⑴ 凝膠層析法為什麼能測出蛋白質的分子量原理是什麼
原理簡單說就是分子量不同通過凝膠柱的速度也不同
凝膠是一種具有多孔,網狀結構的分子篩.利用這種凝膠分子篩對大小,形狀不同的分子進行層析分離,稱凝膠層析 .
凝膠層析的應用范圍:
凝膠層析法適用於分離和提純蛋白質,酶,多肽,激素,多糖,核酸類等物質.分子大小彼此相差25%的樣品,只要通過單一凝膠床就可以完全將它們分開.利用凝膠的分子篩特性,可對這些物質的溶液進行脫鹽,濃縮,去熱源和脫色.
凝膠層析的優點
凝膠層析具有設備簡單,操作方便,分離迅速及不影響分子生物學活性等優點.目前已被廣泛應用於各種生化產品的分離和純化.
-,凝膠層析的基本原理
凝膠層析的原理
l 分子大小不同混合物上柱; 2 洗脫開始,小分子擴散進人凝膠顆粒內,大分子被排阻於顆粒之外;3 大小分子分開: 4大分子行程較短,已洗脫出層析柱,小分子尚在進行中
凝膠是一類多孔性高分子聚合物,每個顆粒猶如一個篩子.當樣品溶液通過凝膠柱時,相對分子質量較大的物質由於直徑大於凝膠網孔而只能沿著凝膠顆粒間的孔隙,隨著溶劑流動,因此流程較短,向前移動速度快而首先流出層析柱;反之,相對分子質量較小的物質由於直徑小於凝膠網孔,可自由地進出凝膠顆粒的網孔,在向下移動過程中,它們從凝膠內擴散到膠粒孔隙後再進入另一凝膠顆粒,如此不斷地進入與逸出,使流量增長,移動速率慢而最後流出層析柱.而中等大小的分子,它們也能在凝膠顆粒內外分布,部分進入顆粒,從而在大分子物質與小分子物質之間被洗脫.這樣,經過層析柱,使混合物中的各物質按其分子大小不同而被分離.
⑵ 為什麼用凝膠過濾層析法可測定蛋白質相對分子質量
凝膠過濾層析，即分子篩
⑶ 一種蛋白質用凝膠過濾法和sds法測得的分子量不一樣哪個錯了
蛋白質的形狀影響凝膠過濾時候的行為,分子形狀長的蛋白質在凝膠過濾的時候有類似於分子較大的蛋白的行為,用SDS-PAGE測定的蛋白質分子量應該比較准確,因為變形後的蛋白質遷移速度只取決於蛋白質分子大小
⑷ 用SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳測定蛋白質的分子量，為什麼有時和凝膠層析法所得結果有所不同
兩種方法原理不同，有差異是正常的。如果差距較大，要仔細分析。
一般凝膠層析是非變性的，SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳是變性的，二硫鍵也被還原，所以是亞基（肽鏈）分子量。
凝膠層析與分子形狀有關，一般marker都是球狀蛋白，所以測球狀蛋白分子量較准。SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳與分子形狀無關。
有些蛋白性質特殊，不適於用SDS-凝膠電泳法測定。比如結構特殊的，如膠原；帶很多電荷的，如組蛋白；帶有較大輔基的，如糖蛋白。
⑸ 凝膠過濾法和SDS法哪個更加准確測定蛋白質分子量
蛋白質的形狀影響凝膠過濾時候的行為，分子形狀長的蛋白質在凝膠過濾的時候有類似於分子較大的蛋白的行為，用SDS-PAGE測定的蛋白質分子量應該比較准確，因為變形後的蛋白質遷移速度只取決於蛋白質分子大小。
⑹ SDS凝膠電泳測定蛋白質相對分子質量是根據
您好！這個問題我剛回答過一次：）
sds
凝膠電泳法測定的分子量是相對分子量，而且如果分子量如果太小或者＞200kd，一般都不會用page來測定。
①
sds-page測定分子量需要蛋白成條帶，然後與標準分子量marker條帶位置進行比較來確定分子量大小。
②
