1. 超濾離心管是什麼
離心超濾管是一種採用優化過濾結構的設計方式,減少濃差極化,降低了膜易污染堵塞機率,加快了離心速度,縮短了離心所需的時間;超濾離心管還可用的膜表面面積提供快速樣品處理。
2. 求助:第一次使用超濾離心管應該怎麼處理
可能不同廠家的產品保存運輸條件不一樣。
如果有甘油等保護劑,那就一定要洗干凈再加樣品。版權
乾的超濾管也要先潤濕再用,否則可能不能完全利用膜面積。
最好,用樣品buffer潤洗下再加樣,最大程度保證蛋白活性。尤其是用過後保存在NaOH或乙醇中後。
一般還是離心機甩一下好,使膜充分浸潤。
降低吸附的辦法有:
1,蛋白濃度不要過低
2,盡量選用纖維素的低吸附超濾管
3,用前可以用Tween 80等去垢劑潤洗(不影響蛋白活性的前提下)
4,加入保護蛋白,如BSA(不影響蛋白後續使用的前提下)
用完保存在20% EtOH中,4C保存,防止長菌,依不同樣品可以重復使用不同的次數。
3. 為什麼超濾離心管那麼貴,離心管與超濾離心管的區別
離心管就是抄一個簡單的可以承受高轉速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉澱。
離心超濾管會有一個類似於內管和外管的兩個部分,內管中是帶有一定分子量的膜,當高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內管中),就是超濾的原理。。。。常用於濃縮樣品。
4. γ射線消毒離心管裡面去RNA、去DNA酶這些物質能去除干凈嗎
γ射線?哇塞,這個容易輻射變性吧。我都是用DEPC水泡,雖然也致癌的說……
5. DNA抽提方法與步驟
高中:
原理:
1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含雜質較少的DNA。
3.DNA在沸水浴時被二苯胺染成藍色。
方法步驟:
1.提取細胞核物質:順時針方向攪拌,稍快,稍重。 5 min
2.溶解DNA:
3.析出含DNA的黏稠物:蒸餾水300mL,逆時針方向攪拌,緩慢
4.過濾:取黏稠物
5.再溶解:順時針方向攪拌,較慢。3 min
6.過濾:取濾液。
7.提取出含雜質較少的DNA,逆時針方向攪拌,稍慢。5 min
8.DNA的鑒定:沸水浴5min
大學
DNA提取分為三個基本步驟,每個步驟的具體方法可根據樣品種類、影響提取的物質以及後續步驟的不同而有區別。
利用研磨或者超聲破碎細胞,並通過加入去污劑以除掉膜脂。
加入蛋白酶,醋酸鹽沉澱,或者酚/氯仿抽提,以除掉細胞內的蛋白,如與DNA結合的組蛋白。
將DNA在冷乙醇或異丙醇中沉澱,因為DNA在醇中不可溶而黏在一起,這一步也能除掉鹽分。
另外,目前也有利用吸附過柱的方法提取DNA的商業化試劑盒。
2.細胞的破碎
細菌有堅硬的細胞壁,首先要破碎經胞。方法有三種;①機械方法:超聲波處理法、研磨法、勻漿法;②化學試劑法:用SDS處理細胞;③酶解法:加入溶菌酶或蝸牛酶,都可使細胞壁破碎。
3.DNA提取的幾種方法
(1).濃鹽法
A. 利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖盪,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間,而DNA位於上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉澱出來.
B. 也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較,後種方法使核酸降解可能少一些.
C.以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助於蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,並稱SSC溶液,提取DNA. (2).陰離子去污劑法; 用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由於細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA
(3).苯酚抽提法:苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由於蛋白與DNA 聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶於酚相,而DNA溶於水相。離心分層後取出水層,多次重復操作,再合並含DNA 的水相,利用核酸不溶於醇的性質,用乙醇沉澱DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質,可用玻璃漫漫繞成一團,取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態
(4).水抽提法:利用核酸溶解於水的性質,將組織細胞破碎後,用低鹽溶液除去RNA,然後將沉澱溶於水中,使DNA充分溶解於水中,離心後收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然後分別用66% ,80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最後在空氣中乾燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.
6. 除nacl選擇多大分子量的超濾離心管
超濾
離心管復
,備有四種材質制的
超濾膜
:
聚醚碸
、
三醋酸纖維素
、
再生纖維素
和Hydrosart,可根據不同要求靈活選用;
兩種回收濃縮液的方法:既可用吸管直接吸取並回收,又可將離心管放入
離心機
反甩,將濃縮液甩入回收帽中,加蓋保存。這兩種方法都可使濃縮液達到近乎完全回收
7. 超濾離心管上一系列數字是什麼意思
離心管就是一個簡單的可以承受高轉速壓力的管子,比如離一些樣品回,分離出上清沉澱。
離心超濾管答會有一個類似於內管和外管的兩個部分,內管中是帶有一定分子量的膜,當高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內管中),就是超濾的原理。。。。常用於濃縮樣品。
8. 急急急!!Millipore15ml超濾離心管離心離不下去是什麼原因
我也是啊,你的分子截留量是多少?是不是分子截留量越小,需要的離心時間越短?
9. 超濾離心管可以滅菌嗎
1、可以用70%的酒精消毒
2、如果是高溫高壓滅菌,要注意滅完菌後,管裡面的超濾膜是處於濕潤的狀態,所以需要立即使用,因為膜濕潤後就不能幹
10. 超濾離心管能夠通過最小的分子量是多少
離心管就是一來個簡單的可以承受高轉速自壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉澱. 離心超濾管會有一個類似於內管和外管的兩個部分,內管中是帶有一定分子量的膜,當高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內管中),就是超濾的原理.常用於濃縮樣品.