超濾js502a的作用

『壹』 one component system 單因子系統 是什麼

單組成因素生產系統（one-component system）：
所有的組成成分都集中在生產細胞中。經典的反轉錄病毒生產系統就是由產病毒細胞（VPC）組成，重組反轉錄病毒由VPC細胞不斷分泌至培養上清中。這種生產系統操作最為簡單，但是往往產量不高或不穩定。採用這種策略，需要將重組病毒產生所需要的所有元件都穩定地置於生產細胞中。由於許多病毒基因產物本身對細胞有破壞作用或不能在細胞中穩定表達，因此這種策略在許多病毒載體的生產中難以實施。
第一節 病毒載體產生的原理

病毒載體的產生建立在對病毒的生活周期和分子生物學認識的基礎之上。研究病毒載體首先要對病毒的基因組結構和功能有充分的了解，最好能獲得病毒基因組全序列信息。病毒基因組可分為編碼區和非編碼區。編碼區基因產生病毒的結構蛋白和非結構蛋白；根據其對病毒感染性復制的影響，又可分為必需基因和非必需基因。非編碼區中含有病毒進行復制和包裝等功能所必需的順式作用元件。
各種野生型病毒顆粒都具有一定的包裝容量，即對所包裝的病毒基因組的長度有一定的限制。一般來說，病毒包裝容量不超過自身基因組大小的105～110％。
基因重組技術的發展使病毒載體的產生成為可能。最簡單的做法是，將適當長度的外源DNA插入病毒基因組的非必需區，包裝成重組病毒顆粒。比如，本實驗室曾將4.5kb的lacZ基因表達盒（CMV-lacZ-polyA）插入HSV1病毒的UL44（糖蛋白C）基因的XbaI位點中，病毒基因組的其餘部分不改變，構建成重組病毒HSV1-lacZ100（吳小兵等，1998）。由於UL44基因產物對於HSV病毒在培養細胞中產毒性感染是非必需的，因此，該重組病毒可以在細胞中增殖傳代。用這種重組病毒感染細胞，能將lacZ基因帶入細胞並高效表達。用同樣的方法，將AAV-2病毒的rep和cap基因片段（4.3kb）插入HSV1病毒的UL2（編碼尿嘧啶DNA糖基化酶）或UL44（編碼糖蛋白C）基因中，構建成具有提供重組AAV載體復制和包裝所需的全部輔助功能的輔助病毒rHSV-rc（伍志堅等，1999）。
然而，這樣的重組病毒作為基因轉移載體有許多缺點。首先，許多野生型病毒通過在細胞中產毒性復制而導致細胞裂解死亡；或帶有病毒癌基因而使細胞發生轉化。因此必須經過改造使其成為復制缺陷性病毒並且刪除致癌基因後才能用於基因治療。其次，插入外源DNA的長度受到很大限制，尤其對於基因組本身較小的病毒如腺病毒伴隨病毒（AAV，4.7kb）、反轉錄病毒（8～10kb）、腺病毒（36kb），如果不去除病毒基因，可供外源DNA插入的容量就十分小。因此，必須刪除更多的病毒基因以騰出位置插入較大的外源DNA。 為了增加病毒載體插入外源DNA的容量，除了可以刪除病毒的非必需基因外，還可以進一步刪去部分或全部必需基因，這些必需基因的功能由輔助病毒或包裝細胞系反式提供。
病毒載體大體上可分為兩種類型：
重組型病毒載體：這類載體是以完整的病毒基因組為改造對象。一般的步驟是選擇性地刪除病毒的某些必需基因尤其是立早基因或早期基因，或控制其表達；缺失的必需基因的功能由互補細胞反式提供；用外源基因表達單位替代病毒非必需基因區；病毒復制和包裝所需的順式作用元件不變。這類載體一般通過同源重組方法將外源基因表達單位插入病毒基因組中。如在傳統的重組腺病毒構建方法中，將外源基因表達盒（exogenous gene expression cassette）插入穿梭質粒（如pXCX2或pFGdX1）的腺病毒同源序列中，與輔助質粒（含有腺病毒基因組的質粒如JM17或pBHG）共轉染293細胞，通過細胞內的同源重組獲得含有外源基因的重組腺病毒（Graham FL and Prevec L 1995）。
無病毒基因的病毒載體（gutless vectors）：這類載體在不同的病毒載體系統中的稱謂不同。對於腺病毒，一般稱為mini-Ad；在HSV載體系統，一般稱為擴增子（amplicon）載體或質粒型載體。重組AAV載體也屬於無病毒基因的病毒載體。這類載體系統往往由載體質粒和輔助系統組成。重組載體質粒主要由外源基因表達盒、病毒復制和包裝所必需的順式作用元件及質粒骨架組成。輔助系統包括病毒復制和包裝所必需的所有反式作用元件。在輔助系統的作用下，重組載體質粒（包含或不包含質粒骨架）以特定形式（單鏈或雙鏈，DNA或RNA）被包裝到病毒殼粒中，其中不含有任何病毒基因。這類病毒載體的優點在於載體病毒本身安全性好，容量大。缺點在於往往需要輔助病毒參與載體DNA的包裝，而輔助病毒又難以同載體病毒分離開來，造成最終產品中輔助病毒污染，從而影響其應用。實際上，無病毒基因的病毒載體可以看作是重組病毒載體的一種極端減毒情況。
表1列舉了幾種常見的病毒載體的順式作用元件和經典的包裝方式。 載體 順式作用元件 經典包裝方式
反轉錄病毒載體
1） 兩個長末端重復序列（LTR）：含有整合和調節轉錄的必需序列；含有轉錄增強子和啟動子；
2） tRNA 引物結合位點p；
3）包裝信號序列ψ。
載體質粒轉染整合了所有必需基因（gag,pol,env）的包裝細胞系如PA317，經選擇培養獲得產病毒細胞系（VPC）；細胞不裂解，病毒不斷分泌至培養上清中。

