Ⅰ 外泌體是個什麼「鬼」
外泌體
外泌體是指包含了復雜 RNA 和蛋白質的小膜泡 (30-150nm)，現今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體首次於綿羊網織紅細胞中被發現， 1987年Johnstone將其命名為「exosome」。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源於細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合後釋放到胞外基質中 。
所有培養的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在於體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。 有關他們分泌和攝取及其組成、「運載物」和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。 外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用於微創診斷的開發。
當外泌體在1980年首次被發現後，其被認為是細胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源、其物質構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發現外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決於其所來源的細胞類型，其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、腫瘤侵襲等方方面面。有研究表明腫瘤來源的外泌體參與到腫瘤細胞與基底細胞的遺傳信息的交換，從而導致大量新生血管的生成，促進了腫瘤的生長與侵襲。
Ⅱ 離心分離外泌體是差速離心與密度梯度離心一起用嗎
標准方法：Ficoll-泛影鈉（Ficoll-Hypaque）密度梯度及紅細胞裂解法1）取一50ml聚乙烯管，無菌採集專人外周靜脈血屬，加4.4ml3.8%或5%的檸檬酸鹽液定容至40ml。上述全血300gX20min，離心，室溫。2）吸出富含血小板的上清，2500gX15min，制備無血小板血漿（platelet-poorPlasma,PPP）。3）餘下的沉降全血加入5ml6%Dextran(分子量500,000，用無菌生理鹽水配製)，並用生理鹽水（0.9%）調節最終體積至50ml，輕輕、徹底混勻。室溫沉降30min。4）吸出富含白細胞的上層液，275gX6min。5）沉澱的細胞用8mlPPP-生理鹽水（1：4）重懸，並移到15ml離心管中。6）懸液細胞上面加入3mlFicoll-Hypaque（密度1.077），750gX5min，室溫。7）吸取富含中性粒細胞和紅細胞層，用0.155MNH4Cl重懸細胞，使紅細胞裂解，然後中性粒細胞用含0.25%BSAHanks平衡液（HBSA，無鈣）洗2次，最終用HBSA（含鈣）重懸。8）用此法可得95%以上的中性粒細胞。
Ⅲ 如何對exosomes進行成分分析
外泌體（Exosomes）是一種直徑在40～100 nm的圓形單層膜結構，可由機體眾多類型細胞釋放，並廣泛分布於唾液、血漿、乳汁、尿液等體液當中。外泌體可攜帶多種蛋白質、mRNA、miRNA，參與細胞通訊、細胞遷移、血管新生和腫瘤細胞生長等過程。2007 年，Valadi等發現細胞分泌的外泌體中含有生物學活性的mRNA、microRNA，使得研究人員對外泌體的研究熱情激增。
傳統的外泌體分離要涉及超速離心，操作繁瑣、過程冗長，所得到的外泌體純度較低。美國101Bio提供的系列外泌體分離試劑盒，可從細胞培養基或血清中富集大量完整的外泌體，試劑盒具有
ü 方便——無需超速離心；
ü 快捷——不到2個小時即可完成外切體分離純化；
ü 高回收率——是超速離心的5~10倍；
ü 高純度——所得外切體純度高達95% 以上；
ü 僅需2ml的細胞培養基或200ul血清，即可獲得足夠的外切體用於下游研究。
PureExo®Exosomes Isolation Kit for Cell Culture Media
試劑盒組分
Solution A、Solution B、Solution C和PureExo® Columns
操作步驟
1. 無血清培養或血清飢餓48小時的細胞培養液於4℃ 600 g 離心10mins取上清；
2. 在玻璃管中按照比例加入細胞上清液及ABC混合液搖勻；
3. 於4℃孵育1h後出現分層；
4. 棄上層培養基，並將其餘液體轉移至EP管；
5. 1000g離心3mins，出現分層，棄上層培養基及下層無色澄清液體；
6. 上述步驟重復操作一次；
7. 室溫乾燥5~10mins後用1X PBS重懸；
8. 重懸液轉移至純化柱中，2000g離心5mins；
9. 收集流出液即為外切體。
Ⅳ 為什麼運動可以促進外泌體的釋放有類似Ca+的這種機制詳細解答的文獻嗎
長期運動後產生的外泌體，確實能夠保護受損的心肌細胞。
那麼到底是外泌體中的哪種成分在起作用呢？研究人員對外泌體進行了NGS測序，發現游泳訓練組和不運動組的小鼠外泌體miRNA有很大差別，游泳訓練顯著上調了一簇多個miRNA。他們將其分別在心肌細胞缺氧復氧模型中進行功能測試和篩選。
發現多個miRNA，尤其是一種叫miR-342-5p的miRNA能夠明顯抑制細胞凋亡，降低乳酸脫氫酶的釋放，並提高細胞的存活率。檢測學員志願者的外泌體後，也發現賽艇訓練組外泌體的miR-342-5p含量較對照組也有明顯升高。
那麼，這個miR-342-5p到底是怎麼產生的呢？研究人員檢測了運動前後多種組織miR-342-5p的表達水平，發現運動後血管組織miR-342-5p增加最明顯。之前有研究發現，運動會增強血管與血流之間的剪切力，誘導血管內皮細胞產生細胞因子，對人體有益[8]。他們在體外培養條件下對動脈血管內皮細胞通過改變血流剪切力，發現血流加速所致的剪切力增加就能促進這些細胞上調miR-342-5p。
血流變化可以改變剪切力
那麼miR-342-5p是通過什麼方式保護心臟的呢？研究人員對miR-342-5p起作用的機制進行了深入研究，證實了外泌體miR-342-5p可被心肌細胞攝取；發現其能抑制Caspase 9 和 Jnk2蛋白的水平，並維持Akt蛋白的磷酸化[9,10]。這些作用最終會抑制細胞凋亡，促進心肌細胞生存，從而發揮降低心肌梗死的作用。
運動保護心臟的作用機制
這項研究揭示了長期運動保護心臟的一個新機制，首次發現了運動通過血管內皮細胞釋放的循環外泌體miRNA在其中的作用，對缺血性心臟病的預防和治療具有潛在的臨床應用價值。
而對於大多數現在心臟還健康的人，不用奇點糕多說了吧？既然心很容易受傷，那就多愛護它，多運動，讓它更強大吧~
有氧運動的第一作用，就是增強心肺功能。