⑴ 離子交換柱的工作原理是什麼
離子復交換柱的原理制
採用離子交換方法,可以把水中呈離子態的陽、陰離子去除,以氯化鈉(NaCl)代表水中無機鹽類,水質除鹽的基本反應可以用下列方程式表達:
1、陽離子交換樹脂:R—H+Na+→R-Na+H+
2、陰離子交換樹脂:R—OH+CL-→R-CL+OH+
陽、陰離子交換樹脂總的反應式即可寫成:
RH+ROH+NaCL—RNa+RCL+H2O
由此可看出,水中的Nacl已分別被樹脂上的H+和OH-所取代,而反應生成物只有H2O,故達到了去除水中鹽的作用。
3、混合離子交換柱(混床):混床是裝陽、陰樹脂按一定比例(一般為1:2,以便陽、陰樹脂同時達到交換終點而同時再生)裝入混合柱而成,實際上它組合成了水中的H+和OH-立即生成電離度很小的水分子(H2O),幾乎不存在陽床或陰床交換時產生的逆交換現象,故可以使交換反應進行得十分徹底,因而混合床的出水水質優於陽、陰床串聯組成的復床所能達到的水質,能製取純度相當高的成品水。
⑵ 柱層析原理及影響因素
柱層析總的原理,就是讓目標蛋白結合在層析填料(樹脂)上,然後通過特定的緩沖液將其洗脫下來,以達到純化的效果。具體幾種分類稍微歸納了下給你參考
免疫親和層析
原理:親和色譜分離蛋白以一個蛋白與特異性配基配對到色譜基質上,且蛋白質與配基間具有可逆的相互作用作為基礎。目標蛋白與配基之間的生物學相互作用,可以是由於靜電學的相互作用或是分子間疏水的相互作用,也可以是范德華力或氫鍵結合力產生的。
影響因素:主要是親和標簽的完整程度,緩沖液的組分。
離子交換層析
原理:離子交換對分子的分離是基於它們表面凈電荷的差異。以蛋白質為例,它由許多包含弱酸弱鹼集團的不同氨基酸組成。它們表面的凈電荷會隨著周圍環境的pH值改變而改變。對某一特定蛋白質來說,其表面凈電荷與pH之間的相對關系是獨特的,而離子交換層析正是利用了這一特點來完成對不同蛋白質的分離。
影響因素:主要是緩沖液的pH值,鹽濃度。
疏水相互作用層析
原理:疏水層析根據蛋白表面疏水性的不同,利用蛋白質與疏水層析介質疏表面可逆的相互作用來分離蛋白。純水狀態下,任何疏水作用都太弱而不能導致配基與蛋白之間的相互作用。某些鹽卻可以增強疏水相互作用。高濃度的鹽會增強相互作用,而低濃度的鹽會降低相互作用。但是目前尚無被廣泛接受的關於疏水相互作用層析機制的理論。
影響因素:環境溫度,鹽濃度。
凝膠過濾層析
凝膠過濾根據分子通過凝膠填料大小不同對其進行分離。以蛋白質為例,因為分子不與凝膠填料結合,故緩沖液成分不會直接影響解析度。
影響因素:蛋白質分子量。
⑶ 利用吸附柱純化DNA的原理是什麼
看了樓上一些回答,也是學生命類的吧?
專一性的吸附柱用的是和基因探針一樣的原理,人工合成待純化的DNA的一端一定長度序列的反義鏈,並加到吸附柱上,當混合物經過時,需要分離的DNA分子與柱上的探針結合,被留下,其餘的通過。
這樣的離心吸附柱可以高效、專一地與DNA片段結合,同時最大限度除去蛋白質、離子及引物小片段等雜質。
這樣將寡核苷酸片斷結合到柱上,可回收50 bp-50 kb DNA片段。適用於 DNA溶液中只有單一DNA片段或溶液中所有DNA片段都需同時回收的情況。
非專一性的和樓上說的差不多。
純化柱是表面偶聯有二乙胺乙醇(DEAE)的親水性樹脂.DNA純化原理為DNA磷酸基帶負電荷, DEAE帶正電荷, DNA可以在0.1~1.4 mol.L-1的相當大的鹽濃度范圍內仍與DEAE 結合, 當低鹽QBT溶液平衡純化柱後, 即可加樣, 用中等鹽濃度的QC洗去RNA和其他雜質, 最後用高鹽濃度的QF將DNA洗脫下來。
由於傳統的離子交換范圍僅在0.4 mol.L-1以內, 使雜質和DNA 洗脫范圍十分接近, 難於達到滿意的純化效果. 但該柱一經使用, 6h後純化效力即開始下降。估計可能得原因有二, 一是樹脂表面親水性強, 極易吸附蛋白, 糖類, RNA等水容物, 從而使原裝柱經幾次循環後吸附過多雜質, 影響了DEAE吸附DNA的能力, 同時雜質阻塞樹脂間隙, 使液體流過柱子的速度明顯變慢, 二是DEAE與樹脂的偶聯並不十分穩定, 在一經使用後的液體環境中,容易逐步解離.