腺病毒載體
兩個末端倒轉重復序列（ITR）；
包裝信號序列。
載體質粒與輔助質粒共轉染293細胞獲得重組腺病毒。重組腺病毒感染293細胞而擴增；細胞每次被感染後發生裂解。

腺病毒伴隨病毒載體
兩個末端倒轉重復序列（ITR）；其中包括了病毒復制起點、包裝信號及整合和拯救所必需的順式元件。
AAV載體質粒和輔助質粒共轉染293細胞，並加輔助病毒（腺病毒或單純皰疹病毒）感染。

單純皰疹病毒載體
HSV 病毒復制起點ori； 病毒包裝信號pac 。
PTCA重組病毒在互補細胞上傳代；
擴增子病毒在輔助病毒存在下傳代。

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第二節 病毒載體的包裝系統

將外源基因包裝到病毒殼粒中，是病毒載體生產的核心技術。一般地，病毒載體的制備包括以下要素：

宿主細胞
雖然現在已有可能對有些病毒載體（如AAV載體）進行體外（無細胞）包裝（Zhou XH et al . 1998; Ding L et al. 1997），但是這種包裝系統仍然需要細胞提取物，並且包裝效率相當低，遠遠達不到可生產水平。至今為止，病毒載體的包裝主要是在對該病毒敏感的宿主細胞中進行的。宿主細胞不但提供了病毒復制和包裝的環境條件，許多細胞成分還直接參與了病毒復制和包裝的過程。
病毒復制和包裝所必需的順式作用元件和外源基因的表達盒
一般地，病毒復制和包裝所必需的順式作用元件和外源基因的表達盒由細菌質粒攜帶，組成病毒載體質粒，是被包裝的對象。由於病毒復制方式的不同，有些病毒載體如單純皰疹病毒擴增子（HSV amplicon）載體在包裝時，整個載體質粒都被包裝進入病毒顆粒中；而有些病毒載體如反轉錄病毒、腺病毒伴隨病毒載體的質粒骨架部分並不被包裝到病毒顆粒中，只有病毒復制和包裝所必需的順式作用元件和外源基因表達盒被包裝到病毒顆粒中。
構建重組型病毒載體時，病毒復制和包裝所需的順式作用元件存在於病毒基因組中（病毒基因組可以由具有感染性的病毒顆粒提供，也可以質粒形式提供）。先將外源基因表達盒插入穿梭質粒攜帶的病毒同源序列中；將重組穿梭質粒轉染至細胞中，再用輔助病毒超感染；或將重組穿梭質粒與病毒基因組質粒共轉染細胞；重組質粒與病毒基因組在細胞中進行同源重組而產生表達外源基因的重組病毒。 重組腺病毒（Graham FL and Prevec L 1995）和重組單純皰疹病毒（Pyles RB et al. 1997；Kramm CM et al. 1997）的傳統制備方法都是採用這種方式。
為了使病毒載體的生產更為方便，病毒復制和包裝所必需的順式作用元件和外源基因的表達盒除了可以用質粒攜帶以外，也可以用另一種病毒（往往是輔助病毒）或生產細胞來攜帶。

