A. 培養基過濾
WC型微孔濾膜使用說明書
本廠用二醋酸——三醋酸纖維素為基材，以流涎法製成微孔濾膜（簡稱MC濾膜），是現在國內新型的一個品種，它克服了目前常用的硝酸—酸酸混合纖維素微孔濾膜（簡稱混合濾膜）的質脆、易斷裂、有靜電吸引、易燃，遇75%以上酒精易膨脹與溶解及在偏鹼性溶液中易產生有毒的硝酸根和亞硝酸根等的不足之處。本廠MC濾膜在國內上百家葯廠、醫院、科研所等廣泛用於大輸液、針劑及各種溶液精濾，使用效果極佳，澄明度合格率普遍提高。目前該產品暢銷全國，深受用戶歡迎。同時微孔濾膜不但用於制葯業，而且在生物製品、醫學微生物學、化工、電子工業、冶金工業、臨床化驗、釀造、鍾表、航空等工業方面超純水的制備、空氣凈化、醫葯用油、潤滑、燃料用油及科研實驗化驗室濾除細菌和微粒方面等將有越來越廣泛的推廣和應用。
一、 要用途
（1） 醫葯工業：用於水針劑，大輸液及結晶前溶液的微粒和細菌過濾，抗菌素、球蛋白，疫苗血清及組織培養等過濾。
（2） 電子工業：用於半導體器件和集成電路車間的空氣凈化，制備洗滌用的高純水質，對溶劑、顯影劑、光刻膠等進行凈化處理。
（3） 日化工業：用於日用化妝品中含乙醇和油脂類溶液的微粒過濾。
（4） 公共衛生：用於飲水過濾,河塘水質細菌過濾檢查、工作地區粉塵微粒過濾檢驗。
（5） 食品工業：飲料果汁、酒類、油類等的滅菌和懸浮雜質的過濾。
（6） 亦可用於無菌檢查——濾膜過濾法及其它科學研究中的分析測定等。
二、 MC型濾膜性能介紹
（1） 孔徑均勻：用汞壓法測定額定孔徑分布均勻，並用放大電鏡掃描圖象分析，額定孔徑基本一致。
（2） 孔隙率高：每平厘米濾膜中可包含一千萬至一億個額定微孔，以孔隙率測定法測得孔隙率在80%以上。
（3） 濾膜透水率高、濾速快：用透水率測定法測得0.8UM微孔濾膜透水率可達215亳升/平方厘米。分，1.2UM透水率可達311亳升/平方厘米。分。
（4） 強度高有韌性，因MC型濾膜生產過程中的三醋酸纖維素分子乙醯化完全、張力強度高，爆破強度法測定厚度0.10~0.15毫米膜，爆破強度≥3公斤/平方厘米，膜有韌性，即使對折數次也不易斷裂，所以使用壽命長。
（5） 濾膜的各向同性：MC型濾膜為各向同性，不分正反面，對額定孔徑以上的固體微粒能起到絕對截留作用。
（6） 熱穩定性：在120度熱壓滅茵30分鍾，熱穩定性良好。
（7） 化學穩定性：可過濾PH2~11各種葯液，還可過濾儀表油、5%醋酸、6N硫酸、6N氫氧化鉀、無水乙醇、丙三醇、甲醇、正丙醇、導丙醇、偏笨三酸三辛酯、聚乙二醇、各種酒類、飲料、醋等。
（8） MC型濾膜還具有無毒、無媒質遷移等優點。
三、 可供規格
孔徑（微米）：0.22 0.3 0.45 0.65 0.8 1.0 1.2 3~5
直徑（毫米）：Ф25 Ф35 Ф50 Ф100 Ф150 Ф200 Ф300 Ф400 （如需特殊規格可定製）
各種孔徑適用范圍
（1）濾除微粒：應選用0.65um 0.8um 1.2um的濾膜.
（2）濾除細菌：應選用0.45um 0.3um 0.22um的濾膜.
四、 使用方法
（1） 將濾膜於70度左右的蒸餾水中浸泡4小時以上，使用前再用適量新鮮蒸餾水沖洗一二次，然後裝入已洗過的濾器中備用。
（2） 過濾方法：可採用加壓法、真空法或位差液壓法、加壓法的濾速隨著壓力提高而加快，一般不超過3~4公斤/平方厘米，採用抽氣過濾時應防止外界空氣的細菌、微粒污染。利用位差過濾，一般位差應考慮在3~5米以上（約相當於0.5個大氣壓），否則影響濾速。
五、 注意事項
（1） MC型濾膜適宜於PH2~11，對強酸強咸或某些有機溶劑不宜使用。
（2） 本品一般耐溫120度，熱壓30分鍾，耐2~4公斤/平方厘米。
（3） 微孔濾膜只能作為最後過濾階段，濾液必須經過沙濾棒、濾紙、濾球等粗過濾材料，可避免濾膜堵塞。
（4） 操作MC型濾膜時不可觸及尖硬物品，以免引起穿孔現象。在裝濾膜前要嚴格檢查微孔濾膜是否有漏孔，不合格不得使用。
混合纖維素酯微孔濾膜使用說明書
混合纖維素製成的薄膜濾材，經有關單位多次廣泛使用，質量符合標准，其產品表面平滑、質地輕薄、孔隙率高、且微孔結構均勻，因此且有流速快，不易吸附的特點。
一． 用途
本品用於制葯業、生物製品、礦泉飲料、釀造、電子等工業方面的水質、醫葯用油、潤滑用油、燃料用油及科研實驗化驗室等濾除細菌和微粒，一般0。65微米以上可除微粒，0。45以下可濾除細菌。
二． 規格
混合纖維素酯微孔濾膜各種規格如下：
公稱孔徑（直徑微米）0.2 0.3 0.45 0.65 0.8 1.0 1.2
膜片直徑（毫米）25 35 50 60 100 150 200 300 400
（如需特殊規格另行定製）
三． 使用方法
1． 將濾膜平放於清潔盛器內，用70度左右的蒸餾水浸泡，使全部潤濕，數小時後（約4小時以上）傾去水，再用上法浸泡過夜，使用前再用適量溫蒸餾水清洗一次。
2． 將洗清的濾膜（濕）裝入適宜的濾器中，防止周圍漏液，自進液口放進濾液，並在:排氣口排出空氣，即可進行過濾。
四． 注意事項
1． 水膜片適宜於PH2-9的葯液，對強酸鹼或有機溶劑包括酒精等不宜使用。
2． 本品一般能耐溫120度，耐壓3~4公斤/平方厘米。
3． 微孔濾膜只能作為最後階段過濾，濾液必須先經過沙棒或其它濾材預過濾，以免濾膜堵塞。
上述使用方法，僅適用於水劑葯液或其它水溶劑的過濾。
B. 微孔濾膜用於注射劑濾過的濾膜孔徑為0.45~0.8微米.這句話對嗎
不對，微孔濾膜抄目前指襲0.2um-10um孔徑的，但需要注意的是這里指的孔徑不一定是絕對孔徑，由於過濾器材材質本身結構不同，有些材質比如說聚醚碸就可以擁有絕對孔徑，有些材質比如說聚丙烯就只能稱作標稱也徑了。另外，同樣一個過濾器，比方說聚四氟乙烯過濾器用於液體過濾時它的標稱就是0.2，但用於氣體過濾它的標稱就是0.01um了，這主要是由於液體與氣體在過濾介質內透過的方式不一樣。
C. 針筒式濾膜過濾器中 注射器可以重復使用嗎
針筒式濾膜過濾器主要用於色譜分析中流動相及樣品的過濾，對保護色譜柱及輸液泵管系統和進樣閥等不被污染具有良好的作用。廣泛應用於重量分析、微量分析、膠體分離及無菌試驗中。適合水系及各種有機溶劑，耐所有溶劑，低溶解性。具有透氣不透水、氣通量 大、高微粒截留率、耐溫性好，抗強酸、鹼、有機溶劑和氧化劑，耐老化及不粘、不燃性和無毒、生物相容性等特點。