⑷ 柱狀法提取DNA原理是什麼
試劑盒的膠回收柱採用特殊硅基質材料在一定的高鹽緩沖系統下高效、專一地吸附DNA、RNA的原理(在高鹽、低pH值情況下吸附DNA;低鹽、高pH值情況下釋放DNA。離心柱上含有Resin合成樹脂,具有吸附DNA的功能),配備設計獨特的離心吸附柱式結構,使用常規台式高速離心機,在幾分鍾之內即可以高效回收核酸片段。
圖2PH值對硅膠吸附DNA的影響
⑸ 離子交換層析的原理是什麼 已解決
離子交換層析法是從復雜的混合物中,分離性質相似大分子的方法之一,依據的原理是物內質的酸鹼性容,極性,所帶陰陽離子的不同。電荷不同的物質,對管柱上的離子交換劑有不同的親和力,改變沖洗液的離子強度和pH值,物質就能依次從層析柱中分離出來。
層析開始前,功能基團與反離子穩定結合,就與反離子發生可逆交換,與層析劑結合被固定下來。因為鹽離子可以與底物競爭功能基團,鹽濃度越高樣品與層析劑結合越不緊密,易被洗脫下來。不同物質與層析劑結合程度不同,洗脫下來的時間不同,因此得以分開。
(5)純化柱去離子原理擴展閱讀
離子交換劑的選擇首重保持欲分離物質的生物活性,以及在不同pH值環境中,此物質所帶的電荷和電性強弱,陰陽離子交換劑的選擇若被分離物質帶正電荷,這些鹼性蛋白質,它們在酸性溶液中較穩定,親和力強,故採用陽離子交換劑。
在鹼性溶液中較穩定,則使用陰離子交換劑,如果欲分離的物質是兩性離子,一般考慮在它穩定的pH范圍帶有何種電荷,作為交換劑的選擇。離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生,若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱後再生,也可用乙醇洗滌。
⑹ 離子交換柱的工作原理
離子交換柱的工作原理:
採用離子交換方法,可以把水中呈離子態的陽、陰離子去除。
以氯化鈉(NaCl)代表水中無機鹽類,水質除鹽的基本反應可以用下列方程式表達:
1、陽離子交換樹脂:R—H+Na+→R-Na+H+
2、陰離子交換樹脂:R—OH+CL-→R-CL+OH+
陽、陰離子交換樹脂總的反應式即可寫成:
RH+ROH+NaCL—RNa+RCL+H2O
由此可看出,水中的Nacl已分別被樹脂上的H+和OH-所取代,而反應生成物只有H2O,故達到了去除水中鹽的作用。
離子交換柱(ion exchange column)是用來進行離子交換反應的柱狀壓力容器。充填有離子交換樹脂的細長管柱。可由玻璃、不銹鋼、有機玻璃等不被所用的流動相腐蝕的材料製成。離子交換柱(混床)的分類:混床按再生方式分可分為體內再生混床、體外再生混床、陰樹脂外移再生混床三種。
離子交換柱的分類:
混床按再生方式分可分為體內再生混床、體外再生混床、陰樹脂外移再生混床三種。
1、體外再生混床適合小流量、對環保有嚴格要求的企業。但由於體外再生式混床配套設備多,操作復雜,現在已很少使用。
2、體內再生混床和陰樹脂外移再生混床適合大流量,有專門的水處理操作人員及廢水處理的場合。體內再生混床在運行及整個再生過程均在混床內進行,再生時樹脂不移出設備以外,且陽、陰樹脂同時再生,因此所需附屬設備少,操作簡便。
3、陰樹脂外移再生混床:陰樹脂外移再生式混合床及其配套的陰樹脂再生柱基本構造與小型逆流再生固定床大致相同,陰樹脂再生柱厚度較混合床小,所需的膨脹高度為樹脂層高度的50%~60%,故再生柱可較低,但一般為統一起見做成與混合床相同。
⑺ 蛋白純化中用到的脫鹽柱的種類及原理是什麼
蛋白質分離純化常用方法有:
1、沉澱
2、電泳:蛋白質在高於或低於其等電點的溶液中是帶電的,在電場中能向電場的正極或負極移動。根據支撐物不同,有薄膜電泳、凝膠電泳等。
3、透析:利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。
4、層析: a離子交換層析,利用蛋白質的兩性游離。
蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細純化階段二個階段,一般蛋白純化採用的方法為樹脂法。粗分離階段主要將目的蛋白和其它細胞成分如DNA、RNA等分開,由於此時樣本體積大、成分雜,要求所用的樹脂高容量、高流速、顆粒大。
(7)純化柱去離子原理擴展閱讀:
蛋白純化要利用不同蛋白間內在的相似性與差異,利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質的污染,而利用各蛋白質的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學活性都會有差異,利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來得到重組蛋白。
如果所要的蛋白主要集中在某一細胞組分,如細胞核、染色體、核糖體或可溶性細胞質等,則可利用差速離心的方法將它們分開,收集該細胞組分作為下步純化的材料。如果碰上所要蛋白是與細胞膜或膜質細胞器結合的,則必須利用超聲波或去污劑使膜結構解聚,然後用適當介質提取。
⑻ 純化中q柱純化屬於什麼類型的純化
Q柱屬於陰離子交換純化
季銨(Q)基團通過化學穩定的醚鍵同高度交聯的6%的瓊脂糖連接,形成了陰離子交換層析柱Q。
⑼ DEAE柱層析純化多糖原理
DAEA:2-二乙氨基乙醇
在柱層析中DAEA是作為洗脫劑的。由於糖類在水溶液中對有機物吸附能力很強,在有機溶劑中則較弱。所以用水和乙醇的溶液進行梯度洗脫。
⑽ 急需蛋白質分離純化的NI柱、離子柱、親和柱、分子篩的原理。。AKTA操作程序
你也太強大了,這個東西不是想要就能給你的。