sds-page分離范圍一般在15-200kd，超過這個范圍，蛋白條帶都擠在一起了，無法進行准確比較。
③
一些小分子量的蛋白倒是可以通過特殊的sd-page來測定，目前最小的能到1kd。
④
sds-page測出的分子量是蛋白亞基分子量，如果一個蛋白由2個以上亞基組成，那麼必須將兩個亞基分子量相加，或者通過其他方法如凝膠過濾測定。
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⑺ 凝膠色譜法原理為什麼是根據蛋白質相對分子質量大小而不是分子大小。有什麼區別
凝膠滲透色譜(Gel Permeation Chromatography、GPC))
1964年，由J.C.Moore首先研究成功。不僅可用於小分子物質的分離和鑒定，而且可以用來分析化學性質相同分子體積不同的高分子同系物。(聚合物在分離柱上按分子流體力學體積大小被分離開）
1.基本原理
1.1分離原理
讓被測量的高聚物溶液通過一根內裝不同孔徑的色譜柱，柱中可供分子通行的路徑有粒子間的間隙（較大）和粒子內的通孔（較小）。當聚合物溶液流經色譜柱時，較大的分子被排除在粒子的小孔之外，只能從粒子間的間隙通過，速率較快；而較小的分子可以進入粒子中的小孔，通過的速率要慢得多。經過一定長度的色譜柱，分子根據相對分子質量被分開，相對分子質量大的在前面（即淋洗時間短），相對分子質量小的在後面（即淋洗時間長）。自試樣進柱到被淋洗出來，所接受到的淋出液總體積稱為該試樣的淋出體積。 當儀器和實驗條件確定後，溶質的淋出體積與其分子量有關，分子量愈大，其淋出體積愈小。
（1） 體積排除
（2）限性擴散
（3） 流動分離
1.2校正原理
用已知相對分子質量的單分散標准聚合物預先做一條淋洗體積或淋洗時間和相對分子質量對應關系曲線，該線稱為「校正曲線」。聚合物中幾乎找不到單分散的標准樣，一般用窄分布的試樣代替。在相同的測試條件下，做一系列的GPC標准譜圖，對應不同相對分子質量樣品的保留時間，以lgM對t作圖，所得曲線即為「校正曲線」。通過校正曲線，就能從GPC譜圖上計算各種所需相對分子質量與相對分子質量分布的信息。聚合物中能夠製得標准樣的聚合物種類並不多，沒有標准樣的聚合物就不可能有校正曲線，使用GPC方法也不可能得到聚合物的相對分子質量和相對分子質量分布。對於這種可以使用普適校正原理。
1.3普適校正原理
由於GPC對聚合物的分離是基於分子流體力學體積，即對於相同的分子流體力學體積，在同一個保留時間流出，即流體力學體積相同。
兩種柔性鏈的流體力學體積相同：
[η]1M1=[η]2M2
k1M1α1+1=k1M2α2+1
兩邊取對數：lgk1+(α1+1)lgM1=lgk2+(α2+1)lgM2
即如果已知標准樣和被測高聚物的k、α值，就可以由已知相對分子質量的標准樣品M1標定待測樣品的相對分子質量M2。
[編輯本段]2.實驗部分
直接法：在測定淋出液濃度的同時測定其粘度或光散射，從而求出其分子量。
間接法：用一組分子量不等的、單分散的試樣為標准樣品，分別測定它們的淋出體積和分子量，則可確定二者之間的關系。
2.1.儀器：
GPC儀的組成：泵系統、（自動）進樣系統、凝膠色譜柱、檢測系統和數據採集與處理系統。
2.1.1.泵系統：包括一個溶劑儲存器、一套脫氣裝置和一個高壓泵。它的工作是使流動相（溶劑）以恆定的流速流入色譜柱。泵的工作狀況好壞直接影響著最終數據的准確性。越是精密的儀器，要求泵的工作狀態越穩定。要求流量的誤差應該低於0.01mL/min。
