㈠ 哪些方法可以進行蛋白質脫鹽處理
小分子蛋白的脫鹽用什麼方法比較好透析、超濾、分子篩層析、冷乙醇沉澱等分子篩層析是最徹底的,不過對上樣量有要求. 做冷乙醇沉澱的時候得先做預實驗,防止蛋白變性.
㈡ 丙酮沉澱得到的蛋白溶於8m尿素,可以用脫鹽柱除鹽嗎
包涵體用8M尿素還不溶解該怎麼辦
①
包涵體就是蛋白的變性聚集後的產物,6M鹽酸胍及8M尿素是作為溶解包涵體的溶劑。
②
復性的過程是逐步去除鹽酸胍或者尿素,從而使得蛋白天然構象逐步形成。
所以一般如果起始使用的是6M鹽酸胍進行包涵體溶解,這個過程中逐步降低的是鹽酸胍的濃度。
㈢ 如何用蛋白濃縮管
選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,最常見的是Ultra-15(10kD)。
通常應回截留分子量答不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。
新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
(3)蛋白可以用超濾管脫鹽嘛擴展閱讀:
超濾濃縮離心管,最新推出專利產品Hydrosart膜2K型,具有極低的蛋白吸附特性,高流速、高通量,是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想用膜。
備有四種材質的超濾膜:聚醚碸、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart,可根據不同要求靈活選用;兩種回收濃縮液的方法:既可用吸管直接吸取並回收,又可將離心管放入離心機反甩,將濃縮液甩入回收帽中,加蓋保存。這兩種方法都可使濃縮液達到近乎完全回收;
㈣ 工業生產蛋白,提取液脫鹽用什麼方法超濾還是離子交換樹脂好些理由是什麼比如成本和效率方面
超濾,用於截留水中膠體大小的顆粒,而水和低分子量溶質則允許透過膜。由膜表面機械篩分、膜孔阻滯和膜表面及膜孔吸附的綜合效應,以篩濾為主。所以超濾不能做為脫鹽設備,一般用在反滲透前做除鹽水預處理設備。
如果在你的問題中選的話只能用離子交換樹脂了。
離子交換法是以圓球形樹脂(離子交換樹脂)過濾原水,水中的離子會與固定在樹脂上的離子交換。常見的兩種離子交換方法分別是硬水軟化和去離子法。硬水軟化主要是用在反滲透(RO)處理之前,先將水質硬度降低的一種前處理程序。軟化機裡面的球狀樹脂,以兩個鈉離子交換一個鈣離子或鎂離子的方式來軟化水質。 離子交換樹脂利用氫離子交換陽離子,而以氫氧根離子交換陰離子;以包含磺酸根的苯乙烯和二乙烯苯製成的陽離子交換樹脂會以氫離子交換碰到的各種陽離子(例如Na+、Ca2+、Al3+)。同樣的,以包含季銨鹽的苯乙烯製成的陰離子交換樹脂會以氫氧根離子交換碰到的各種陰離子(如Cl-)。從陽離子交換樹脂釋出的氫離子與從陰離子交換樹脂釋出的氫氧根離子相結合後生成純水。 陰陽離子交換樹脂可被分別包裝在不同的離子交換床中,分成所謂的陰離子交換床和陽離子交換床。也可以將陽離子交換樹脂與陰離子交換樹脂混在一起,置於同一個離子交換床中。不論是那一種形式,當樹脂與水中帶電荷的雜質交換完樹脂上的氫離子及(或)氫氧根離子,就必須進行「再生」。再生的程序恰與純化的程序相反,利用氫離子及氫氧根離子進行再生,交換附著在離子交換樹脂上的雜質。
㈤ 同一個超濾濃縮管可以用來純化不同的蛋白嗎
不可以的
不管是哪個公司生產超濾濃縮管使用後都會有蛋白殘留在濾膜上,而不管是使回用氯化鈉或答者氫氧化鈉清洗都不能確保可以完全清理掉殘留在膜上的蛋白。
如果不同的蛋白間混合使用,可能前一個蛋白會污染到後一個蛋白,甚至有些某些高活性的酶殘留在上面會造成後一個蛋白被酶切降解,造成不必要的損失。