1. 過濾滅菌的過程怎麼做
過濾滅菌跟注射器的針頭的裝置一樣
不過是個隔膜
通過壓力吧要滅菌的液體通過濾膜
原理是:由於濾膜的孔徑小於細菌的直徑
所以能把細菌隔離在濾膜之外
這樣除菌的~
2. 請問制備培養基時如何過濾除菌
1、滅菌方法
培養基的滅菌方法主要有兩種,高壓除菌及.22um微孔濾膜過濾除菌。與過濾相比,高壓滅菌的工作強度小,成本較低,但易造成營養成分的流失,而且在多次加樣(無菌谷氨醯胺溶液,無菌碳酸氫鈉溶液等)過程中容易造成二次污染。大多數培養基採用0.1~0.2μm孔徑的微孔濾膜進行過濾滅菌,並且已成為培養基除菌的發展方向,它可低限度地減少培養基的營養損失。
1.1 高壓滅菌
某些培養基(如MEM)可進行高壓滅菌,例如清大天一的MEM培養基中的MD605、MD609等。這類培養基一般不含有L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉,一般是在培養基高壓滅菌後加入L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉的無菌的液體。另外可高壓的谷氨酸鹽(如L-丙氨醯-L-谷氨醯胺)可代替L-谷氨醯胺。
可高壓滅菌的培養基在121℃、15psi,15分鍾的條件下完全可達到滅菌效果及營養成分的最小損失,不需將滅菌時間延長。為保證高壓滅菌的效果,滅菌設備的驗證很關鍵。
1.2 過濾滅菌
可供過濾滅菌使用的濾膜很多,其材料多為polyethersulphone(PES)、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。一般情況下採取正壓過濾,正壓過濾較之負壓過濾具有流速高、過濾快、不易污染,可避免蛋白質產生大量氣泡等優點。一般使用過濾器可參照各供應商的產品說明書。
目前大多數實驗室和制葯企業採用微孔濾膜濾器(如Zeiss濾器)或立式微孔濾器(Millipore、Pall)除菌。微孔濾膜濾器為不銹鋼,中間可夾放0.22um濾膜。使用這種濾器最重要步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。如在使用Zeiss濾器時,先要用培養用水將濾膜充分潤濕,在安裝濾膜時可在其上放置一層定性濾紙再固定。消毒時旋鈕不要扭太緊,凡與空氣接觸部位都要包好(可用牛皮紙、紗布、無紡布等);高壓滅菌後,在無菌環境中立即將旋鈕扭緊。過濾除菌結束後,要打開濾器,檢查濾膜是否完整,如果濾膜破裂,需重新進行過濾除菌過程。立式微孔濾器可以選用不同的微孔濾柱體積,因為濾膜的折疊,膜面積顯著增大,液體處理量大,而且不容易發生堵塞現象。
3. 求解過濾滅菌全過程,過程中都要用到什麼部件具體操作步驟是怎樣的問題有點兒繁瑣,求耐心詳解...
過濾滅菌主要需襲要四個東西:
1. 高壓滅過菌的無菌容器,用來盛放無菌溶液
2. 除菌濾膜,一般用0.22 um的濾膜或者濾器即可
3. 無菌的操作空間, 比如超凈工作台
4. 注射器(無需針頭)
首先把盛放無菌溶液的容器高壓滅菌,備用,
然後在超凈工作台里,將濾器拆封,套在容器口上, 用注射器吸取未除菌的溶液, 然後插在濾器上,將溶液擠過濾器, 濾器下面流出來的溶液即所需的無菌溶液.