編輯摘要
針筒式濾膜過濾器
1. 用途
本產品主要用於色譜分析中流動相及樣品的過濾，對保護色譜柱及輸液泵管系統和進樣閥等不被污染具有良好的作用。廣泛應用於重量分析、微量分析、膠體分離及無菌試驗中。
2. 類型：水系、有機容媒系。
3. 針器中濾膜材質性能特點
A. PTFE（聚四氟乙烯）
性能：適合水系及各種有機溶劑，耐所有溶劑，低溶解性。具有透氣不透水、氣通量大、高微粒截留率、耐溫性好，抗強酸、鹼、有機溶劑和氧化劑，耐老化及不粘、不燃性和無毒、生物相容性等特點。其相關產品廣泛應用於化工、醫葯、環保、電子、食品、能源等領域。
B. 水系PES(聚醚碸)
性能：本品為德國MEMBRANA公司進口膜，具有較高的化學和熱穩定性，流速快、耐酸鹼能力強（pH范圍1-14）; 具有高機械強度。
C. 有機系尼龍6（國產）
性能：具有良好的親水性，耐酸耐鹼，抗氧化劑。不僅適用於含有酸鹼性的水溶液，更適用於含有有機溶劑，如醇類、烴類、脂類、酚類、酮類等有機溶劑。
D. 有機系尼龍66（英國進口）
性能：優於國產尼龍6性能，本產品適用於絕大多數有機溶劑和水溶液，可用於強酸，70%乙醇、二氯甲烷等有機溶劑。耐高溫，強度好，化學性能穩定。
E. 聚偏氟乙烯 PVDF (美國進口)
性能：聚偏氟乙烯膜具有化學穩定性和惰性,適用於化學腐蝕性強的有機溶劑,強酸和強鹼溶液,高效液相色譜分析中的樣品制備.它具有疏水特性,可濾除空氣和氣體中的水份.聚偏氟乙烯膜被層壓於支撐網上,有很強的強度和可操作性,可以耐130度高溫.
規格
針筒式濾膜過濾器
Ф13 0.45μ
100個/包
★進口PTFE濾膜
針筒式濾膜過濾器
Ф13 0.2/0.45μ（水系）
100個/包
德國PES
針筒式濾膜過濾器
Ф13 0.2/0.45μ（有機系）
100個/包
英國尼龍66
針筒式濾膜過濾器
Ф13 0.2/0.45μ（PVDF）
100個/包
美國PVDF
針筒式濾膜過濾器
Ф25 0.2/0.45μ（水系）
100個/包
德國PES
針筒式濾膜過濾器
Ф25 0.2/0.45μ（有機系）
100個/包
英國尼龍6
針筒式濾膜過濾器
Ф25 0.2/0.45μ（PVDF）
100個/包
美國PVDF
針筒式濾膜過濾器
Ф25 0.8μ（水系）
100個/包
德國PES
D. 高效液相色譜儀器使用方法
一、脫氣
流動相脫氣對於避免HPLC系統出問題，順利得到一個理想的數據是一個很有效的措施。HPLC系統內是不希望有氣泡存在的。HPLC泵在輸送液體時要產生很大的力量，由於氣體的壓縮比與液體相比大的多，因而當氣泡存在時，你將觀察到瞬間的流速降低和系統壓力下降。如果這個氣泡足夠大，液相泵將不能輸送任何溶劑，而且如果壓力低於預先設定的壓力低限，泵將停止工作。有些泵設計可以很好地排除氣泡，而也有一些泵設計當氣泡存在時將停止運轉。
當一個氣泡通過輸液泵時，由於系統壓力大，氣泡通常會溶解在流動相溶液中，隨流動相通過柱子。但是到達檢測器流通池時系統壓力又恢復到了大氣壓，因而氣泡可能在檢測器流通池中又顯現，在色譜圖上會出現不規律的毛刺。為解決這個問題，有些儀器公司設計一個反壓控制器，這樣可以在檢測器出口提供足夠的壓力保持氣泡始終溶解在流動相中直到它們流出檢測器。當然，這個壓力不能超過流通池所能承受的壓力極限，否則可能損壞檢測器。
紫外/可見光（UV/VIS）檢測器的液相色譜圖中的噪音毛刺通常是氣泡進入並通過流通池的徵兆。有些檢測器對空氣的存在也非常敏感，但表現出的徵兆與UV/VIS不同，例如有報導說，當使用熒光（FL）檢測器時，流動相中溶解氧的存在可能會使一些化合物失去熒光性。此外，對於利用待測物質在電極表面發生氧化還原反應引起電流變化而進行檢測的電化學（EC）檢測器，對流動相中的溶解氧的存在也非常靈敏。此外，氣泡的存在有時還會導致保留時間不重現。
所以，必須注意消除流動相中的空氣，並且還應避免空氣由管路（如PTFE管）滲透進流動相中。
如果適當地關注在使用之前脫去流動相中溶解進的空氣，上述這些問題均能避免，或把影響降至最低。常用的脫氣方法有如下幾種：
1、吹氦脫氣法：利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性，在0.1MPa壓力下，以約60 mL/min流速通入流動相儲液容器中10～15min，可以很有效地從流動相中排除溶解的空氣，能排除接近80%的氧氣。採用一個高效分布式噴射流裝置，一體積的氦氣可從流動相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1L氦氣通過1L流動相就可完成排氣這個工作。這種脫氣方法雖然好，但我們國內氦氣價格較高，很少有實驗室採用此方法。
2、 加熱迴流法：此法的脫氣效果較好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率，否則溶劑會丟失，混合流動相的比例會有變化。
3、 抽真空脫氣法：此法可使用真空泵，降壓至0.05～0.07MPa即可除去溶解的氣體。但是由於真空脫氣會使混合溶劑組成發生變化，從而影響到實驗的重現性，因此多用於單溶劑體系的簡單分析。
4、超聲波脫氣法：將欲脫氣的流動相置於超聲波清洗器中，用超聲波震盪10～20min。此法的脫氣效果zui差。
5、 在線脫氣法：現在商品的HPLC儀器，均可配在線脫氣機。在線脫氣使用簡單，低故障，有效。建議購買儀器時一定要購買，有的公司是作為選購件，所以與儀器公司談配置時應與公司確認。
二、過濾
任何顆粒物進入HPLC系統後都會在柱子入口端被篩板擋住，zui後的結果是將柱子堵塞，表現出的特徵是系統壓力增加並使色譜峰變形。因此，要採取各種預防措施，包括操作步驟和商品儀器自身的各種過濾設計，努力防止或減少顆粒物進入HPLC系統中，從而延長儀器和色譜柱的使用壽命，並提高數據的可靠性。在HPLC系統中，顆粒物的主要來源有三個途徑：流動相、被測樣品和儀器系統部件的磨損物。
