離子交換纖維素柱色譜法

Ⅰ 離子交換纖維素色譜法的交換種類

離子交換劑分為兩大類，即陽離子交換劑和陰離子交換劑。各類交換劑根據其解離性大小，還可分為強、弱兩種，即 強酸劑陽離子交換劑 弱酸劑強鹼型陰離子交換劑弱鹼型。
1.陽離子交換劑
陽離子交換劑中的可解離基因是磺酸（-SO3H）、磷酸（-PO3H2）、羧酸（COOH）和酚羥基（-OH）等酸性基。
某些交換劑在交換時反應如下：
強酸性：R-SO3-H++Na+ R-SO3- Na+H+
弱酸性：R-COOH+Na+ R-COONa+H+
國產樹脂中強酸1×7（上海樹脂#732）和國外產品Dowex 50、Zerolit 225等都於強酸型離子交換劑。
2.陰離子交換劑
陰離子交換劑中的可解離基因是伯胺、（-NH2）、仲胺（-NHCH3）、叔胺[N-（CH3）2]和季胺[-N（CH3）2]等鹼性基團。某些交換反應如下：強鹼性：R-N+（CH3）2 H·OH-+Cl R-N+（CH3）2 Cl+OH-弱鹼性：R-N+（CH3）2 H·OH-+Cl R-N+（CH3）2 HCl+OH-強鹼性#201號國產樹脂和國外Dowex1、Dowex2、ZerolitFF等都屬於強鹼型陰離子交換劑。
3.纖維素離子交換劑
陽離子交換劑有羥甲基纖維素（CM-纖維素），陰離子交換劑有氯代三乙胺纖維紗（DESE-纖維素）。
4.交聯葡聚糖離子交換劑
是將交換基因連接到交聯葡聚糖上製成的一類交換劑，因而既具有離子交換作用，又具有分子篩效應，是一類廣泛應用的色譜分離物質。常用的Sephadex離子交換劑也有陰離子和陽離子交換劑兩類。陰離子交換劑有DEAE-Sephadex A-25，A-50和QAE- Sephadex A25，A50； 陽離子交換劑有CM-Sephaetx C-50，C-50和Sephadex C-25，C-50。陰離子交換劑用英文字頭A，陽離子交換劑的英文字頭是C。英文字後面的數字表示Sephadex型號。3.瓊脂糖離子離交換劑：是將DESE-或CM-基團附著在Sepharose CL-6B上形成，DEAE-Sephades（陰離子）和CM-Sepharose（陽離子），具有硬度大，性質穩定，凝膠後的流速好，分離能力強等優點。

Ⅱ 用過的sephadex G-25層析柱和DEAE纖維素離子交換柱再生的方法為什麼不一樣

飛秒檢測發現sephadex G-25層析柱填料是葡聚糖交聯的凝膠柱，G-X, X：（1）交聯度。X越小，交聯度越大，網孔越小，適用於分離低分子量產品，反之亦然。（2）吸水量。為凝膠得水值的10倍.例如,G-25為每克凝膠膨脹時吸水2.5克.凝膠柱使用一次後，必須反沖疏鬆一次，平衡後再使用。若使用數次，就需要再生處理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡，然後用蒸餾水洗至中性備用。若實驗完畢，將再生後的凝膠在布氏漏鬥上用蒸餾水洗滌抽干，再用95%乙醇洗兩次，在60℃烘箱中烘乾，回收保存。
DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素，是陰離子交換劑。基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂；而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。由於蛋白質也有等電點，當蛋白質處於不同的pH條件下，其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質，所以這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質，結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用2mol/：NaCl淋洗柱，若有強吸附物則可用0.1mol/LNaOH洗柱；若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱後再生，也可用乙醇洗滌，其順序為：0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存離子交換劑時要加防腐劑。對陰離子交換劑宜用0.002%氯已定（洗必泰），陽離子交換劑可用乙基硫柳汞（0.005%）。有些產品建議用0.02%疊氮鈉。
兩種填料的抗酸鹼性和抗腐蝕性能不同。

Ⅲ 離子交換纖維素色譜法的基本理論

離子交換劑通常是來一源種不溶性高分子化合物，如樹脂，纖維素，葡聚糖，醇脂糖等，它的分子中含有可解離的基團，這些基因在水溶液中能與溶液中的其它陽離子或陰離子起交換作用。雖然交換反應都是平衡反應，但在層析柱上進行時，由於連續添加新的交換溶液，平衡不斷按正方向進行，直至完全。
因此可以把離子交換劑上的原子離子全部洗脫下來，同理，當一定量的溶液通過交換柱時，由於溶液中的離子不斷被交換而波度逐減少，因此也可以全部被交換並吸附在樹脂上。如果有兩種以上的成分被交換吸著在離子交換劑上，用洗脫液洗脫時，在被洗脫的能力則決定於各自洗反應的平衡常數。蛋白質的離子交換過程有兩個階段──吸附和解吸附。吸
附在離子交換劑上的蛋白質可以通過改變pH使吸附的蛋白質失去電荷而達到解離但更多的是通過增加離子強度，使加入的離子與蛋白質競爭離子交換劑上的電荷位置，使吸附的蛋白質與離子交換劑解開。不同蛋白質與離子交換劑之間形成電鍵數目不同，即親和力大小有差異，因此只要選擇適當的洗脫條件便可將混合物中的組分逐個洗脫下來，達到分離純化的目的。

