蛋白時，洗脫採用的離子強度的大小范圍應該如何確定

離子交換純化是利用離子交換劑上的可解離基團（活性基團）對各種離子的親和力內不一樣人達容到分離的目的的一種分離技術。離子交換劑是含有若幹活性基團 的不溶性物質，即在不溶性母體上引入若干可解離基團而成，根據引入解離基團的不同，可以分為陽離子交換劑和陰離子交換劑。各種離子對離子交換劑的親和力各 不相同，親和力隨離子的價數與原子序數增加而增加，而隨離子水化膜半徑的增加而降低。對具體離子交換純化，需要主要離子交換劑的選擇和處理。洗脫不同蛋白 的最恰當的離子強度液不一定一樣，通常採用濃度梯度和PH梯度相結合的方式洗脫，純化不同的蛋白最好先摸一摸洗脫液的離子濃度和PH值……
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離子交換介質 http://proct.bio1000.com/100025/

㈣ 離子交換法制備純水流過柱子的前30毫升水為何棄去

主要原因是前面的30毫升水中可能還有一些柱子中殘留的前期的物質，這樣的話可能會污染這些水哦。

㈤ 離子交換柱層析能分離純化蔗糖酶的主要依據是什麼

DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素，是陰離子交換劑。
其原理基於離子交換層析：離版子交換層析中，基質是由帶權有電荷的樹脂或纖維素組成。
由於蛋白質也有等電點，當蛋白質處於不同的pH條件下，其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質，所以這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質，結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。

㈥ 用離子交換法純化蛋白如何選定緩沖液

也可以用AEC，主要以流穿模式做。sspxiaoji(站內聯系TA)用陽離子交換柱，可以考慮pH6.0-7.0的緩沖液，因內為容大部分蛋白質的等電點在這附近，帶電荷少，這樣容易穿透除去其他雜蛋白。而你的目的蛋白PI在11，掛柱應該比較牢固。但是有個問題需要注意，PH離你的目標蛋白PI太遠，有可能導致掛柱後難以洗脫。

㈦ p柱層析 N柱層析

P-positive,N-negative

分別是陽離子和陰離子交換層析，兩者原理類似，根據分離物質的帶電屬性進行分離，只不過一個是根據帶正電的多少，一個是根據帶負電的多少進行上柱和洗脫。

Sober 和 Peterson於1956年首次將離子交換基團結合到纖維素上，製成了離子交換纖維素，成功地應用於蛋白質的分離。從此使生物大分子的分級分離方法取得了迅速的發展。離子交換基團不但可結合到纖維上， 還可結合到交聯葡聚糖（S-ephadex）和瓊脂糖凝膠（Sepharose）上。 近年來離子交換色譜技術已經廣泛應用於蛋白質、酶、核酸、肽、寡核苷酸、病毒、噬菌體和多糖的分離和純化。它的優點是:⑴具有開放性支持骨架，大分子可以自由進入和迅速擴散，故吸附容量大。⑵具有親水性，對大分子的吸附不大牢固，用溫和條件使可以洗脫，不致引起蛋白質變性或酶的失活。⑶多孔性，表面積大、交換容量大，回收率高，可用於分離和制備。
離子交換劑通常是一種不溶性高分子化合物，如樹脂，纖維素，葡聚糖，醇脂糖等，它的分子中含有可解離的基團，這些基因在水溶液中能與溶液中的其它陽離子或陰離子起交換作用。雖然交換反應都是平衡反應，但在層析柱上進行時，由於連續添加新的交換溶液，平衡不斷按正方向進行，直至完全。因此可以把離子交換劑上的原子離子全部洗脫下來，同理，當一定量的溶液通過交換柱時，由於溶液中的離子不斷被交換而濃度逐減少，因此也可以全部被交換並吸附在樹脂上。如果有兩種以上的成分被交換吸著在離子交換劑上，用洗脫液洗脫時，在被洗脫的能力則決定於各自洗反應的平衡常數。蛋白質的離子交換過程有兩個階段——吸附和解吸附。吸附在離子交換劑上的蛋白質可以通過改變pH使吸附的蛋白質失去電荷而達到解離但更多的是通過增加離子強度，使加入的離子與蛋白質競爭離子交換劑上的電荷位置，使吸附的蛋白質與離子交換劑解開。不同蛋白質與離子交換劑之間形成電鍵數目不同，即親和力大小有差異 ，因此只要選擇適當的洗脫條件便可將混合物中的組分逐個洗脫下來，達到分離純化的目的

㈧ 蛋白質分離純化的四種方法

1、鹽析法：

鹽析法的根據是蛋白質在稀鹽溶液中，溶解度會隨鹽濃度的增高而上升，但當鹽濃度增高到一定數值時，使水活度降低，進而導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，最終引起蛋白質分子間互相凝聚並從溶液中析出。