1、流動相如果流動相均由高效液相色譜級溶劑組成，流動相沒有必要過濾。這是因為高效液相色譜級的有機溶劑，例如乙腈、甲醇等，在製造的工藝過程中都已經過了0.2 µm微孔濾膜過濾。同樣的，無論你是買的HPLC級的水還是在實驗室使用超純水凈化系統制備的水，最後一步也是通過0.2 µm微孔濾膜。
然而，如果有任何一種緩沖液中加入了固體物，例如磷酸鹽，流動相過濾將是必要的一個步驟。雖然緩沖鹽可能是可溶解的、高純的，但它還是可能含有顆粒物質，例如在蓋試劑瓶的塑料內蓋時，塑料瓶蓋子與瓶口邊緣擠壓就會產生塑料顆粒。在這種情況下，添加的一種固體物可能完全溶解了，但是少量雜質顆粒存在於流動相中成為殘渣。
流動相通過0.45 µm微孔濾膜過濾對於從流動相中除去所有顆粒物是一個有效方法。0.2 µm微孔濾膜也可以用，但是它們就這個應用而言並不比0.45µm微孔濾膜更有效，而且它的過濾速度會更慢，特別是當實驗室使用的試劑和水的質量不太好時。建議實驗室在編寫制定他們流動相制備標准操作程序（SOPs）時規定，可以借鑒國際上同類實驗室的規定，即：
流動相制備僅採用HPLC級液體時不需要過濾，反之所有流動相組成在使用前必須過濾。
在連接儲液瓶和泵的輸液管的末端入口採用下沉式過濾器（常見材質有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種）也是很重要的。這個過濾器的規格為≥10 µm的微孔物質，所以它不能取代流動相過濾步驟，但是它能除去系統中的塵土並保證儲液瓶、輸液管使用的可靠性。
2、被測樣品液相系統中的第二個顆粒物來源是被測樣品。一些實驗室在將他們的樣品放置在自動進樣器盤（或手動進樣）以前，所有樣品都先通過一個0.45 µm針筒式過濾器過濾。這是一個有效除去被測樣品中顆粒物的方法。
但是這個過程也有一點需要關註：你使用了針筒式過濾器就不可能100%得到通過過濾器的被測樣品，總會有或多或少的丟失。丟失來自這樣幾方面：過濾器濾膜的吸附、過濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過濾器與針筒連接處的滲漏等。如果有丟失，過濾後液體中被測物的含量或濃度與原基本樣液的含量或濃度還相同嗎？
這個問題一般需要通過實驗確認。確認這步是要增加工作量和費用的。過濾器的使用是一種消耗，每個過濾器的價格從幾元到十幾元。但在做食品中殘留物分析時，由於基質大多比較復雜，所以過濾這步已成為不可或缺的一步。在實際分析工作中，一般檢測每一組樣品會帶一個外標、一個添加回收或是質控樣品，所以，只要zui終檢測時得到的信噪比能滿足檢出限要求，可將這步視為系統誤差而忽略。
3、儀器系統部件的磨損物最後，在HPLC系統中顆粒物的另一個主要來源是輸液泵密封墊和進樣閥旋轉軸的磨損。關於輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。
一種建議認為，在一般實驗室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊，實驗室應基於上述觀點制定定期預防性維護計劃。該觀點認為：與輸液泵密封墊顆粒堵塞柱子而更換新柱子的費用相比，更換密封墊的費用低些。一些輸液泵有玻璃砂芯或篩網，可在流路中濾掉從泵密封墊磨損下來的顆粒物，防止這些顆粒物隨流動相流至柱頭。若有這種裝置應查閱輸液泵操作手冊，查看推薦的這種過濾器清洗或更換的間隔。
另一種建議則認為，原裝密封墊的密封效果最好，更換以後容易引起流動相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。
兩種說法都有其道理，具體如何操作，建議與儀器公司工程師溝通，各公司的儀器還是有些不同的。
自動進樣器旋轉軸的密封隨著使用時間也會磨損，但是在我的經驗中，即便是高負荷的運轉旋轉軸密封墊也可以使用幾年。如果你的自動進樣器系統有計數進樣閥轉動次數的功能，你可以設定一個警鈴當預設閥轉動次數已達到時提醒你。
曾有一種說法，進樣器最多轉動20,000次，這僅僅是進樣10000個；但這似乎不是實驗室涉及的常規樣品分析使用壽命，它們的實際使用壽命會更長。旋轉軸密封磨損後會滲液，比較明顯的特徵是同一樣品多次進樣後，峰面積值差別比較大（RSD>5%）。當然，輸液泵的密封墊和旋轉軸的密封墊磨損將增加更多研磨物在流動相中，加速對這些部件的損傷。
此外，如果你日常運行的流動相有緩沖鹽，如磷酸緩沖鹽，密封墊的磨損會更快。無論顆粒物源於何物，實驗時都要將其除去。推薦在HPLC系統中採用一個0.45或0.5 µm的在線多孔過濾器，接在自動進樣器和柱子之間，即使已使用了保護柱。這個在線過濾器將成為擋板代替柱頭的濾板，而且如採用一個玻璃砂芯濾板，既便宜，更換又方便（幾分鍾就可更換）。若採用在線過濾，HPLC系統檢測每批樣品開始前記錄下壓力值，當壓力上升一定值，例如25%或增加500psi，應該更換玻璃砂芯濾板了，更換以後沖洗幾分鍾系統將恢復到原來的壓力值。
三、沖洗
使HPLC系統良好運行的第三個要點是保持系統的清潔。你需要關注流動相流經該系統的所有地方，對於這些地方經常性的沖洗，將使你的系統保持在「Ready」狀態。
1、流動相儲液瓶首先要經常清洗流動相儲液瓶，或者每做一批新樣品更換一次流動相。一個臟的儲液瓶將會污染注入的流動相。建議儲液瓶中緩沖液使用時間不要超過一周，而有機溶劑使用時間不要超過一個月。
也有人建議儲液瓶中保持用溶劑充滿，直到更換分析方法儲液瓶需更換新溶劑（流動相組成發生變化）時，將舊溶劑倒掉更換新溶劑，這樣勝於將溶劑用完。但這對於分析樣品量少的實驗室而言似乎有些浪費。儀器公司的工程師建議儲水瓶的水要天天換，每周瓶子還應該用異丙醇清洗一次。有的實驗室則在水裡加入0.1～1 mM的甲酸抑制微生物的生長。這些做法看起來有些繁瑣，但卻能起到「磨刀不誤砍柴工」作用。
2、泵接下來要沖洗的是泵。千萬不要一分析完沖幾分鍾後就停泵，特別是當流動相中含有難揮發的緩沖液（如磷酸鹽）時。如果儀器不是連續使用，當流動相蒸發時，難揮發物就會粘在活塞密封墊的表面，難揮發物將形成固形物沉澱。這是泵密封墊磨損和單向閥滲漏的主要原因之一。所以，無論使用長短，在停泵以前一定要用非緩沖液流動相沖洗泵在半個小時以上，要是流動相中有難揮發緩沖鹽則建議沖洗的時間應該更長些。