如果要過濾大體積(2-10升)的溶液, 使用真空泵+濾器+濾膜會更加省力
4. 常用的滅菌方法的原理是什麼
(1)加熱滅菌法
利用高溫來殺死微生物(超過最高生長溫度)的方法。加熱滅菌的原理:當高溫作用於微生物時,首先引起細胞內生理生化反應速率加快,機體內對溫度敏感的物質如蛋白質、核酸等,隨著溫度的增高而遭受不可逆的破壞,盡而導致細胞內原生質體的變化、酶結構的破壞,從而使細胞失去了生活機能上的協調,停止了生長發育。隨著高溫的繼續作用,細胞內原生質便發生凝固,酶結構完全破壞,活動消失,生化反應停止,滲透交換等新陳代謝活動消失,細胞死亡。加熱滅菌可分乾熱滅菌和濕熱滅菌兩大類。
1)乾熱滅菌 利用灼燒或乾熱空氣滅菌而沒有飽和水蒸氣參加的滅菌法稱為乾熱滅菌法。由於乾熱滅菌使用方便,方法簡單,故在生產上廣泛應用。如火焰滅菌法:直接利用火焰把微生物燒死,故又稱焚燒滅菌法。採用此法滅菌既徹底又迅速,但只適用於金屬制的接種工具、試管口及污染物品等的處理。熱空氣滅菌法:即在電熱恆溫乾燥箱中利用乾熱空氣來滅菌。
2)濕熱滅菌 即利用蒸汽進行滅菌的方法。濕熱滅菌又分為高壓、常壓、間歇滅菌和巴氏滅菌4種。
①高壓蒸汽滅菌 由於高壓蒸汽具有較強的穿透力和較常壓高的溫度,能大大縮短滅菌時間,提高工作效率,加之蛋白質在濕熱條件下容易變性,在熱蒸汽條件下,細菌的芽孢在120℃,經20~30分鍾可全部被殺死。如滅菌材料體積較大,不易被穿透時,可將壓力增加到0.152兆帕,延長至1~2小時。在高壓蒸汽滅菌中,滅菌溫度隨蒸汽壓力的增加而升高(圖2-6)。
圖2-7 簡易常壓滅菌法
③常壓間歇蒸汽滅菌法 這是利用常壓蒸汽反復幾次滅菌的方法。具體做法是將待滅菌物品放在鍋內,100℃處理1小時左右,殺死微生物的營養細胞,讓其冷卻至30℃左右,此時芽胞會萌發,再以同樣方法加熱處理,反復3次,可達到滅菌目的。該方法可用於不耐高溫的葯品、營養物、特殊培養基的滅菌。
④低溫巴氏滅菌法 即在60~70℃下,經一定時間,殺死有害微生物的方法。適應於不耐高溫的物品消毒。有些培養基,在高溫下遭到破壞,用此法既可殺死致病微生物的營養體,又能使培養基的成分不致受到嚴重破壞。食用菌生產中培養料堆積發酵工藝,就是利用這個原理殺死其中的病蟲、雜菌。
(2)過濾除菌法
又分液體過濾和空氣過濾兩種,就是採用機械的方法,設計一種濾孔比細菌還小的篩子,做成各種過濾器,通過機械過濾,只讓液體培養基或空氣從篩孔流出,各種微生物菌體則留在篩子上,從而達到除菌的目的。這種方法適用於對熱不穩定的體積小的液體培養基(如動物血清、蛋白質、酶、維生素等)及氣體的滅菌。超凈工作台的工作原理就是將帶菌空氣通過過濾滅菌形成無菌空氣,從風洞中吹出,來造成工作台范圍的無菌狀態。過濾滅菌的最大優點是不破壞培養基中各種物質的化學成分。常用的過濾器有用硅藻土製的、石棉製的、陶瓷土製的,也有用火棉膠、硝化纖維素濾膜製成的。
(3)輻射滅菌法
利用輻射產生的能量進行殺菌的方法稱輻射滅菌。輻射可分電離輻射和非電離輻射兩種,α-射線、β-射線、γ-射線、X-射線、中子和質子、微波等屬電離輻射,紫外線、臭氧、日光為非電離輻射。