輔助元件
包括病毒復制和包裝所必需的所有反式作用元件。這些元件一般包括病毒基因轉錄調控基因、病毒DNA合成和包裝所需的各種酶類的基因、病毒的外殼蛋白基因等。輔助元件的表現形式可以多種多樣。常用的形式有：
① 輔助質粒（helper plasmid），如用於產生重組腺病毒的質粒JM17，用於重組AAV包裝的輔助質粒pAAV/Ad（Rolling F and Samulski J 1995）等；
② 輔助病毒（helper virus），如用於HSV 擴增子載體包裝的輔助病毒HSV1 tsK株；
③ 包裝細胞系如用於反轉錄病毒載體包裝的PA317細胞。
這些表現形式之間可以相互轉化或合並。例如，輔助病毒可以轉化為輔助質粒：傳統的AAV載體生產系統常用腺病毒作為輔助病毒。研究發現，並非腺病毒的所有基因對AAV病毒的產生都是必需的，只需要腺病毒E1a, E1b, E2a, E4和VA RNA 5種基因就行了。因此，將這5種基因置於同一個質粒中，構建成的這種新的輔助質粒就完全可以替代原來的輔助病毒（Xiao X et al. 1998; Grimm D et al. 1998 ），不但提高了包裝效率，而且避免了產品中腺病毒污染的問題。

上述幾種要素的不同組合，便產生了各種各樣的病毒載體包裝策略。根據病毒載體生產系統的組成因素的多少，可將其分成以下幾種：

單組成因素生產系統（one-component system）：
所有的組成成分都集中在生產細胞中。經典的反轉錄病毒生產系統就是由產病毒細胞（VPC）組成，重組反轉錄病毒由VPC細胞不斷分泌至培養上清中。這種生產系統操作最為簡單，但是往往產量不高或不穩定。採用這種策略，需要將重組病毒產生所需要的所有元件都穩定地置於生產細胞中。由於許多病毒基因產物本身對細胞有破壞作用或不能在細胞中穩定表達，因此這種策略在許多病毒載體的生產中難以實施。

雙組成因素生產系統（two-component system）
這種生產系統一般由"一株病毒/一株細胞"組成。典型的例子是重組腺病毒生產系統。先用共轉染的方法獲得重組腺病毒毒種，再由該毒種和生產細胞（如293細胞）組成一個雙組成因素的生產系統使病毒大量擴增。

多組成因素生產系統（multi-component system）
是由兩種以上的組成因素組成的生產系統。傳統的AAV載體生產系統就是由載體質粒，輔助質粒，輔助病毒和生產細胞4種因素組成。這種策略的缺點是影響因素多，操作復雜，產量不容易穩定，不利於大規模生產。 以上各種生產系統也可以相互轉化。我們實驗室通過將上述AAV載體生產系統的4種因素進行兩兩合並，即將輔助質粒和輔助病毒合並成一種重組的輔助病毒，將載體質粒和生產細胞合並成AAV前病毒細胞株，成功地將其轉化成一種雙組成因素的新型高效生產系統（伍志堅等，1999）。

一般來說，發展新的包裝策略主要是為了以下幾種目的：
（1） 減少生產系統中的組成因素，簡化操作過程；
（2）提高生產效率，降低生產成本；
（3）避免或降低野生型病毒的產生；
（4）避免使用難以與產品病毒分離的輔助病毒。

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第三節 病毒載體的純化方法

重組病毒的純化與基因工程產品的純化既有許多共性，又有顯著的不同之處。病毒可以看作是一個具有特定結構的生物大分子，一般都由位於中心的核酸和包裹於其外的蛋白外殼組成。有些病毒還具有脂質膜和糖蛋白或糖脂。許多分離純化蛋白質的方法如離心和梯度離心、鹽析、柱層析、超濾、透析等方法都可用於病毒的純化。然而，由於病毒結構的復雜性，純化時不能採用蛋白質變性和復性的方法，因為一旦病毒蛋白發生變性，或病毒結構發生破壞，在體外就很難再重建成有感染性的病毒顆粒。因此，在病毒的純化過程中必須保持病毒的結構不受破壞，並且監測其感染活性。
病毒的純化一般分為以下幾個步驟：

初始物（start material）的收集或制備
根據病毒產生方式的不同而採取不同的方式。對於不導致細胞病變和死亡的病毒如反轉錄病毒，可不斷收集產毒細胞（VPC細胞）的培養上清作為初始物；對於在生產病毒過程中宿主細胞發生病變和死亡的病毒如腺病毒，在病毒產生達到高峰時，收集培養上清，並裂解細胞以釋放細胞內的病毒。
培養上清和細胞裂解液都可作為純化的初始物。在實驗室的小規模製備中，往往採用將培養上清與細胞一起反復凍融3～4次的方法制備細胞裂解液作為初始物。對於初始物體積大於500ml的較大規模的制備，則需要考慮採用不同初始物的損益率。如果收集時大部分（90％以上）目標病毒仍存在於細胞中，為了減少操作大體積初始物帶來的不便，可以考慮放棄上清中含有的目標病毒，而通過低速離心收集細胞，重懸於較小體積的緩沖液中進行細胞裂解制備細胞裂解液。對於腺病毒和AAV病毒的大規模製備都可以採用這種方式。如果通過延長培養時間可以使大部分的目標病毒釋放到培養液中，也可以只收集培養上清而棄去細胞，從而省去反復凍融的步驟。
除了用反復凍融方法裂解細胞外，還可以根據目標病毒的生物學性質採用其它不影響其感染性的方法，如超聲法、化學法（如在AAV病毒制備中用脫氧膽酸或氯仿）等。