3、自動進樣器自動進樣器也要按規定清洗。現在的儀器多配有自動進樣器的沖洗液瓶，通常只要注意及時更換、補充沖洗液即可。自動進樣器用的洗滌液也要採用與流動相相同的方式處理，並根據溶劑的有效期和規定，清洗儲液瓶或更換洗滌液。現在的自動進樣器設置、操作都很簡單，如果時間允許（特別是利用夜間運行），每次分析完後設置進1、2針純溶劑（如甲醇、乙腈），也是一個好做法。
4、色譜柱對柱子的污染是隨使用時間而增加。通常表現是：運行走基線時在記錄的色譜圖中基線噪音增加，泵壓也增加。解決這個問題的zui有效方法就是在每一批樣品分析結束後或准備卸下柱子時用大量的流動相沖洗柱子（例如，甲醇、乙腈和水）。用梯度沖洗效果更好，具體的比例要根據柱子的說明書和性質而定。
5、檢測器如果是正常使用，檢測器將依據其性質並按照說明書規定進行洗。例如UV/VIS檢測器或FL檢測器，在對柱子和系統進行沖洗時也就一同對檢測器流通池中污染物進行了清洗。但是蒸發光檢測器或質譜儀則需要按照說明書進行定期清洗。這些檢測器在使用時會有難揮發污染物沉積，如質譜儀離子源的噴針、毛細管、錐孔板、預四極等部件，因而需要定期清洗。而且對聯有這些檢測器的系統沖洗時，最好與這些檢測器斷開，以減少對檢測器的污染。
總之，實驗室日常使用的液相色譜儀要是能認真做好這三項工作——脫氣、過濾和沖洗，你的儀器可以得到良好的預防性維護，使用時就會感到比較順手。當然，在實際操作時遇到的問題並沒有這么簡單，但這三個良好習慣將是正確操作、使用HPLC系統的基礎。答案來自
E. 如何延長色譜柱的使用壽命
色譜柱的使用壽命，除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關系外，最主要的是與日常的委會密切相關。為延長色譜柱的使用壽命，維護您的利益，請仔細閱讀此部分。 色譜柱的使用壽命主要是分局柱效和柱壓兩個指標來衡量，如果一支色譜柱柱效太低或柱壓太高，通常被認為該色譜柱已經結束。因此，延長色譜柱使用壽命的關鍵是，消除引起柱效下降和柱壓升高的因素。以下是色譜柱的日常維護方法： 一、流動相的PH應在使用的范圍內 Welch公司的色譜柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外，其反相色譜柱的PH范圍均為1.5-10，由於填料中存在Si-C和Si-O鍵，流動相超過其PH范圍將會導致硅膠基質流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，使用壽命變短。由於流動相的PH 控制不當而對色譜柱造成的損害，通常很難是色譜柱恢復，因此必須認真對待，嚴格控制流動相的PH值。 二、去除樣品和流動相中的固體顆粒 樣品和流動相中含有的固體顆粒物質會堵塞色譜柱篩板，篩板被堵住不僅會引起柱壓的升高，而且也會引起柱效下降，因為篩板的堵塞會引起液流不均，導致色譜峰型拖尾、變寬，從而使柱效下降。因此，建議使用超純水和色譜純試劑，在分析樣品前對樣品進行針筒過濾，流動相過0.45μm濾膜。 三、使用保護柱或在線過濾器 樣品和流動相經過濾後並不能完全消除固體顆粒物質，因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會產生固體顆粒物質，這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱，堵塞篩板，導致柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質到達色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由於柱壓升高在分析故障中占很大 比例，因此，除對樣品和流動相進行過濾外，建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器。 如果去人色譜柱柱壓升高是由於進樣端篩板被堵引起的，科選擇一下方式進行補救： 1、先在色譜柱前加上保護柱或在線過濾器，然後用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。 2、先在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器，然後反向使用。 四、正確使用緩沖鹽 緩沖鹽通常易溶於水，難溶於有機溶劑，因此緩沖鹽使用不當會使其析出，堵塞填料基質上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結，柱壓上升；同時阻礙了基質上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出後，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。 正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結為一句話：使用前要過濾，使用後要沖洗。具體方法如下： 1、等度條件：使用緩沖鹽前和使用後需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min；使用後去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱過夜。 2、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前，用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min，再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設定應盡量平緩，以避免梯度過程中緩沖鹽析出。 注意：過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同，區別只是過渡流動相不含緩沖鹽。 3、緩沖鹽析出的補救方法： 1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min 2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。 