1)紫外線滅菌 紫外線殺菌的原理是利用紫外線的輻射作用。用燈管直接照射細菌使其發生光化學反應,將細菌細胞質誘導形成胸腺嘧啶雙聚體,從而抑制DNA的復制而發生變性、致死。另一方面,空氣在紫外線照射下產生的臭氧(O3),也具有一定的殺菌作用。紫外線的有效作用距離為1.2~2.0米。紫外燈一般懸吊在接種室或培養室的上方,個數依房間大小而定,容1~2個人操作的接種室,安裝一個30瓦的紫外燈就可以了。在每次接種前,應將所需的器具一起放入接種室(箱)內,然後打開紫外燈照射。如果接種室體積較大,開燈照射2小時才能達到滅菌效果;如果較小,只需開燈半小時左右既可達到滅菌效果。由於紫外線穿透力弱,即使是普通玻璃也不能濾過,因此,只適於空氣或物體表面的滅菌。紫外線對人體皮膚,尤其是眼睛有殺傷作用,應避免直視,工作時應將紫外燈關閉。紫外線消毒時工作場所如果處在稍暗無光的情況下,能提高殺菌效果。細菌接受致死量紫外線照射後,隨即給予可見光照射,部分細菌有復活的可能。幹細胞比濕細胞對紫外線的抗性強,孢子比其營養細胞對紫外線更具抗性。
2)微波滅菌 由於微生物的細胞中都含有70%~90%的水分,水分子在微波電場中被極化,並隨著電場方向的改變而轉動,在轉動過程中分子之間高速度摩擦產生熱能,這種熱能不同於外部加熱,可在短時間里使細胞爆破而物體本身的溫度卻只有極微增加,從而達到滅菌效果。用YM7601型微波爐只需60秒鍾就能殺死食品中192萬個大腸桿菌。
3)臭氧發生器消毒 臭氧(O3)具有強烈的氧化作用,能破壞微生物的細胞膜與核酸。O3也是一種暫態物質,常溫下能自然分解,還原成氧。其滅菌原理實際上和紫外線消毒極相似。
5. 在GMP中,用於滅菌和消毒的最常用化學物質是
想要知道你這種面具消毒最常用的化學物質,就需要明白他的一些工作過程和他的完成條件的具體體現。
6. 實驗室常用的滅菌方法有乾熱滅菌.高壓蒸汽滅菌.紫外線滅菌.過濾除菌四種各有那些優缺點
1.高壓蒸汽滅菌
為濕熱滅菌方法的一種。是微生物培養中最重要的滅菌方法。這種滅菌方法是基於水在煮沸時所形成的蒸汽不能擴散到外面去,而聚集在密封的容器中,在密閉的情況下,隨著水的煮沸,蒸汽壓力升高,溫度也相應增高。壓力和溫度之間的關系見表9-1。
高壓蒸汽是最有效的滅菌法,能迅速地達到完全徹底滅菌。一般在15磅/英寸2壓力下(121.6℃),15~30分鍾,所有微生物包括芽孢在內都可殺死。它適用於對一般培養基和玻璃器皿的滅菌。
進行高壓蒸汽滅菌的容器是高壓蒸汽滅菌鍋。高壓蒸汽滅菌鍋是一個能耐壓又可以密閉的金屬鍋,有立式與卧式兩種。
可以用電熱、煤氣、蒸汽等。鍋上裝有壓力表,有的還裝有溫度計,能及時了解鍋內壓力及溫度。鍋上還設有排氣口,其作用是在密閉之前,利用蒸汽將鍋內的冷空氣排凈,另外還裝有安全活門,如果壓力超過一定限度,活門即可自動打開,放出過多的蒸汽。
2.乾熱滅菌