初始物的濃縮
當初始物體積較大時，要考慮對其進行濃縮後再分離純化。濃縮時最好同時能獲得初步純化對於效果。 在不影響目標病毒的感染性的前提下，可選用鹽析、超濾、透析等方法進行濃縮。鹽析法不僅可以用來濃縮初始物，同時也能達到一定的分離純化效果。最常用的鹽是硫酸銨；許多病毒如腺病毒、AAV病毒和單純皰疹病毒用聚乙二醇/氯化鈉系統沉澱可獲得很好的效果並且不影響病毒的感染性。

目標病毒的分離純化
氯化銫密度梯度離心法至今仍是分離純化各種病毒的最常用方法。主要是依據不同病毒具有特徵性的浮力密度，使其與細胞裂解液中的其它成分分離開來。收集到目標病毒特異的組分後，用透析法除去其中的氯化銫，獲得純化的病毒。用這種方法有時可獲得極高純度的病毒。目前在臨床實驗中應用的重組腺病毒大都是用這種方法進行純化的。然而，這種方法也存在明顯的弊病，主要是費時且操作難度較大，重復性較差；並且氯化銫對人體有毒性。因此隨著基因治療研究和應用的發展，用這種方法純化的重組病毒可能不能適應人體內應用的要求。
用柱層析法尤其是親和層析法分離純化病毒可能成為用於臨床的重組病毒載體大量純化的主要方向。將病毒的特異性受體、抗體或化學合成的配體偶聯在層析基質上並制備成親和層析柱。將含有目標病毒的初始物經簡單處理後直接上柱，最後洗脫和收集目標病毒。這類方法最近在AAV病毒載體的純化中得到很高評價（Summerford C and Samulski J 1999）。

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第四節 病毒載體在基因治療中的應用

自1989年開展第一例人體基因轉移（標記基因）以來，據不完全統計，至今已開展了近400項基因治療臨床試驗，涉及病人1000餘人。2/3以上的臨床方案中應用了病毒載體進行基因導入。
由於各種的病毒載體具有其特定的生物學特性，這些特性決定了其在基因治療中的應用。
表2列舉了常用的病毒載體的特性和適用范圍 載體 順式作用元件 經典包裝方式
反轉錄病毒載體
1） 兩個長末端重復序列（LTR）：含有整合和調節轉錄的必需序列；含有轉錄增強子和啟動子；
2） tRNA 引物結合位點p；
3）包裝信號序列ψ。
載體質粒轉染整合了所有必需基因（gag,pol,env）的包裝細胞系如PA317，經選擇培養獲得產病毒細胞系（VPC）；細胞不裂解，病毒不斷分泌至培養上清中。

腺病毒載體
兩個末端倒轉重復序列（ITR）；
包裝信號序列。
載體質粒與輔助質粒共轉染293細胞獲得重組腺病毒。重組腺病毒感染293細胞而擴增；細胞每次被感染後發生裂解。

腺病毒伴隨病毒載體
兩個末端倒轉重復序列（ITR）；其中包括了病毒復制起點、包裝信號及整合和拯救所必需的順式元件。
AAV載體質粒和輔助質粒共轉染293細胞，並加輔助病毒（腺病毒或單純皰疹病毒）感染。

單純皰疹病毒載體
HSV 病毒復制起點ori； 病毒包裝信號pac 。
PTCA重組病毒在互補細胞上傳代；
擴增子病毒在輔助病毒存在下傳代。

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第五節 安全性檢測

總的來說，病毒載體制劑的安全性檢測主要涉及以下幾個方面（Aderson RW 1996）：

有復制能力的病毒（replication competent virus, RCV）
RCV一般產生於重組病毒生產過程中基因重組事件。由於RCV具有復制能力，在生產過程中一旦出現，就可能呈現優勢生長，從而影響載體病毒的產量；另外，含有RCV的製品用於人體內可能導致嚴重的病毒感染或急性/慢性病毒血症。
RCV是對用於基因治療的病毒載體制劑安全性檢測的特有項目。檢測RCV的方法因不同的病毒載體而異。對於反轉錄病毒載體，檢測有復制能力的反轉錄病毒（RCR）的方法主要是PG4 S+L- 分析法；也可採用其它的變通方法。對於腺病毒載體，檢測有復制能力的腺病毒（RCA）主要採用空斑分析方法及PCR方法。