五、防止強保留物質在色譜柱上存留 強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產生額外的保留行為，不僅引起峰型變寬、拖尾，使柱效下降，同時也會引起保留時間的變化，累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由於強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應，需要一定的時間才會體現出來，但對許多葯品特別是復雜樣品而言，很難判斷其是否是含有強保留物質，因此要防止強保留物質的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。清洗方法： 1、未使用緩沖鹽：每天分析完成後，先用上述方法除去緩沖鹽，然後再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。 2、使用過緩沖鹽：分析完成後，先用上述方法除去緩沖鹽，然後在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min 3、補救方法： 水乙氰氯仿（或異丙醇）乙氰水
F. 工作場所空氣中有毒化合物的測定鋇及其化合物具體有哪些
第一法 等離子體發射光譜法
原理
空氣中可溶性鋇化合物用微孔濾膜採集，水洗脫後，用電感耦合等離子體發射光譜儀，在455.4nm 波長處測量發射強度，進行定量。
儀器
1 微孔濾膜，孔徑0.8μm。
2 采樣夾，濾料直徑40mm。
3 小型塑料采樣夾，濾料直徑25mm。
4 空氣采樣器，流量0～3L/min 和0～10L/min。
5 具塞刻度試管，25ml。
6 超聲波清洗器。
7 針筒式過濾器，孔徑0.45μm 微孔濾膜，直徑13mm。
8 容量瓶，10ml。
9 電感耦合等離子體發射光譜儀。
儀器操作條件：
發射波長：455.4nm；
入射功率：1150W；
載氣（氬氣）流量：0.49L/min；
等離子體氣（氬氣）流量：1L/min；
冷卻氣（氬氣）流量：14L/min。
試劑
實驗用水為去離子水。用酸為優級純或高純。
1.硝酸，ρ20＝1.42g/ml。
2.標准溶液：稱取0.1437g 碳酸鋇（含量99.99％）於100ml 燒杯中，加入10ml 硝酸，加熱溶解後，煮沸除去CO2。冷卻後，用水定量轉移入100ml 容量瓶中，並稀釋至刻度。此溶液為1.0mg/ml 標准貯備液。臨用前，用水稀釋成100μg/ml 鋇標准溶液；或用國家認可的標准溶液配製。
樣品的採集、運輸和保存
現場采樣按照GBZ159執行。
1 短時間采樣：在采樣點，將裝好微孔濾膜的采樣夾，以5L/min 流量採集15min 空氣樣品。
2 長時間采樣：在采樣點，將裝好微孔濾膜的小型塑料采樣夾，以1L/min 流量採集2～8h 空氣樣品。
3 個體采樣：將裝好微孔濾膜的小型塑料采樣夾佩戴在監測對象的前胸上部，進氣口盡量接近呼吸帶，以1L/min 流量採集2～8h 空氣樣品。
采樣後，將濾膜的接塵面朝里對折，放入具塞刻度試管中運輸和保存。樣品可長期保存。
分析步驟
1 對照試驗：將裝好微孔濾膜的采樣夾帶至采樣點，除不連接空氣采樣器採集空氣樣品外，其餘操作同樣品，作為樣品的空白對照。
2 樣品處理：向裝有濾膜的具塞刻度試管中加入10ml 水，於超聲波清洗器上超聲洗脫5min。加入1ml 硝酸，用水定容至25.0ml。混勻，供測定。洗脫液渾濁時，先用針筒式過濾器過濾，濾液轉移入另一具塞刻度試管中，再加水定容。若樣品液中鋇濃度超過測定范圍，可用水稀釋後測定，計算時乘以稀釋倍數。
3 標准曲線的繪制：取5隻容量瓶，分別加入0.0、0.010、0.10、1.0和10.0ml 鋇標准溶液，各加入4ml 硝酸，用水定容至100ml。配成0.0、0.010、0.10、1.0、10.0μg /ml 鋇標准系列。參照儀器操作條件，將電感耦合等離子體發射光譜儀調節至最佳測定狀態，測定各標准系列；每個濃度重復測定 3 次，以光譜強度均值對鋇濃度（μg/ml）繪制標准曲線。
4 樣品測定：用測定標准系列的操作條件測定樣品和空白對照洗脫液。測得的樣品光譜強度減去空白對照的光譜強度後，由標准曲線得洗脫液中鋇的濃度(μg/ml)。
第二法 二溴對甲基偶氮甲磺分光光度法
原理
空氣中可溶性鋇化合物用微孔濾膜採集，水洗脫後，在酸性條件下，鋇與二溴對甲基偶氮甲磺反應生成藍色絡合物，在630nm 波長下測量吸光度，進行定量。
儀器
1 微孔濾膜，孔徑0.8μm。
2 采樣夾，濾料直徑40mm。
3 小型塑料采樣夾，濾料直徑25mm。
4 空氣采樣器，流量0～3L/min和0～10L/min。
5 具塞刻度試管，10ml。
6 分光光度計。
試劑
實驗用水為去離子水，用酸為優級純和高純。
1 鹽酸，ρ20＝1.18g/ml。
2 磷酸，ρ20＝1.83g/ml
1 磷酸溶液，3mol/L：205ml磷酸緩緩加入1000ml水中。
2 二溴對甲基偶氮甲磺溶液，0.5g/L。
3 鹽酸溶液，6mol/L：100ml鹽酸加到100ml水中。
4 標准溶液：稱取0.1437g 碳酸鋇（含量99.99％）於100ml 燒杯中，加入10ml 鹽酸溶液，加熱溶解後，煮沸除去CO2，冷卻後，用水定量轉移入100ml 容量瓶中，並稀釋至刻度。此溶液為1.0mg/ml 標准貯備溶液。臨用前，用水稀釋成10.0μg/ml 鋇標准溶液；或用國家認可的標准溶液配製。
樣品的採集、運輸和保存
現場采樣按照GBZ159執行。
1 短時間采樣：在采樣點，將裝好微孔濾膜的采樣夾，以5L/min 流量採集15min 空氣樣品。
2 長時間采樣：在采樣點，將裝好微孔濾膜的小型塑料采樣夾，以1L/min 流量採集2～8h空氣樣品。
3 個體采樣：將裝好微孔濾膜的小型塑料采樣夾佩戴在監測對象的前胸上部，進氣口盡量接近呼吸帶，以1L/min 流量採集2～8h 空氣樣品。 采樣後，將濾膜的接塵面朝里對折，放入具塞刻度試管中運輸和保存。樣品可長期保存。
分析步驟
1 對照試驗：將裝好微孔濾膜的采樣夾帶至采樣點，除不採集空氣樣品外，其餘操作同樣 品，作為樣品的空白對照。