2.1.2.色譜柱：GPC儀分離的核心部件。是在一根不銹鋼空心細管中加入孔徑不同的微粒作為填料。每根色譜柱都有一定的相對分子質量分離范圍和滲透極限，色譜柱有使用的上限和下限。色譜柱的使用上限是當聚合物最小的分子的尺寸比色譜柱中最大的凝膠的尺寸還大，這時高聚物進入不了凝膠顆粒孔徑，全部從凝膠顆粒外部流過，這就沒有達到分離不同相對分子質量的高聚物的目的。而且還有堵塞凝膠孔的可能，影響色譜柱的分離效果，降低其使用壽命。色譜柱的使用下限就是當聚合物中最大尺寸的分子鏈比凝膠孔的最小孔徑還要小，這時也沒有達到分離不同相對分子質量的目的。所以在使用凝膠色譜儀測定相對分子質量時，必須首先選擇好與聚合物相對分子質量范圍相配的色譜柱。
2.1.3.填料（根據所使用的溶劑選擇填料，對填料最基本的要求是填料不能被溶劑溶解）：交聯聚苯乙烯凝膠（適用於有機溶劑，可耐高溫）、交聯聚乙酸乙烯酯凝膠（最高100℃，適用於乙醇、丙酮一類極性溶劑）多孔硅球（適用於水和有機溶劑）、多孔玻璃、多孔氧化鋁（適用於水和有機溶劑)
2.1.4.柱子：玻璃、不銹鋼
2.1.5.檢測系統：通用型檢測器：適用於所有高聚物和有機化合物的檢測。有示差折光儀檢測器、紫外吸收檢測器、粘度檢測器。
2.1.6.示差折光儀檢測器：溶劑的折光指數與被測樣品的折光指數有盡可能大的區別。
2.1.7.紫外吸收檢測器：在溶質的特徵吸波長附近溶劑沒有強烈的吸收。
2.1.8.選擇型檢測器：適用於對該檢測器有特殊響應的高聚物和有機化合物。有紫外、紅外、熒光、電導檢測器等。
2.2.操作：
2.2.1.溶劑的選擇： 能溶解多種聚合物；不能腐蝕儀器部件；與檢測器相匹配。
2.2.2.把激光光散射與凝膠色譜儀聯用，在得到濃度譜圖的同時，還可得到散射光強對淋出體積的譜圖，從而計算出分子量分布曲線和整個試樣的各種平均分子量
2.2.3.激光光散射實驗中必須對樣品嚴格除塵，溶液中的灰塵會產生強烈的光散射，嚴重干擾聚合物溶液光散射的測量。溶液除塵是光散射成敗的關鍵。首先是溶劑除塵，配置測試樣品的溶劑應進行精餾，並經過0.2μm超濾膜過濾後方可使用。配好的溶液也要用0.2μm的超濾膜過濾。另外，測試中所用的器械，如：注射器等，使用前要用洗液浸泡，清水強力沖洗。
⑻ 凝膠過濾法分離蛋白質吸收峰與物質的分子量的關系
選 A凝膠過濾，與帶點多少沒關系！因為凝膠過濾是根絕分子大小來工作的！分子量小的，會經過凝膠珠上的孔隙，路程較長，後洗脫下來；分子量大的，會直接經過凝膠顆粒之間的縫隙，路程較短，會先先脫下來！
⑼ 是否所有的蛋白質都能用SDS—凝膠電泳法測定其相對分子質量為什麼
您好！這個問題我剛回答過一次：）
SDS 凝膠電泳法測定的分子量是相對分子量，而且如果分子量如果太小或者＞200Kd，一般都不會用PAGE來測定。
① SDS-PAGE測定分子量需要蛋白成條帶，然後與標準分子量Marker條帶位置進行比較來確定分子量大小。
② SDS-PAGE分離范圍一般在15-200Kd，超過這個范圍，蛋白條帶都擠在一起了，無法進行准確比較。
③ 一些小分子量的蛋白倒是可以通過特殊的SD-PAGE來測定，目前最小的能到1kd。
④ SDS-PAGE測出的分子量是蛋白亞基分子量，如果一個蛋白由2個以上亞基組成，那麼必須將兩個亞基分子量相加，或者通過其他方法如凝膠過濾測定。
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⑽ 蛋白質用凝膠過濾法和SDS配體膠測定其分子量大小為何不同那種更精確
蛋白質的形狀影響凝膠過濾時候的行為，分子形狀長的蛋白質在凝膠過濾的時候有類似於分子較大的蛋白的行為，用SDS-PAGE測定的蛋白質分子量應該比較准確，因為變形後的蛋白質遷移速度只取決於蛋白質分子大小