㈠ 我想請教一下,我做油紅0 ,沒封片時候圖像清晰,為什麼拿中性樹脂封片以後再看感覺紅色團一塊了
中性樹膠裡面有二甲苯啊,二甲苯溶解脂肪,建議使用甘油明膠等回水溶性封固劑答封片,其實你可以買現成的試劑盒,南京建成就有,他家的油紅O試劑盒裡有個專門的封固劑,就是要加熱才能溶解,麻煩是麻煩,但效果還不錯。
㈡ 原位雜交的主要程序
1、使用地高辛標記的核酸探針進行石蠟切片的RNA原位雜交第一天
1) 二甲苯於37℃脫蠟2次,每次15分鍾;
2) 無水乙醇浸泡2次,每次3分鍾;
3) 95%乙醇浸泡2次,每次3分鍾;
4) PBS清洗3分鍾;
5) 2%焦碳酸二乙酯室溫下浸泡10分鍾;
6) PBS清洗10分鍾;
7) 加入胃蛋白酶25ul/ml,37℃孵育15分鍾;
8) PBS清洗2次,每次3分鍾;
9) 0.2N的HCl孵育30分鍾;
10)PBS清洗2次,每次3分鍾;
11)0.25%無水乙酸和0.1M三乙醇胺孵育10分鍾;
12)PBS清洗2次,每次5分鍾;
13)預雜交緩沖液孵育30分鍾;
14)准備核酸探針混合物:使用預雜交緩沖液稀釋探針,85℃加熱5分鍾,置於冰塊中10分鍾;
15)雜交;第二天
16)將玻片置於SSC中2次,每次5分鍾以去除封片;
17)PBS清洗3分鍾;
18)RNA酶A溶液中(或0.1-1ng/mlPBS中),37℃孵育30分鍾;
19)PBS清洗5分鍾;
20)室溫,2×SSC清洗10分鍾;
21)37℃,1×SSC清洗10分鍾;
22)37℃,0.5×SSC清洗10分鍾;
23)緩沖液A孵育10分鍾;
24)緩沖液A(1%正常綿羊血清和0.03%三重氫核X-100)孵育30分鍾;
25)加入抗地高辛抗體(1/200的上述緩沖液,來自Boehringer Mannheim),37℃孵育3 小時;
26)緩沖液A清洗2次,每次10分鍾;
27)緩沖液B清洗2次,每次5分鍾;
28)製成NBT/BCIP暗處保存30-60分鍾,顯微鏡下進行觀察,如果背景尚佳,顯色時間可延長到16小時;
29)停止緩沖液B的反應,用水進行簡單的清洗;
30)固紅,脫水以及封片進行核的復染。
2、使用地高辛標記的寡核苷酸探針進行石蠟切片的原位DNA雜交第一天
1) 二甲苯於37℃脫蠟2次,每次15分鍾;
2) 無水乙醇浸泡2次,每次5分鍾;
3) 95%乙醇浸泡2次,每次5分鍾;
4) PBS清洗5分鍾;
5) 2%焦碳酸二乙酯室溫下浸泡10分鍾;
6) PBS清洗5分鍾;
7) 加入胃蛋白酶25ul/ml,37℃孵育10分鍾;
8) PBS清洗2次,每次5分鍾;
9) 0.2N的HCl孵育30分鍾;
10)PBS清洗2次,每次5分鍾;
11)0.25%無水乙酸和0.1M三乙醇胺孵育10分鍾;
12)PBS清洗5分鍾;
13)預雜交緩沖液孵育30分鍾;
14)准備寡核苷酸探針混合物:使用預雜交緩沖液稀釋探針;
15)雜交;第二天
16)將玻片置於SSC中以去除封片;
17)室溫,2×SSC清洗10分鍾;
18)37℃,1×SSC清洗10分鍾;
19)37℃,0.5×SSC清洗10分鍾;
20)緩沖液A孵育10分鍾;
21)緩沖液A孵育30分鍾;
22)加入抗地高辛抗體37℃孵育3小時;
23)緩沖液A清洗2次,每次5分鍾;
24)緩沖液B清洗2次,每次5分鍾;
25)製成NBT/BCIP暗處保存30-60分鍾,顯微鏡下進行觀察,如果背景尚佳,顯色時間可長到16小時;
26)停止緩沖液B的反應,用水進行簡單的清洗;
27)固紅,脫水以及封片進行核的復染。
㈢ 病理片子用什麼膠封片
樹脂膠
㈣ 細胞爬片做免疫熒光用什麼封片
甘油不會凝固,片子不易長時間保存。指甲油、樹脂對熒光有影響,而且指甲油所含有機回溶劑對物鏡不好。最答好用專門的熒光封片劑。
Aqua-Poly/Mount (Polysciences, Inc.) #18606 20ml $37.65
*HISTOTEC PERMANENT AQUEOUS MOUNTANT(serotec,Immunological Excelence)
(HIS002B)30ml $89
這兩個是現成的,買來就可以用,但價格較貴。
sigma Mowiol 4-88 是顆粒,需自己配製,量大,價格很便宜。
㈤ 怎樣用中性樹脂封片
晾乾後滴在上面兩滴中性樹脂然後放蓋玻片,輕壓蓋玻片讓液滴充滿整個玻片,然後晾乾,最好晾一個星期再看,不然容易脫落。當然不用油鏡的話應該就不用晾那麼久了。
㈥ 中性樹脂封片用什麼溶解中性樹脂
可以試試飛秒實驗室的脫膠劑,或則脫漆劑,都可以,或者你自己用醇試試