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離心管的超濾膜怎麼洗

發布時間:2022-01-07 17:23:55

超濾離心管怎麼使用

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管(MWCO10kD)。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時,【取50ul國產Bradford溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mg/ml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測】,繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱,導致堵管。若發生沉澱,要確定沉澱的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,後者的方法是換不同的Buffer,直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續三次,最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多於500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,用黃槍頭(200ul)取,輕輕順著邊緣插入槍頭,輕輕吹打、混勻蛋白液,注意不要碰到超濾膜,然後吸取濃縮液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取,否則難度太大,有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中,沒過超濾膜,防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管,重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤洗幾次,【若管底有可見的蛋白沉澱,可以先加入水,然後用槍頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉澱懸起,然後倒掉,不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗,內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯,加至接近滿的MilliQ水,50ml管也加滿MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml
離心管,排出部分水,然後蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來說,按照上述步驟和注意事項,每根管用三四年不會壞。

Ⅱ 超濾膜怎麼進行清洗

超濾膜有幾種清洗方法:

超濾膜會隨著使用時間的延長,超濾膜的污染會不斷的加重,當污染到達一個程度的時候就需要對超濾膜進行一個清洗,清洗後能讓超濾膜最大程度上恢復原有的產水量,那麼超濾膜的清洗方法有幾種呢?超濾膜的清洗方法大類可以分為兩種分別是:物理清洗方法和化學清洗方法。物理清洗方法還可以分為逆向沖洗、反沖洗、正洗沖洗三種。這些清洗都有著不同的作作和特點,下面為大家詳細的介紹一下。


超濾膜的清洗方法有哪些,詳細的解答:

一、物理清洗法:物理方法其實就是用有一定壓力的水去沖洗超濾膜,這也是最常用的方法。因為這個水沖洗的方向不一樣,又可以分為逆向沖洗、反沖洗和正洗沖洗。

1.逆向沖洗:用原水沖洗膜內和進水端面的雜質。

2.反沖洗:用超濾水從膜塊表面的污染物沖鬆散、剝落,分別從進水口和濃縮口排出(可加酸、鹼或次氯酸鈉等葯品加強清洗效果)。

二、化學清洗法:

利用化學葯品與膜面雜質進行化學反應來達到清洗膜的目的

酸溶液清洗:常用溶液有鹽酸、檸檬酸、草酸等,調配溶液的PH=2~3,利用循環清洗或者浸泡0.5h~1h後循環清洗,對無機雜質去除效果較好。

鹼溶液清洗:常用的鹼主要有NaOH ,調配溶液的PH=10~12左右,利用水循環操作清洗或浸泡0.5h~1h後循環清洗,可有效去除雜質及油脂。

氧化劑清洗劑:利用1%~3%H2O2、 500~1000mg/L NaClO 等水溶液清洗超濾膜,可以去除污垢,殺滅細菌。H2O2和NaClO是常用的殺菌劑。

加酶洗滌劑:如0.5%~1.5%胃蛋白酶、胰蛋白酶等,對去除蛋白質、多糖、油脂類污染物質有效。

進行方法與正常超濾過程相同,清洗液自原液入口處進入,濃縮液及超濾液全部返回清洗液容器,循環後排放,以凈水洗凈即可。

Ⅲ 超濾膜的清洗

物理方法
正向等壓清洗,全部打開濃縮水出口閥門,關閉超濾水閥門,靠專大流量高流速對屬膜進行清洗。
逆向等壓清洗,關閉超濾水閥門,切換閥門使進水與出水調換方向,以大流量高流速對膜進行逆向清洗。
反向沖洗,將清洗水用清洗水泵通過膜組件的超濾口泵入。

Ⅳ 如何對GE超濾膜進行清洗

清洗步驟如下:
1、先用清水沖洗整個超濾系統,水溫最好採用反滲透膜所能承受內得較高溫度。
2、選用合容適的清洗劑進行循環清洗設備。
3、清洗劑中可含EDTA或六偏磷酸鈉等絡合劑。
4、用清水沖洗,去除清洗劑。
5、用0.5%的甲醛水溶液浸泡消毒並貯存。