輔助病毒
對於生產過程需要輔助病毒參與的病毒載體如AAV病毒載體，由於這些輔助病毒本身具有復制能力並對機體細胞有破壞性，因此檢測病毒制劑中的輔助病毒如腺病毒或單純皰疹病毒的殘存量十分重要。

其它成分的污染
檢測指標包括細菌、黴菌、支原體、內毒素等及在純化過程中所用試劑如氯化銫等的殘餘量。

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第六節 病毒載體的發展方向

基因治療研究的快速發展對基因導入系統提出了越來越高的要求。病毒載體的發展也日新月異，包括對已有病毒載體的不斷改進和完善，和越來越多的其它病毒被改造成為新的病毒載體。病毒載體的發展方向可歸納成以下幾個方面：

簡便、高效的病毒載體包裝系統：考慮到包裝的高效性和操作的簡便性，越來越多的病毒載體生產系統將採用雙組成因素系統。這種系統容易用於病毒載體的大規模生產（Liu XL et al.1999; Conway JE et al. 1999 ）。

無病毒基因的病毒載體（gutless viral vector）：去除病毒載體中所有的病毒基因，只保留其復制和包裝所必需的順式作用元件，是病毒載體的重要發展方向。這種策略可最大限度地擴大載體的容量和減少病毒對細胞的直接毒性和病毒蛋白表達引起的免疫毒性。 腺病毒的微載體（mini-Ad）、AAV載體、HSV擴增子載體都是無病毒基因的病毒載體。這一發展方向需要解決的主要問題是建立高效、安全（無輔助病毒污染）的包裝系統。

可調控表達外源基因的病毒載體：在許多疾病的基因治療中，實現外源基因的可調控表達十分重要。如糖尿病的基因治療，外源的胰島素基因的表達最好能受血糖水平的調控；腎性貧血的基因治療，EPO基因的表達最好能受血氧含量的調控等。目前所研究的表達調控系統主要包括各種葯物誘導的表達"開關"。其中四環素控制系統（Tet-on和Tet-off）是人工設計的一種基因表達調控模式。這個系統在體外和動物體內實驗中都表現出良好的表達調控作用（Fotaki ME et al.1997; Miller N and Whelan J 1997）。然而，由於其中的反式作用蛋白（tTA或rtTA）是異種蛋白，在機體內可能引起毒性作用和免疫反應，因此用於人體前還需考慮其安全性和長期有效性。
最近Binley K等（1999）報道了用缺氧反應元件（hypoxia response element ,HRE）腺病毒載體中外源基因的表達。缺氧可激活bHLH/PAS 家族轉錄因子的表達，它們可結合HRE核心序列上，誘發其下游基因的表達。

自我擴增型載體（self-amplifying vector）（Herweijer H and Wolff JA 1997）：目前的基因轉移方法基因轉移的效率仍相對較低，尤其是在體內。為了提高外源基因表達總水平，除了提高基因轉移效率外，另一種方法是盡量提高外源DNA在細胞中的表達水平。用自我擴增型的表達載體是達到此目的的方法之一。這些載體是以正鏈RNA病毒Sindbis病毒和Semliki Forest 病毒為基礎的。用目的基因代替病毒的外殼蛋白編碼序列，導入靶細胞中，病毒的復制蛋白大量復制重組的基因組，mRNA水平的大量增加導致高水平的轉導基因表達。自我擴增型載體的表現形式可以是RNA，DNA和重組病毒。

特異性復制型性病毒載體（specifically replicating vector）：指可在某種特性的組織中產毒性復制，而在其它組織中不增殖的病毒載體。這類病毒載體主要用於特異性裂解腫瘤細胞。如腺病毒突變株Onyx-015是55Kdal E1B基因功能缺失的腺病毒突變株，可以選擇性地在p53基因突變的腫瘤細胞中增殖，而在正常組織細胞中不增殖。用這種突變株聯合化療治療惡性腫瘤II期臨床結果令人鼓舞（Kirn D et al. 1998），已進入III期臨床試驗，從此，許多人工改造的腺病毒突變體被用於腫瘤治療研究中。如將腺病毒E1基因的表達用甲胎蛋白（AFP）啟動子控制，使得該病毒只能在甲胎蛋白陽性的肝癌細胞中增殖導致細胞死亡。也可以將這種病毒的基因組分開裝在兩個互補的缺陷性腺病毒載體上（Alemany R et al. 1999），其中一個載體除了腺病毒復制和包裝所必需的順式作用元件外，只含有E1區基因，其中E1A基因的表達受AFP啟動子的控制；另一個載體為E1區缺失的重組腺病毒。這兩個載體同時感染AFP陽性的肝癌細胞時，病毒可不斷增殖而引起細胞死亡；對於AFP陰性的細胞，E1A基因不表達，因而病毒不能增殖。類似的設計在HSV載體系統也有報道。除了用甲胎蛋白作為反式激活因子外，各種其它組織特異性表達的蛋白和調控序列都可被用來控制病毒的增殖。