微生物培養中常用的乾熱滅菌是指熱空氣滅菌。一般在電烘箱中進行。乾熱滅菌所需溫度較濕熱滅菌高,時間也較濕熱滅菌長。這是因為蛋白質在乾燥無水的情況下不容易凝固。一般須在160℃左右保持恆溫3~4小時,方能達到滅菌的目的。
乾熱滅菌適用於空玻璃器皿的滅菌,凡帶有橡膠的物品和培養基,都不能進行乾熱滅菌。
3.間歇滅菌
各種微生物的營養體在100℃溫度下半小時即可被殺死。而其芽孢和孢子在這種條件下卻不會失去生活力。間歇滅菌就是根據這一原理進行的。
間歇滅菌的方法是用100℃、30分鍾殺死培養基內雜菌的營養體,然後將這種含有芽孢和孢子的培養基在溫箱內或室溫下放置24小時,使芽孢和孢子萌發成為營養體。這時再以100℃處理半小時,再放置24小時。如此連續滅菌3次,即可達到完全滅菌的目的。
間歇滅菌通常在流動蒸汽的滅菌鍋中進行,也可用普通鋁鍋代替。這種滅菌方法多用於明膠、牛乳等物質的滅菌,這類物質在100℃以上的溫度下處理較長時間,會被破壞,而用間歇滅菌法就既起到了殺菌作用,又使被處理的物質免遭破壞。
4.紫外線滅菌
紫外線殺菌力最強的是波長2650~2660Å的部分。無菌室緩沖間和接種箱常用紫外線燈作空氣滅菌。無菌室和緩沖間的照射時間為20~50分鍾(視房間大小而定),接種箱照射10~15分鍾即可。
為了加強紫外線滅菌的效果,在照射前,可在無菌室、緩沖間或接種箱內噴灑5%石炭酸,以使空氣中附著有微生物的塵埃降落,同時也可以殺死一部分微生物。無菌室的工作台的檯面和椅子,可用2~3%的來蘇兒擦洗。然後再照射紫外線。由於紫外線對人體有傷害作用,所以人不要直視正在照射的紫外線燈,也不要在照射情況下進行工作。
滅菌後,為了檢驗紫外線的滅菌效果,可以在無菌室、緩沖間或接種箱內放一套盛有培養基的培養皿,將皿蓋打開5~10分鍾,蓋好後,放入溫箱中培養。如果只有一、二個菌落,可認為滅菌效果良好。如雜菌叢生。則需延長照射時間或同時加強其它滅菌措施。
7. 介質過濾除菌的定義
過濾介自質除菌原理:1.慣性沖擊滯留作用2.攔截滯留作用3.布朗擴散作用4.重力沉降作用5.靜電吸附作用.
慣性沖擊滯留作用:
帶有物體顆粒的空氣通過濾層時,僅能從纖維的間隙通過,由於纖維縱橫交錯,迫使空氣要不斷的改變運動方向和運動速度才能穿過過濾層,空氣中的微粒在運動與氣流具有一致的方向,當達到某速度時,微粒具有一定的慣性力.當氣流速度下降到微粒的慣性力不足以使其脫離主導氣流而直接撞向纖維而被滯留在纖維周圍.
攔截滯留作用:
微生物微粒直徑很細,質量很輕,它隨低速氣流慢慢靠近纖維時,微粒所在的主導氣流流速受纖維所阻而改變方向繞過纖維前進.並在纖維周邊形成一層邊界滯留區.
滅菌:
用物理或化學方法殺死或除去物料或設備中一切有生命的物質的過程.
滅菌方法:
化學葯劑滅菌,射線滅菌,乾熱滅菌,濕熱滅菌,過濾除菌.培養基的滅菌方法:分批滅菌,連續滅菌.
參考資料:網路摘錄
8. 過濾滅菌法是什麼
過濾滅菌跟注射器的針頭的裝置一樣不過是個隔膜 通過壓力吧要滅菌的液體通過濾膜原理是:由於濾膜的孔徑小於細菌的直徑 所以能把細菌隔離在濾膜之外 這樣除菌的~