2、有機溶劑沉澱法：

有機溶劑能降低蛋白質溶解度的原因有二：其一、與鹽溶液一樣具有脫水作用；其二、有機溶劑的介電常數比水小，導致溶劑的極性減小。

3、蛋白質沉澱劑：

蛋白質沉澱劑僅對一類或一種蛋白質沉澱起作用，常見的有鹼性蛋白質、凝集素和重金屬等。

4、聚乙二醇沉澱作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質發生沉澱作用。

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蛋白質是生命的物質基礎，是有機大分子，是構成細胞的基本有機物，是生命活動的主要承擔者。沒有蛋白質就沒有生命。氨基酸是蛋白質的基本組成單位。它是與生命及與各種形式的生命活動緊密聯系在一起的物質。

機體中的每一個細胞和所有重要組成部分都有蛋白質參與。蛋白質占人體重量的16%~20% ，即一個60kg重的成年人其體內約有蛋白質9.6~12kg。

人體內蛋白質的種類很多，性質、功能各異，但都是由20多種氨基酸（Amino acid）按不同比例組合而成的，並在體內不斷進行代謝與更新。

㈨ 工業用純水機的純化柱單元

純化柱內裝填有美國羅門哈斯/陶氏公司所產UP核子級混床樹脂，當原水通過純化柱時，水中的陽離子與陽樹脂中H+置換，水中陰離子與陰樹脂中OH-離子置換，交換後進入水中的H+和OH-會立即結合生成H2O,從而使原水中的陰陽離子得以去除，其出水電阻率最高可達18.3 MΩ.cm。
一套完整的水處理系統由預處理系統、精處理系統、後處理系統三大部分組成。原水經PP濾芯（砂棒過濾器）、活性炭單元、軟水器單元等預處理系統後，使水中的懸浮物（顆粒物質）、膠體、有機物、硬度、微生物等雜質含量大大降低，以減輕後續的反滲透、電除鹽等精處理系統的處理負荷，延長其使用壽命。
PP濾芯
材質：聚丙烯熱熔纖維濾芯。
特性：10μm濾孔能截留水中的顆粒物質（如自來水中常有的泥沙、鐵銹），降低濁度，但不能濾除細菌和離子物質。
規格：10寸（250㎜）/20寸（500㎜）。
活性炭單元
活性炭的比表面積很大，且布滿了孔徑極小（10～30埃）的微孔，對有機物膠體、余氯、鐵離子等有明顯的吸附濾除作用。台式純水機、凈水器等常用10寸/20寸活性炭濾芯。大型純水機組常用玻璃鋼/不銹鋼材質的活性炭濾罐。
軟水器單元
大中型純水系統常使用全自動軟水器以除去原水中的鈣鎂離子。全自動軟水器由鈉離子樹脂罐、再生鹽箱及多路控制閥組成，能夠設定程序控制運行，自動再生（時間型/流量型兩種控制方式），再生時利用虹吸原理吸鹽，再注水化鹽，再生時間通常為2小時。
小型台式純水機一般使用10寸/20寸軟水樹脂濾芯來降低原水硬度。
反滲透單元
RO（Reverse Osmosis）反滲透技術是利用壓力表差為動力的膜分離過濾技術，源於美國二十世紀六十年代宇航科技的研究，後逐漸轉化為民用，目前已廣泛運用於科研、醫葯、食品、飲料、海水淡化等領域。
RO反滲透膜孔徑小至納米級（1納米=10-9米），在一定的壓力下，H2O分子可以通過RO膜，而源水中的無機鹽、重金屬離子、有機物、膠體、細菌、病毒等雜質無法通過RO膜，從而使可以透過的純水和無法透過的濃縮水嚴格區分開來。
RO膜對高價離子、膠體、細菌及分子量大於300 dalton的有機物質（包括熱源）去除率高達99%以上，對低價離子（NA+、K+）去除率達95%，當源水電導率<3505µs/cm，RO純水電導率通常≤55µs/cm，符合國家三級用水標准。再經過原子級離子交換柱循環過濾，出水率可達18.2MΩ.cm。
反滲透法是可達到90%～99%雜質去除率最經濟的方法，同時也是試劑級超純水系統最好的前處理方法。
備註：RO膜的過濾能力受水溫影響較大，最適合的水溫為25℃～30℃，溫度下降1℃，RO膜的產水量約下降3%，當水溫接近0℃時，RO膜將停止產水。
超濾器單元