嵌合型病毒載體（hybrid viral vector）：是指將不同病毒的基因元件進行組合，形成的重組雜合病毒。如腺病毒與AAV病毒的雜合體病毒，既具有腺病毒的感染性和基因組特性（雙鏈線狀DNA），又具有AAV病毒的染色體整合性（Lieber A et al. 1999）。各種病毒基因元件組合形成新的雜合載體的報道層出不窮，如單純皰疹病毒擴增子與AAV病毒雜合載體（Johnston KM et al. 1997）、腺病毒與EB病毒復制子雜合載體（Tan BT et al. 1999）腺病毒與反轉錄病毒雜合載體（Caplen NJ et al. 1999）等，不一而足。這些雜合載體使重組病毒的特性多樣化，以適應不同基因轉移目的的需要。

靶向性病毒載體（targeted viral vector）：是指能特異性地結合並感染某種細胞的病毒載體。靶向性病毒載體的產生主要有兩種方法。一種方法是將病毒顆粒與某一靶向分子（Harari OA et al.1999 ）或特異性抗體（Bartlett JS et al. 1999）偶聯；另一種方法是通過改變病毒外殼蛋白的結構，使其對細胞的親嗜性發生改變（Reynolds P et al. 1999；Krasnykh VN et al. 1996 ）。

參考文獻

Aderson RW. 1996. Forum'96: Gene Therapy. P21-24
Alemany R, Lai S, Lou YC et al. 1999. Complementary adenoviral vectors for oncolysis. Krasnykh VN, Mikheeva GV. Douglas JT et al. 1996. Generation of recombinant adenovirus vectors with modified fibers for altering viral tropism. J Virol. 70:6839-6846.
Lieber A, Steinwaerder.DS, Carlson CA et al. 1999. Integrating adenovirus-adeno-associated virus hybrid vectors devoid of all viral genes J Virol. 73:9314-9324
Liu XL, Clark KR, Johnson PR. 1999. Proction of recombinant adeno-associated virus vectors using a packaging cell line and a hybrid recombinant adenovirus. Gene Ther. 6:293-299
Miller N and Whelan J. 1997. Progress in transcriptionally targeted and regulatable vectors for genetic therapy. Hum. Gene Ther. 8:803-815
Pyles RB, Warnick RE, Chalk CL et al.1997 A novel multiply-mutated HSV-1 strain for the treatment of human brain tumors. Hum. Gene Ther. 8:533-544
Reynolds P, Dmitriev I, Curiel D. 1999. Insertion of an RGD motif into the HI loop of adenovirus fiber protein alters the distribution of transgene expression of the systemically administered vector.
Rolling F and Samulski J. 1995 AAV as a viral vector for human gene therapy. Molecular Biotechnology. 3:9-15
Summerford C and Samulski J. 1999 Viral receptors and vector purification : new approaches for generating clinical-grade reagents. Nature Med. 5:587-588
伍志堅，吳小兵，侯雲德. 1999. 具有AAV載體包裝功能的重組HSV的產生. 科學通報. 44（5）：506-509
吳小兵，董小岩，伍志堅等. 1998. 以粘粒為基礎產生重組單純皰疹病毒HSV1-lacZ的研究. 病毒學報. 14:359-364

