超濾管濃縮病毒如何選用范圍

① 如何獲得濃縮的細菌病毒

細菌可以以無性或者遺傳重組兩種方式繁殖,最主要的方式是以二分裂法這種無性繁殖的方式：一個細菌細胞細胞壁橫向分裂,形成兩個子代細胞.並且單個細胞也會通過如下幾種方式發生遺傳變異：突變（細胞自身的遺傳密碼發生隨機改變）,轉化（無修飾的DNA從一個細菌轉移到溶液中另一個細菌中）,轉染（病毒的或細菌的DNA,或者兩者的DNA,通過噬菌體轉移到另一個細菌中）,細菌接合（一個細菌的DNA通過兩細菌間形成的特殊的蛋白質結構,接合菌毛,轉移到另一個細菌）.細菌可以通過這些方式獲得DNA,然後進行分裂,將重組的基因組傳給後代.許多細菌都含有包含染色體外DNA的質粒.
處於有利環境中時,細菌可以形成肉眼可見的集合體,例如菌簇.
細菌以二分裂的方式繁殖,某些細菌處於不利的環境,或耗盡營養時,形成內生孢子,又稱芽孢,是對不良環境有強抵抗力的休眠體,由於芽胞在細菌細胞內形成,故常稱為內生孢子.
芽孢的生命力非常頑強,有些湖底沉積土中的芽抱桿菌經500-1000年後仍有活力,肉毒梭菌的芽孢在pH 7.0時能耐受100℃煮沸5-9.5小時.芽孢由內及外有以下幾部分組成：
1．芽孢原生質（spore protoplast,核心core）：含濃縮的原生質.
2．內膜（inner membrane）：由原來繁殖型細菌的細胞膜形成,包圍芽孢原生質.
3．芽孢壁（spore wall）：由繁殖型細菌的肽聚糖組成,包圍內膜.發芽後成為細菌的細胞壁.
4．皮質（cortex）：是芽孢包膜中最厚的一層,由肽聚糖組成,但結構不同於細胞壁的肽聚糖,交聯少,多糖支架中為胞壁酐而不是胞壁酸,四肽側鏈由L-Ala組成.
5．外膜（outer membrane）：也是由細菌細胞膜形成的.
6．外殼（coat）：芽孢殼,質地堅韌緻密,由類角蛋白組成(keratinlike protein),含有大量二硫鍵,具疏水性特徵.
7．外壁（exosporium）：芽孢外衣,是芽孢的最外層,由脂蛋白及碳水化合物(糖類)組成,結構疏鬆.

② 超濾離心管怎麼使用

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱，導致堵管。若發生沉澱，要確定沉澱的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，後者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾），再濃縮至1ml左右，連續三次，最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多於500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然後吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉澱，可以先加入水，然後用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉澱懸起，然後倒掉，不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml
離心管，排出部分水，然後蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。

③ 如何用蛋白濃縮管

選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，最常見的是Ultra-15（10kD）。

通常應回截留分子量答不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。

新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。

(3)超濾管濃縮病毒如何選用范圍擴展閱讀：

超濾濃縮離心管，最新推出專利產品Hydrosart膜2K型，具有極低的蛋白吸附特性，高流速、高通量，是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想用膜。

備有四種材質的超濾膜：聚醚碸、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart，可根據不同要求靈活選用；兩種回收濃縮液的方法：既可用吸管直接吸取並回收，又可將離心管放入離心機反甩，將濃縮液甩入回收帽中，加蓋保存。這兩種方法都可使濃縮液達到近乎完全回收；

④ 如何使用超速離心機濃縮慢病毒

你好，慢病毒轉染細胞的操作步驟如下：
1、慢病毒轉染前18-24小時，將貼壁細胞以1×10^5/孔鋪到24孔板中。使細胞在慢病毒轉染時的數量為2×10^5/孔左右。
2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鮮培養基替換原培養基，加入適量病毒懸液。37℃孵育。
3、(對polybrene毒性敏感的細胞選作此步驟)4小時後加入2ml新鮮培養基以稀釋polybrene。
4、繼續培養24小時，用新鮮培養基替換含有病毒的培養基。
5、繼續培養。如果慢病毒含有熒光蛋白，一般轉染48小時後可見明顯熒光表達，72小時後更加明顯。如需FACS檢測轉染效率，可在轉染後72-96小時進行。如果慢病毒含有抗性基因並且需要加葯篩選，可以在轉染3-4天後開始加葯。
二、慢病毒轉染懸浮細胞實驗方法
1、在2×10^5/ml懸浮細胞中加入polybrene至6 μg/ml和適量病毒，充分混勻。37℃孵育。或者150g室溫離心4小時(選作，部分難轉染的細胞系採用此步驟可以提高轉染效率)。
2、(對polybrene毒性敏感的細胞選作此步驟)4小時後(或離心結束後)加入等體積新鮮培養基以稀釋polybrene。
3、繼續培養3-4天。中間視細胞生長情況可傳代或換液。

⑤ 超濾濃縮如何操作

超濾可採用全量過濾，既沒有濃縮過程
也可以錯流過濾，產水濃水，即濃縮懸浮固體後排出

⑥ 超濾原理的應用范圍

超濾技術廣泛用於水處理設備工藝中：
<1>. 反滲透的預處理，原水包括海水、地表版水、井水等。
<2>. 城市、鄉鎮權、農村供水處理。
<3>. 冷凝水回用，食品、飲料加工用水。
<4>. 制葯用水除熱源。
<5>. 處理地表水和井水用於飲用。
<6>. 深度處理廢水進行回收利用。
<7>. 白酒的除濁，果酒、葡萄酒、黃酒的除菌、除濁。
<8>. 應用於食品、發酵、乳業中的濃縮處理。

⑦ 超濾濃縮蛋白溶液時其濃度該從高到低還是有低到高對超濾膜好呢

從低到高,當然首先3瓶中蛋白分子量應該差不多,否則先超濾小分子的,主要是減少超濾膜的堵塞程度

⑧ 超濾膜可以阻擋病毒嗎

超濾膜是一種抄孔徑規格一致，額定孔徑范圍為0.001-0.02微米（即1——20納米）的微孔過濾膜。在膜的一側施以適當壓力，就能篩出小於孔徑的溶質分子，以分離分子量大於500道爾頓、粒徑大於2～20納米的顆粒。
細菌的大小因種類而差別很大，球菌大小以直徑表示；桿菌、螺菌用長度和寬度表示。螺菌的長度一般以菌體兩端的距離計算，但按螺旋的直徑和圈數計算才是螺菌的真正長度。測量細菌大小一般用顯微鏡測微尺，常用的單位是微米（micrometer，μm，1μm＝10-3mm）。最小的細菌只有0.2微米，最大的可長達80微米，但最常見的多數細菌為：球菌0.5～1微米，桿菌0.2～1.0×0.7～3微米，螺菌0.3～10×1.0～50微米。
病毒比細菌小得多。直徑在20～40納米之間。大的如痘病毒，大小為200×250-350納米，與小的細菌相近；小的如口啼疫病毒，直徑只有22納米，所以，超濾膜能過濾掉水中的細菌和病毒

⑨ 如何選擇合適的濃縮離心管

如何選擇濃縮離心管：

1. 按體積

Pall提供了4個系列的濃縮離心管，適合處理不同體積的樣本。你可以根據你的樣本量來選擇。不過，如果樣本濃度低體積大，可以選擇較小容積的濃縮離心管多次重復加樣離心。