Ⅳ DEAE-纖維素離子交換層析法可用於分離純化蛋白質，主要是由於：

答案D
分配層析利用來樣自品各組分在固定相和流動相間溶解度的不同(分配系數不同)來進行分離；吸附層析法利用吸附劑表面對樣品組分吸附能力強弱不同來進行分離；親和層析由於配體與待分離物質進行特異性結合；DEAE-纖維素離子交換層析法利用樣品組分對離子交換劑靜電力的差異來進行分離。

Ⅳ 離子交換纖維素色譜法的實驗操作

（一）交換劑的處理，再生與轉型
新出廠的樹脂是干樹脂，要用水浸透使之充分吸水膨脹。因其含有政績一些雜質，所要要用水、酸、鹼洗滌。一般手續如下：新出廠干樹脂用水浸泡2小時後減抽壓去氣泡，傾去水，再用大量無離子水洗至澄清，去水後加4倍量2N HCl攪抖4小時，除去酸液，水洗到中性，再加4倍量2N NaOH攪抖4小時，除鹼液，水洗到中性備用。將樹脂帶上所希望的某種離子的操作稱為轉型。如希望陽樹脂帶Na+，則用4倍量NaOH攪拌浸泡2小時以上；如希望樹脂帶H+，可用HCl處理。陰樹脂轉型也同樣，若希望帶Cl-則用HCl，希望帶OH-則用NaOH。用過的樹脂使其恢復原狀的方法稱為再生。並非每次再一都用酸、鹼液洗滌，往往只要轉型處理就行了。
（二）柱上操作
⑴交換劑裝柱最簡單的交換層析柱可用鹼式滴定管代替。處理過的樹脂放入燒杯，加少量水邊攪拌邊倒入保持垂直的層析管中，使樹脂緩慢沉降。交換劑在柱內必須分布均勻。
⑵上樣向層析柱內傾入樣品液⑶洗脫與收集
不同樣品選用的洗脫液不同。原則是用一種比吸著物質更活潑的離子，把吸著物交換出來。由於被吸著的物質往往不是我們所要求的單一物質，因此除了正確選擇洗脫液外還采控制流速和分布收集的方法來獲得所需的單一物質。

Ⅵ 7.下列關於用離子交換纖維素色譜法分離蛋白質原理的敘述哪一個是正確的

答案D
分配層析利用樣抄品各組分在固定相和流動相間溶解度的不同(分配系數不同)來進行分離；吸附層析法利用吸附劑表面對樣品組分吸附能力強弱不同來進行分離；親和層析由於配體與待分離物質進行特異性結合；DEAE-纖維素離子交換層析法利用樣品組分對離子交換劑靜電力的差異來進行分離。

Ⅶ 離子交換柱層析能分離純化蔗糖酶的主要依據是什麼

DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素，是陰離子交換劑。
其原理基於離子交換層析：離版子交換層析中，基質是由帶權有電荷的樹脂或纖維素組成。
由於蛋白質也有等電點，當蛋白質處於不同的pH條件下，其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質，所以這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質，結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。

Ⅷ 離子交換纖維素色譜法的介紹

離子來交換纖維素色譜法自，是將離子交換基團結合到纖維素上，製成離子交換纖維素的方法。1956年，Sober和Peterson首次將該方法成功地應用於蛋白質的分離。從此使生物大分子的分級分離方法取得了迅速的發展。離子交換基團不但可結合到纖維上，還可結合到交聯葡聚糖（S-ephadex）和瓊脂糖凝膠（Sepharose）上。近年來離子交換色譜技術已經廣泛應用於蛋白質、酶、核酸、肽、寡核苷酸、病毒、噬菌體和多糖的分離和純化。

Ⅸ 離子交換纖維素色譜法的技術特點

它們的優點是來:⑴具有源開放性支持骨架，大分子可以自由進入和迅速擴散，故吸附容量大。⑵具有親水性，對大分子的吸附不大牢固，用溫和條件使可以洗脫，不致引起蛋白質變性或酶的失活。⑶多孔性，表面積大、交換容量大，回收率高，可用於分離和制備。

Ⅹ DEAE纖維素柱的原理

DEAE纖維素柱原理，基於離子交換層析：離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖回維素組成。

陰離子答交換基質結合，帶有負電荷的蛋白質，然後這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質從而洗脫下來。

(10)離子交換纖維素柱色譜法擴展閱讀：

基本信息：

性狀：乾燥纖維狀。

用途：用於柱色譜分析，用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等，陰離子交換填料。

保存：常溫乾燥封袋保存。

DEAE—纖維素的使用方法：

稱取IgDEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸餾水浸泡過夜，觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量，稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜，其間換幾次水，每次除去細小顆粒。

抽干，改用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1h以上，抽干（可用布氏漏斗），用無離子水漂洗，使pH至8左右（用pH試紙檢查）。再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡1h以上，去酸溶液，用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應以0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖液，浸泡平衡後使用。