『貳』 poolicos超濾和RO直飲機哪一種更適合家用

ro超濾設備,設備超濾機,如何做好水處理設備銷售,只要做好這幾點,做好這幾點一定要學會,

『叄』 怎樣養好小七彩

對於七彩神仙魚的成長速度、魚種、餌料及日常管理都有一定的要求標准；
如1.養水：飼養賞魚有一句名言「養魚先養水」，而何謂「養水」？這對一位欲成為七彩玩家或想升級的玩家都是最基礎，也是最重要的基本要件，「養水」的主要意義是將自來水中的氯氣及其它不必要雜質去除，儲存以備換水之需。關於養水的量，建議是飼養七彩總水量的一倍，如果條件受限，至少也要有1/2的養水量，以備突發狀況使用。
簡易的養水法—在准備好的養水缸（槽），利用強力空氣泵，經由汽泡石產生強力汽泡流，帶動水體均勻滾動，達到氣曝作用，將水中殘留氯及氮、二氧化碳排出，氣曝時間最少要16小時以上，才能有較好養水效果。如果在連續下了數天的雨後想換水，最好是換水時再加些水質穩定劑或再曝氣多個6~12小時是比較能令人安心的。如果養很多缸而無法儲存足夠養水量，不妨在自來水與養水缸之間多加些配備來彌補養水不足的缺憾。
其方法如下：
（一） 加裝前置過濾組：此種過濾組為一般家庭常使用的水質過濾器，不須加裝動力馬達靠水壓即可，拆組串聯都方便，使用時建議至少二支以上，第一支為10Micron濾棉蕊，可濾除水中懸浮雜質，第二支為活性碳蕊，可濾除水中氯氣、重金屬、殘余農葯。如果條件許可可串聯4~6支為一組。效果自然更好。
（二） 活性碳塔：在市面上可在水質處理公司購得，購買時須先考量要處理的水量，再決定購買碳塔大小，另外得注意塔內填充為何種活性碳，因為質地好的活性碳，其處理的總水量與效果有相當大的差異性，好的活性碳能強力吸附氯、重金屬、殘余農葯、對魚有毒害的化學物質、脫色、除臭、處理水量大，反之則否。
（三） 陰陽離子交換樹脂：其最主要功能是軟化水質，一般使用離子交換樹脂多為陽離樹脂，因為其價格較低廉，功能為吸附鈣與鎂，而陰離樹脂為吸附硫酸根、硝酸根、碳酸根及碳酸氫根，但價格較貴，二者同時使用可處理水質硬度、導電度均為0的純軟水。
（四） R. O.逆滲透：對七彩神仙而言，甚至對各種生物而言，用R.O.所產生的純水來飼養，是弊大於利的。R. O.的基本原理是把一個水分子強迫擠過一個有更小孔隙的濾膜，使此水分子得以凈化，雜質排除在外。因為從出水口出來的水是如此純凈，所以一些七彩所需的物質也都不存在於水中，如此，若要再添加微量元素，則似乎又不合經效益，所以並不建議使用。如果有其使用上的必要，建議以純水混合養水達到我們所預定的電度來使用較妥當。例如繁殖缸則調到70μs較好，小魚養成缸則調到200μs較好。以台灣水質條件而言，愈往南所用之設備可以逐項增加，但仍以使用到陰陽離子交換樹脂就很夠用了。有人說「不用養水就把七彩養得很好，為何要養水，增加麻煩」，如果是如此養七彩，建議您再進行養水的動作，相信更能突破瓶頸，而把七彩養的更好，而所做的動作和所得到的收獲相信會使你更有成就感。
是否該采砂底飼養七彩神仙：
如果你屬於觀賞型玩家，建議是採用砂底，雖然是建議栽用砂底，但仍有些重點：
1.不可採用咸性珊瑚砂，而以水草砂或中性砂為最好。
2.顆粒太大或太小皆屬不宜，太大容易使食物卡入縫隙中污染水質；太小則底部循環不良，底床活化效果差。
3.底砂的厚度最好不要低於5公分，這是最基礎的硝化菌床厚度。
4.上部過濾器的吸水管必須接到過濾板，使缸中的水能循環流經底砂，達到物理及生化的雙重過濾效果。5.利用換水時，用虹吸底砂清潔器清潔部份底床。鋪設底砂，除了可以簡化日常管理手續，水質也較穩定，若以純欣賞魚的角度是不錯的方式，而除了欣賞魚之外，如果能加上創意造景，如木化石山水景觀，或以沉木加上硬質莖葉的水草，如榕類水草、鐵皇冠、象耳及皇冠草等景觀設計，更是會令人賞心悅目。 相關器具： 1. 魚缸：這是絕不能省略的，但尺寸該多少呢？如果是種魚缸，則建議以1.5尺×1.5尺×1.5尺（長×寬×高），水量約80公升。中魚或成魚則建議以3尺×1.5尺×1.5尺（長×寬×高）水量約160公升至4尺×1.5尺×1.8尺（長×寬 ×高）水量約240公升為宜，主要以方便管理為考量。 2. 空氣幫浦：
如果你今天所飼養的缸數不多，（一~二缸）則使用單孔或雙孔的幫浦即可，多缸數則可使用高功率氣泵以中央系統供氣，選擇時以強、靜、耐、省電為優先考量。
3. 濾器：內置、外掛、上部或滴流過濾，均有一定的功能，可依自已的需要及預算選擇合的過濾器。
4. 照明：七彩對於燈光的要求並不高，可依自己的喜好選擇適合的燈具與燈管，如為了視覺上享受，建議藍系七彩使用太陽燈管，紅系使用植物燈管（不要太紅的燈管，如西瓜燈管），照度以一尺寬10W的照明即綽綽有餘。

『肆』 超濾是什麼

超濾技術

超濾是以壓力為推動力的膜分離技術之一。以大分子與小分子分離為目的，膜孔徑在20－1000A°之間。中空纖維超濾器（膜）具有單位溶器內充填密度高，佔地面積小等優點。