Ⅳ 超濾濃縮離心管使用前要怎麼處理

可能不來同廠家的產品保存運輸條源件不一樣。
如果有甘油等保護劑,那就一定要洗干凈再加樣品。
乾的超濾管也要先潤濕再用,否則可能不能完全利用膜面積。
最好,用樣品buffer潤洗下再加樣,最大程度保證蛋白活性。尤其是用過後保存在NaOH或乙醇中後。
一般還是離心機甩一下好,使膜充分浸潤。

降低吸附的辦法有:
1,蛋白濃度不要過低
2,盡量選用纖維素的低吸附超濾管
3,用前可以用Tween 80等去垢劑潤洗(不影響蛋白活性的前提下)
4,加入保護蛋白,如BSA(不影響蛋白後續使用的前提下)

用完保存在20% EtOH中,4C保存,防止長菌,依不同樣品可以重復使用不同的次數。

Ⅵ GE超濾膜應該怎樣清洗按照清洗步驟就行了嗎

現有抄GE超濾膜的清洗步驟如下可襲供參考:
1、先用清水沖洗整個超濾系統,水溫最好採用反滲透膜所能承受的較高溫度。
2、選用合適的清洗劑進行循環清洗設備。
3、清洗劑中可含EDTA或六偏磷酸鈉等絡合劑。
4、用清水沖洗,去除清洗劑。
5、用0.5%的甲醛水溶液浸泡消毒並貯存。

Ⅶ 大口徑管式超濾膜應該如何清洗

1、配製清洗液。

2、低流量輸入清洗液首先用清洗水泵混合一遍清洗液,預熱清洗液時應以低流量。然後以盡可能低的清洗液壓力置換元件內的原水,其壓力僅需達到足以補充進水至濃水的壓力損失即可,即壓力必須低到不會產生明顯的滲透產水。低壓置換操作能夠最大限度的減低污垢再次沉澱到膜表面,視情況而定,排放部分濃水以防止清洗液的稀釋。

3、循環當原水被置換掉後,濃水管路中就應該出現清洗液,讓清洗液循環回清洗水箱並保證清洗液溫度恆定。

超濾膜清洗步驟如何?

4、浸泡停止清洗泵的運行,讓膜元件完全浸泡在清洗液中。有時元件浸泡大約1小時就足夠了,但對於頑固的污染物,需要延長浸泡時間,如浸泡10至15小時或浸泡過夜。為了維持浸泡過程的溫度,可採用很低的循環流量。

5、高流量水泵循環高流量能沖洗掉被清洗液清洗下來的污染物,如果污染嚴重,請採用高於規定50%的流量將有助於清洗,在高流量條件下,將會出現過高壓降的問題,單元件最大允許的壓降為1bar(15psi),對多元件壓力容器最大允許壓降為3.5bar(50psi),以先超出為限。

6、沖洗預處理的合格產水可以用於沖洗系統內的清洗液,除非存在腐蝕問題。

7、清洗多段系統的沖洗和浸泡步驟中,可以對整個系統的所有段同時進行,但是對於高流量的循環必須分段進行,以保證循環流量對第一段不會太低而對最後一段不會太高,這可以通過一台泵每次分別清洗各段或針對每段流量要求設置不同的清洗泵來實現。

Ⅷ 浸沒式管式超濾膜如何進行清洗

管式超濾膜正確的清洗方法:
1、對於一般的膜孔不是特別細小的可拆式的回超濾濾芯,可直接拆開答用柔軟物質一邊擦拭一邊用清水沖洗。
2、用海綿球擦洗,根據膜管直徑大小,選擇合適的海綿球,利用專用設備通過膜管進行擦拭清洗,可以反復使用。
3、熱水沖洗法將水加熱到(30-40℃),然後沖洗膜表面,去除那些粘稠或者是熱溶的雜質效果很好。

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