2 樣品處理：向裝有濾膜的具塞刻度試管中，加入10.0ml 水，在旋渦混合器上洗脫2min。取5.0ml 洗脫液於另一具塞刻度試管中，供測定。若洗脫液中鋇濃度超過測定范圍，可用水稀釋後測定，計算時乘以稀釋倍數。
3 標准曲線的繪制：在6 只具塞刻度試管中，分別加入0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml標准溶液，各加水至5.0ml，配成0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mg 鋇標准系列。向各標准管中加入1ml 磷酸溶液，2.0ml 二溴對甲基偶氮甲磺溶液，加水至10.0ml，搖勻。在630nm 波長下測量吸光度，每個濃度重復測定 3 次，以吸光度均值對鋇含量（μg）繪制標准曲線。
4 樣品測定：用測定標准系列的操作條件測定樣品和空白對照洗脫液。測得的樣品吸光度減去空白對照吸光度，由標准曲線得鋇的含量(μg)。
G. 植物體細胞培養基操作
樓主好！！ 實驗八 培養基的制備與滅菌 一、目的要求1. 掌握微生物實驗室常用玻璃器皿的清洗及包紮方法。2. 掌握培養基的配置方法。3. 掌握乾熱滅菌和高壓蒸汽滅菌的操作方法。二、基本原理 正確掌握培養基的配製方法是從事微生物學實驗工作的重要基礎。由於微生物種類及代謝類型的多樣性．因而用於培養微生物的培養基的種類也很多，它們的配方及配製方法雖各有差異。但一般培養基的配製程序卻大致相同．例如器皿的准備，培養基的配製與分裝，棉塞的製作，培養基的滅菌，斜面與平板的製作以及培養基的無菌檢查等基本環節大致相同。三、實驗材料1. 葯品：待配各種培養基的組成成分、瓊脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。2. 儀器及玻璃器皿：天平、高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、三角瓶、培養皿、玻璃漏斗等。3. 其他物品：葯匙、稱量紙、pH試紙、記號筆、棉花等。四、操作步驟（一）玻璃器皿的洗滌和包裝1．玻璃器皿的洗滌玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。將三角瓶、試管、培養皿、量筒等浸入含有洗滌劑的水中．用毛刷刷洗，然後用自來水及蒸餾水沖凈。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡，再用自來水及蒸餾水沖洗。洗刷干凈的玻璃器皿置於烘箱中烘乾後備用。2．滅菌前玻璃器皿的包裝（1） 培養皿的包紮：培養皿由一蓋一底組成一套，可用報紙將幾套培養皿包成一包，或者將幾套培養皿直接置於特製的鐵皮圓筒內，加蓋滅菌。包裝後的培養皿須經滅菌之後才能使用。（2）
圖8-1 移液管的包紮移液管的包紮：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脫脂棉)，它的作用是避免外界及口中雜菌進入管內，並防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應距管口約0.5cm左右，棉花自身長度約1~1.5cm。塞棉花時．可用一外圍拉直的曲別針、將少許棉花塞入管口內。棉花要塞得松緊適宜，吹時以能通氣而又不使棉花滑下為准。先將報紙裁成寬約5cm左右的長紙條，然後將已塞好棉花的移液管尖端放在長條報紙的一端，約成45℃角，折疊紙條包住尖端，用左手握住移液管身，有手將移液管壓緊．在桌面上向前搓轉，以螺旋式包紮起來。上端剩餘紙條，折疊打結，准備滅菌。（二）液體及固體培養基的配製過程1．液體培養基配製1) 稱量：一般可用0.01g天平稱量配製培養基所需的各種葯品，先按培養基配方計算出各成分的用量．然後進行准確稱量。2) 溶解：將稱好的葯品置於一燒杯中，先加入少量水(根據實驗需要可用自來水或蒸餾水)，用玻璃棒攪動，加熱溶解。3) 定容：待全部葯品溶解後，倒入一量筒中，加水至所需體積。如某種葯品用量太少時，可預先配成較濃溶液，然後按比例吸取一定體積溶液，加入至培養基中。4) 調pH：一般用pH試紙測定培養基的pH。用剪刀剪出一小段pH試紙，然後用鑷子夾取此段pH試紙，在培養基中蘸一下，觀看其pH范圍，如培養基偏酸或偏鹼時，可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液進行調節。調節pH時，應逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部過酸或過鹼，破壞培養基中成分。邊加邊攪拌，並不時用pH試紙測試，直至達到所需pH為止。5) 過濾：用濾紙或多層紗布過濾培養基。一般無特殊要求時，此步可省去。2．固體培養基的配製 配製固體培養基時，應將已配好的液體培養基加熱煮沸，再將稱好的瓊脂(1.5~2％)加入，並用玻棒不斷攪拌，以免糊底燒焦。繼續加熱至瓊脂全部融化，最後補足因蒸發而失去水分。（三）培養基的分裝 根據不同需要，可將已配好培養基分裝入試管或三角瓶內，分裝時注意不要使培養基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培養基沾污管口或瓶口時，可用鑷子夾一小塊脫脂棉，擦去管口或瓶口的培養基，並將脫脂棉棄去。1．試管的分裝取一個玻璃漏斗，裝在鐵架上，漏斗下連一根橡皮管，橡皮管下端再與另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一彈簧夾。分裝時，用左手拿住空試管中部，並將漏斗下的玻璃管嘴插入試管內，以右手拇指及食指開放彈簧夾，中指及無名指夾佐玻璃管嘴，使培養基直接流入試管內。裝入試管培養基的量視試管大小及需要而定，若所用試管大小為15×150 mm時，液體培養基可分裝至試管高度1／4左有為宜；如分裝固體或半固體培養基時，在瓊脂完全融化後，應趁熱分裝於試管中。用於製作斜面的固體培養基的分裝量為管高1／5(約3—4mI)，半固體培養基分裝量為管高的1／3為宜。2．