超濾膜又稱為中空纖維超濾膜。孔徑介於反滲透和微濾之間，約0.01～0.1μm，常用作純水系統的後處理裝置，可用於截留溶液中各種微粒、大分子溶質、細菌、病毒、熱原等。超濾膜的孔徑是由一定分子量的物質進行截留試驗測定的，並以分子量的數值來表示，能夠濾除熱原的超濾膜的分子量通常為6000道爾頓（dalton）。
紫外儀單元
紫外線是一種肉眼看不見的光波，存在於光譜紫外線端的外側，故稱之為紫外線，依據不同的波長范圍，被割分為 A 、 B 、 C 三種波段，其中的 C 波段紫外線波長在 240 － 260nm 之間，為最有效的殺菌波段，波段中之波長最強點是 253.7nm。
當紫外線設備產生的足夠劑量的強紫外光照射到水、液體或空氣時，其中的各種細菌、病毒、微生物、寄生蟲或其它病原體在紫外光 UV-C 的輻射下，細胞組織中的 DNA 、 RNA 被破壞，從而阻止子細胞的再生 ，紫外線消毒設備在不使用任何化學葯劑的情況下，較短時間內（通常為 0.2-5 秒）殺滅了水中、液體或空氣中 99.9% 以上的細菌和病毒。科學試驗證明，波長在 240-280nm 的紫外線具備有高效殺菌功能。
現代紫外線消毒技術是基於現代防疫學、光學、生物學和物理化學的基礎上，利用特殊設計的高效率，高強度和長壽命的 C 波段紫外光發生裝置，產生的強紫外 C 光照射流水（空氣或固體表面），當水（空氣或固體表面）中的各種細菌、病毒、寄生蟲、水藻以及其它病原體受到一定劑量的紫外 C 光輻射後，其細胞中的 DNA 結構受到破壞，從而在不使用任何化學葯物的情況下殺滅水中的細菌、病毒，以及其它致病體，達到消毒和凈化的目的。
紫外線殺菌器以 304 或 316L 不銹鋼作主體材料，以高純石英管作套管，配合高性能的石英紫外線低壓汞消毒燈管，具有殺菌力強，壽命長、支行穩定可靠等優點，其殺菌效率≥ 99% ，進口燈管使用壽命≥ 9000 小時。
紫外線殺菌
紫外線是一種肉眼看不見的光波，存在於光譜紫外線端的外側，故稱之為紫外線，依據不同的波長范圍，被割分為 A 、 B 、 C 三種波段，其中的 C 波段紫外線波長在 240 － 260nm 之間，為最有效的殺菌波段，波段中之波長最強點是 253.7nm。
紫外線殺菌的原理一般認為是生物體內的核酸吸收了紫外光的能量而改變了自身的結構，進而破環了核酸的功能所致。當核酸吸收的能量達到致死量而紫外光的照射又能保持一定時間時，細菌便大量死亡。
紫外線殺菌的特點：
6. 紫外線殺菌速度快，效率高，效果好。
7. 紫外線照射不會改變水的物理和化學性質，對純水不會帶入附加物所引起的污染。
8. 適用於各種水的流量下，操作簡單，適用方便，只需要定期清洗石英玻璃套管，更換燈管即可。
9. 體積小，輕便，耗電低。
10. 紫外線殺菌沒有持續消毒作用，易受二次污染。
紫外光（UV）的氧化作用。
純化柱單元
純化柱內裝填有美國羅門哈斯/陶氏公司所產UP核子級混床樹脂，當原水通過純化柱時，水中的陽離子與陽樹脂中H+置換，水中陰離子與陰樹脂中OH-離子置換，交換後進入水中的H+和OH-會立即結合生成H2O,從而使原水中的陰陽離子得以去除，其出水電阻率最高可達18.3 MΩ.cm。

㈩ 純化水培養細胞、病毒有什麼後果

蒸餾是一種很費能量的純化水的方法，如果想達到18.2，要經過多次重蒸回餾。費能量不答說，還費很多水（水利用率很低，大部分水白白的浪費掉）。這種方法目前基本不用。
而電阻率18.2的水算是目前能達到的最高水質了。但也只是出水口而已。
用於細胞培養，動物注射是沒有問題的。
一般細胞培養實驗室都用這個。不過用自來水做為進口水源的很少（太費柱子）。一般是買那種桶裝水。進一步純發達到電阻率18.2的水，我們一般叫他超純水。
而在醫學上來講，這種水不叫注射用水。國家對注射用水也不是這樣規定的。一個是這樣成本太高（實驗室做做實驗沒問題）。另一個，只要水一接觸空氣，電阻就變了，沒法監控，也沒法檢收。
一般國內的注射用是用純化水蒸餾一回就算是合格了。當然，保存相對來說，比實驗室要求嚴格。