在超濾過程中，水深液在壓力推動下，流經膜表面，小於膜孔的深劑（水）及小分子溶質透水膜，成為凈化液（濾清液），比膜孔大的溶質及溶質集團被截留，隨水流排出，成為深縮液。超濾過程為動態過濾，分離是在流動狀態下完成的。溶質僅在膜表面有限沉積，超濾速率衰減到一定程度而趨於平衡，且通過清洗可以恢復。

筆者查找到資料表明超濾技術在制葯工業、醫療、食品、生物工程、電子、化工、環保等行業中都有廣泛的應用。

順便推薦本書：
http://book.jqcq.com/proct/367673.html
《超濾技術與應用》
價格: ￥38.00元
出版/發行時間: 2004-03-01
出版社: 化學工業出版社
叢書名: 膜分離技術與應用叢書
作者: 華耀祖
ISBM: 7-5025-5107-7
版次: 1
開本: 1/16
頁數: 357

本書介紹超濾技術的基本知識、基本原理和工業應用。
全書共9章。第1-3章介紹了超濾膜的基本概念、結構、性質、性能表徵及制備方法。第4-8章介紹超濾膜的工業化應用及研究，包括操作控制、過程設計，操作條件的選擇優化及提高超濾效率的途徑等。第9章重點介紹了超濾技術在水處理、化工、輕工、食品、制葯、環保及生物工程等領域的應用。 本書可供化工、石油化工、輕工、環保、醫葯等行業涉及超濾膜的研究開發、使用的研究人員、設計人員、操作人員、管理人員閱讀，也可供大專院校師生參考。

目錄: 第一章 導論
第二章 超濾膜
第三章 膜結構和膜性質的表徵
第四章 超濾硬體
第五章 過程設計
第六章 濃差極化
第七章 污染和清洗
第八章 提高通量的途徑
第九章 應用

出版社-化學工業出版社

『伍』 凈水器真的有用嗎

有用，凈水器的功能就是過濾水中的漂浮物、重金屬、細菌、病毒、余氯、泥沙、鐵銹、微生物等都去除掉，它具備精度高的過濾技術。

(5)超濾js502a的作用擴展閱讀

選購凈水器的基本原則是要除掉水中的可見的污染物，例如鐵銹、膠體物質、異味和異臭、余氯和一些消毒副產物、有機污染物，重金屬等，並能保留水中的礦物質元素。根據不同地區的水質情況，選擇合適的凈水器。

1、不同地區的水質硬度不同，我國北方高硬度水質和南方石灰岩地區，水中鈣、鎂離子含量較高，容易結垢，應選購帶離子交換樹脂濾芯的高級過濾凈水器。

2、水中含氯、異色異味較重，有機物含量較多的城市自來水，可選購活性炭載量較多的家用凈水器。因為活性炭對水中余氯、異色異味有強力吸附作用，對有機物有明顯的去除效果。

3、用於城鄉水質較渾濁的自來水凈化的，應選購有粗濾、精濾雙重功能的家用凈水器。 對於水中污染嚴重，要求徹底濾除水中任何雜質，不需加熱直接飲用的，應選購反滲透純水機。

『陸』 從來沒用過凈飲機，好處有多少呢

一般新的效果較好，使用一段時間後須換濾蕊，否則不但沒凈化作用反而水更臟，最大的好處就是你能吃上潔凈的水，生產廠家一直有生意。

『柒』 沁園CJ-2 GJ新凈水器怎麼樣

產品型號：CJ-2 規格：GJ
包裝尺寸：330×125×450mm
毛重：6.8Kg 凈重：5.8Kg
凈水流量：2.5L/min
適用水源：版市政自來水 適用水壓：0.1-0.5MPa

功能特點
1.時尚權、簡約、黑白對比造型設計。
2.採用超大濾芯設計，凈水流量是一般凈水器的2-3倍。
3.可同時連接多達5台以上管線機，以滿足您的多個房間或辦公室的飲水需求。
4.後置濾芯能有效去除重金屬，改善口感，出水為優質可生飲用水，保留人體所需的微量元素和礦物質。
5.配送精美鵝頸水龍頭，方便直接飲水和廚房日常用水。

濾芯作用
第一級：聚丙烯熔噴濾芯（MG-PP-10）：
可有效去除水中鐵銹、泥沙、膠體、懸浮物等，降低原水濁度；
第二級：顆粒活性炭濾芯（MG-GAC-10）：
具有極高的吸附能力，去除水中有機物、異色、異味、余氯、重金屬等；
第三級：超濾膜濾芯（MG-UF-10）：
進一步截留水中極微小懸浮物、微粒、膠體、細菌、熱源及水中大分子物質；
第四級：後置活性炭濾芯（MG-POC-10）：
更徹底地吸附過濾水中的異色、異味，調整水質口感，確保水質清醇可口。