三角瓶的分裝圖8-2培養基的分裝 用於振盪培養微生物時，可在250 m1三角瓶中加入50 m1的液體培養基；若用於製作平板培養基用時，可在250 m1三角瓶中加入150ml培養基，然後再加入3g瓊脂粉(按2％計算)，滅菌時瓶中瓊脂粉同時被融化。（四）棉塞的製作及試管、三角瓶的包紮 為了培養好氣性微生物，需提供優良通氣條件，同時為防止雜菌污染，則必須對通入試管或三角瓶內空氣預先進行過濾除菌。通常方法是在試管及三角瓶口加上棉花塞等。1．試管棉塞的製作制棉塞時，應選用大小、厚薄適中的普通棉花一塊，鋪展於左手拇指和食指扣成的團孔上，用右手食指將棉花從中央壓入團孔中製成棉塞．然後直接壓入試管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折疊卷塞法製作棉塞。製作的棉塞應緊貼管壁，不留縫隙，以防外界微生物沿縫隙侵入，棉塞不宜過緊或過松，塞好後以手提棉塞，試管不下落為准。棉塞的2／3在試管內，1／3在試管外。目前也有採用硅膠塞代替棉塞直接蓋在試管口上。將裝好培養基並塞好棉塞或硅膠塞的試管捆成一捆，外麵包上一層牛皮紙。用記號筆註明培養基名稱及配製日期，滅菌待用。
圖8-3 棉塞的製作
圖8-4 正確與不正確的棉塞1.金屬塞 2正確 3、4不正確 2．三角瓶棉塞製作通常在棉塞外包上一層紗布，再塞在瓶口上。有時為了進行液體振盪培養加大通氣量，則可用8層紗布代替棉塞包在瓶口上，目前也有採用硅膠塞直接蓋在瓶口上。在裝好培養基並塞好棉塞或包紮八層紗布或蓋好硅膠塞的三角瓶口上，再包上一層牛皮紙並用線繩捆好，滅菌待用。（五）培養基的滅菌培養基經分裝包紮後，應立即按配製方法規定的滅菌條件進行進行高壓蒸汽滅菌。（六）斜面和平板的製作1．斜面的製作將已滅菌裝有瓊脂培養基的試管，趁熱置於木棒或玻棒上，使成適當斜度，凝固後即成斜面。斜面長度不超過試管長度l／2為宜。如製作半團體或固體深層培養基時，滅菌後則應垂直放置至凝固。2．平板的製作將裝在三角瓶或試管中已滅菌的瓊脂培養基融化後，待冷至50℃左右傾入無菌培養皿中。溫度過高時，皿蓋上的冷凝水太多；溫度低於50℃，培養基易於凝固而無法製作平板。平板的製作應在火旁進行，左手拿培養皿，右手拿三角瓶的底部或試管，左手同時用小指和手掌將棉塞打開，灼燒瓶口，用左手大拇指將培養皿蓋打開一縫，至瓶口正好伸入，傾入10~15mL培養基，迅速蓋好皿蓋，置於桌上，輕輕旋轉平皿，使培養基均勻分布於整個平皿中，冷凝後即成平板。（七）培養基的滅菌檢查滅菌後的培養基，一般需進行無菌檢查。最好取出1~2管(瓶)，置於37℃溫箱中培養1~2天，確定無菌後方可使用。（八）無菌水的制備在每個250mL的三角瓶內裝100mL的蒸餾水並塞上棉塞或硅膠塞。在每支試管內裝4.5mL蒸餾水，塞上棉塞或硅膠塞。再在棉塞上包上一張牛皮紙，高壓蒸汽滅菌。0.1MPa滅菌20~30min。五、實驗內容1. 根據要求清洗各種玻璃器皿，並進行包紮。2. 根據要求配製各種培養基。3. 用電熱鼓風乾燥箱對玻璃器皿進行乾熱滅菌。4. 用高壓蒸汽滅菌鍋對所配各培養基滅菌。六、實驗報告1. 簡述移液管和培養皿的包紮注意事項。2. 簡述配製培養基的基本步驟及注意事項。3. 為什麼微生物實驗室所用的移液管口或滴管口的上端均需塞入一小段棉花，再用報紙包起來，經高壓蒸汽滅菌後才能使用?4. 為什麼微生物實驗室所用的三角瓶口或試管口都要塞上棉塞（硅膠塞）才能使用？5. 配製培養基時為什麼要調節pH？6. 高壓蒸汽滅菌為什麼比乾熱滅菌要求溫度低、時間短？ 附錄 滅菌技術一、目的要求了解消毒和滅菌的原理，並掌握各種滅菌方法的操作步驟。二、實驗材料1. 儀器或其他用具：上述包紮的培養皿、試管、移液管等，電熱鼓風乾燥箱，高壓蒸汽滅菌鍋，微孔濾膜過濾器，0.22μm濾膜，注射器，鑷子，玻璃塗棒。2. 培養基：上述配製的培養基及生理鹽水三、基本原理在微生物實驗中，需要進行純培養，不能有任何雜菌污染，因此必須對所用器材、培養基和工作場所進行滅菌和消毒。滅菌是指殺死一定環境中的所有微生物，包括微生物的營養體、芽孢和孢子。實驗室常用的滅菌方法包括直接灼燒、恆溫乾燥箱滅菌、高壓蒸汽滅菌、間歇滅菌、煮沸滅菌等方法。這些方法的基本原理是通過加熱使微生物體內蛋白質凝固變性，從而達到滅菌的目的。四、操作步驟（一）乾熱滅菌法乾熱滅菌是在電熱乾燥箱內利用高溫乾燥空氣（160℃~170℃）進行滅菌，它是利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而達到滅菌目的。此法適用於玻璃器皿如移液管、試管和培養皿的滅菌。培養基、橡膠製品、塑料製品不能採用乾熱滅菌。細胞內的蛋白質凝固性與其本身的含水量有關，在菌體受熱時，當環境和細胞內含水量越大，則蛋白質凝固就越快，反之含水量越小，凝固越慢。因此，與濕熱滅菌相比，乾熱滅菌所需溫度高（160℃~170℃），時間長（1~2h）。但乾熱滅菌溫度不能超過180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會燒焦，甚至引起燃燒。乾熱滅菌使用的是電熱乾燥箱（乾燥箱）。具體操作步驟如下：1. 裝入待滅菌物品：將包好的待滅菌物品放入電熱乾燥箱內，關好箱門。堆積時要留有空隙，物品不要擺放得太擠，以免妨礙空氣流通，滅菌物品不要接觸電熱乾燥箱內壁的鐵板、溫度探頭，以防包裝紙烤焦起火。2. 升溫：接通電源，打開開關，適當打開電熱乾燥箱頂部的排氣孔，旋動恆溫調節器，使溫度逐步上升。當溫度升至100℃時，關閉排氣孔。在升溫過程中，如果紅燈熄滅，綠燈亮，表示電熱乾燥箱內停止加溫，此時如果還未達到所需的160℃~170℃，則需要轉動溫度調節器使紅燈亮，如此反復調節，直至達到所需的溫度。3. 恆溫：當溫度升到160℃~170℃時，藉助恆溫調節器的自動控制，保持此溫度2h。乾熱滅菌過程中，嚴防恆溫調節的自動控制失靈而造成安全事故。4. 降溫：切斷電源，自然降溫。5. 開箱取物：待電熱乾燥箱內溫度降到60℃以下後，才能打開箱門，取出滅菌物品。同時，應將溫度調節旋鈕調到零點，並打開排氣孔。電熱乾燥箱內溫度未降到60℃以前，切勿自行打開箱門，以免驟然降溫導致玻璃器皿炸裂。（二）高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌是將物品放在密閉的高壓蒸汽滅菌鍋內，在一定的壓力下保持15~30分鍾進行滅菌。此法適用於培養基、無菌水、工作服等物品的滅菌，也可用於玻璃器皿的滅菌。將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋夾套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中排盡，然後關閉排氣閥，繼續加熱，此時由於蒸汽不能溢出，而增加了滅菌鍋內的壓力，從而使沸點增高，獲得高於100℃的溫度，導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。在相同的溫度下，濕熱滅菌的效果好於乾熱滅菌。有三點原因：在濕熱滅菌中菌體吸收水分，蛋白質容易凝固變性，蛋白質隨著含水量的增加，所需凝固溫度降低；濕熱滅菌中蒸汽的穿透力比乾燥空氣大；蒸汽在被滅菌物體表面凝結，釋放出大量的汽化潛熱，能迅速提高滅菌物體表面的溫度，從而增加滅菌效力。實驗室常用的滅菌鍋有非自控手提式高壓蒸汽滅菌鍋和自控式滅菌鍋，其結構和工作原理是相同的。本實驗介紹的是非自控手提式高壓蒸汽滅菌鍋，自控式滅菌鍋的使用可參考廠家說明書。具體操作步驟如下：1. 加水：首先將內層鍋取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面沒過加熱蛇管，與三角擱架相平為宜。切勿忘記檢查水位，加水量過少，滅菌鍋會發生燒干引起炸裂事故。2. 裝料：放回內層鍋，並裝入待滅菌的物品。注意不要裝得太擠，以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果。裝有培養基的容器放置時要防止液體溢出，三角瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包紮的紙而透入棉塞。3. 加蓋：將蓋上與排氣孔相連的排氣軟管插入內層鍋的排氣槽內，擺正鍋蓋，對齊螺口，然後以對稱方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣，並打開排氣閥。4. 排氣：打開電源加熱滅菌鍋，將水煮沸，使鍋內的冷空氣和水蒸汽一起從排氣孔中排出。一般認為當排出的氣流很強並有噓聲時，表明鍋內的空氣已排盡，沸騰後約需5分鍾。5. 升壓：冷空氣完全排盡後，關閉排氣閥，繼續加熱，鍋內壓力開始上升。6. 保壓：當壓力表指針達到所需壓力時，控制電源，開始計時並維持壓力至所需的時間。如本實驗中採用0.1Mpa，121.5℃，20分鍾滅菌。滅菌的主要因素是溫度而不是壓力，因此鍋內的冷空氣必須完全排盡後，才能關閉排氣閥，維持所需壓力。7. 降壓：達到滅菌所需的時間後，切斷電源，讓滅菌鍋溫度自然下降，當壓力表的壓力降至「0」後，方可打開排氣閥，排盡餘下的蒸汽，旋松螺栓，打開鍋蓋，取出滅菌物品，倒掉鍋內剩水。壓力一定要降到「0」後，才能打開排氣閥，開蓋取物。否則就會因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基或試劑由於內外壓力不平衡而沖出容器口，造成瓶口被污染，甚至灼傷操作者。8. 無菌檢查：將已滅菌的培養基放入37℃恆溫培養箱培養24h，檢查無雜菌生長後，即可使用。 （三）過濾除菌有些物質，如抗生素、血清、維生素、糖溶液等採用加熱滅菌法時，容易受熱分解而被破壞，因而要採用過濾除菌法。過濾除菌是通過機械作用濾去液體或氣體中細菌的方法，該方法最大的優點是不破壞溶液中各種物質的化學成分。過濾除菌法除實驗室用於溶液、試劑的除菌外，在微生物工作中使用的凈化工作台也是根據過濾除菌的原理設計的，可根據不同的需要來選用不同的濾器和濾板材料。應用最廣泛的過濾器種類有：1. 微孔濾膜過濾器：是一種新型過濾器，它由上下二個分別具有出口和入口連接裝置的塑料盒組成，出口處可連接針頭，入口處可連接針筒，使用時將濾膜裝入兩塑料盒之間，旋緊盒蓋，當溶液從針筒注入濾器時，各種微生物被阻留在微孔濾膜上面，而液體和小分子物質通過濾膜，從而達到除菌的目的。其濾膜是由硝酸纖維素、醋酸纖維素等製成的薄膜，有孔徑大小不同的多種規格（如0.1μm、0.22μm、0.3μm、0.45μm等），實驗室中用於除菌的微孔濾膜孔徑一般為0.22μm。根據待除菌溶液量的多少，可選用不同大小的濾器。該濾器的優點是吸附性小，即溶液中的物質損耗少，過濾速度快，每張濾膜只使用1次，不用清洗。2. 蔡氏（Seitz）過濾器：是一種金屬製成的過濾漏斗，其過濾部分是一種用石棉纖維和其他填充物壓製成的片狀結構。溶液中的細菌通過石棉纖維的吸附和過濾而被去除，但對溶液中其他物質的吸附性也大，每張纖維板只能使用1次。3. 玻璃過濾器：是一種玻璃製成的過濾漏斗，其過濾部分是由細玻璃粉燒結成的板狀構造。玻璃濾器的規格很多，5號（孔徑2~5μm）和6號（孔徑<2μm）適用於過濾細菌，其優點是吸附量少，但每次使用後要洗凈再用。本實驗採用微孔濾膜過濾器進行過濾除菌，具體操作步驟如下：1. 組裝、滅菌：將0.22�0�8m孔徑的濾膜裝入清洗干凈的塑料濾器中，旋緊壓平，包裝滅菌後待用（0.1Mpa，121.5℃，滅菌20分鍾）。2. 連接：將滅菌濾器的入口在無菌條件下，以無菌操作方式連接於裝有待濾溶液的注射器上，將針頭與出口處連接並插入帶橡皮塞的無菌試管中。3. 壓濾：將注射器中的待濾溶液加壓緩緩擠入過濾到無菌試管中，濾畢，將針頭拔出。壓濾時用力要適當，不可太猛太快，以免細菌被擠壓通過濾膜。4. 無菌檢查：無菌操作吸取除菌濾液0.1mL於肉湯蛋白腖平板上，均勻塗布，置37℃恆溫培養箱培養24小時，檢查是否有雜菌生長。5. 清洗：棄去塑料濾器上的微孔濾膜，將塑料濾器清洗干凈，並換上一張新的微孔濾膜，組裝包紮，再經滅菌後使用。整個過程應嚴格按照無菌操作，以防污染，過濾時應避免各連接處出現滲透現象。 來自網路，本人整理，沒法上圖！
H. 高效液相色譜法，進對照品之前，需要用0.45 μm針筒式過濾器過濾嗎
對照品溶液可不用經微孔濾膜過濾，因為對照品溶液都是用標准對照品經色譜純溶劑或流動相稀釋進行配製的。因此對照品溶液中沒有不溶性的雜質，可省去過濾，直接進樣。