A. 濾膜孔徑問題
切割分子量 1K 3K 5K 6K
對應孔徑 0.001μ回m 0.002μm 0.003μm 0.004μm
切割分子量 10K 20K 30K 50K
對應孔徑 0.005μm 0.006μm 0.007μm 0.008μm
切割分子量 100K 150K 300K 500K
對應孔徑 0.01μm 0.05μm 0.12μm 0.2μm
這是專業膜公司答提供可靠關於切割分子量與膜孔大小的關系.
當然我覺得這個數據也不是絕對的,但基本相差不大
B. 分離22KD的蛋白質選擇什麼型號的超濾膜
如果是分離22kDa及分子量遠小於它的小蛋白，推薦用millipore的超濾管，截留分子量10kDa，體積1-15ml都有。主要還是看你的目的蛋白是集中於濃縮液部分，還是濾液部分，從而選擇合適的截留分子量
C. 選擇分離60KDa 的蛋白選擇什麼種類的超濾膜想讓蛋白留在濃縮液里
那就是濃縮，如果要提高回收率用10K的超濾膜
D. 做超濾實驗時，超濾膜上標的10KD、30KD單位如何對應分子的大小是否單位越大，超濾得到的物質分子越小
超濾膜上標的10KD、30KD都是指截留率。單位越大，超濾得到的物質分子也越大。
E. 有《發酵脫脂大豆肽的清除和抗疲勞活性》英文文獻的翻譯嗎
發酵脫脂大豆肽的清除和抗疲勞活性
摘 要：許多生物活性肽具有特定成分，使這些促進健康的食品存在潛在的生物學特性。越來越多的關注讓我們集中研究來自大豆蛋白質的生理活性肽。在這項研究中，枯草芽孢桿菌SHZ發酵生產脫脂豆粕再用超濾和凝膠色譜進行純化得到大豆肽。分別在體外和體內對自由基的清除和肽的抗疲勞作用進行了評價。20天的大豆肽給葯後對小鼠游泳耐力進行了測試及對小鼠血乳酸和肝糖原進行了測定。結果表明，在10mg/ml的濃度顯示了純化肽（P<0.01）的超氧效力（62％）和羥基（96％）的清除作用。小鼠游泳（P <0.01）後經大豆肽給葯可顯著加速清除其體內的血乳酸。中，高劑量組的肝糖原儲存明顯增加 （P<0.05）。這表明，大豆肽發酵法生產可顯著減輕老鼠的身體疲勞。
關鍵詞：大豆肽；發酵；清除自由基；抗疲勞；脫脂大豆肽；枯草芽孢桿菌
大豆肽是一種由3-10個氨基酸殘基與來自大豆蛋白水解物組成的短鏈肽。由於它的抗高血壓和抗血栓性質等各種生物活性，它不僅被視為是一種營養物而且也作為一個人類健康的功能因子。
在不同類型的生物活性肽（免疫刺激，阿片類葯物，抗微生物肽等），大豆肽與氧自由基的清除活動已被廣泛研究，由脂質過氧化自由基鏈反應所造成的細胞或組織傷害目前被認為是各種疾病中一個最重要的誘因。疲勞是一種表明健康可能或已經受到傷害的症狀。生理上，在生物胺水平疲勞能引起糖皮質激素的變化。眾所周知，糖皮質激素是主要調解人應激反應和調節許多信號事件的免疫反應。因此，疲勞能引起有關生物調節，自主神經，內分泌和免疫系統各種疾病。這些疾病可導致運動強度的減少，甚至活動的中斷。所以疲勞是值得現代通常在壓力下的人們的關注。許多報告表明，肽在運動過程中能立即提供能量而且在廣泛的運動中也是有益的。然而，沒有任何有關大豆肽的抗疲勞作用的詳細資料。由於大豆蛋白質具有許多不同的前體生物活性肽，有許多對商業酶制劑大豆蛋白水解大豆肽生產的研究。然而，由於它的高生產成本使它不能在發展中國家大規模的應用。很長一段時間，微生物被認為是一種好的酶原料，微生物發酵的食物蛋白質如牛奶和大豆已被證明是一種用純化酶水解蛋白的較經濟的替代方法。脫脂大豆粉富含蛋白質（40-50％），但通常在石油生產過程中被作為低價值的副產品，應作為大豆肽生產中一種良好的蛋白質來源。在本研究中，我們生產由脫脂豆粕發酵大豆肽。超濾和凝膠色譜純化後，通過小鼠的游泳運動對大豆肽的自由基清除性能和抗疲勞的效果進行了研究。
脫脂豆粕發酵
取培養在斜面上的一圈草坪轉移到含有100ml培養基（3g牛肉膏，10g蛋白腖和5g氯化鈉加入1000ml的蒸餾水，PH=7.2）的250ml燒瓶中進行種子培養，在37。C下種子培養36h。發酵培養基由5％（w/ v）的脫脂豆粕組成。滅菌後，在500ml燒瓶中每100ml的發酵培養基接種10ml的種子液並在30。C下培養36h。 大豆蛋白水解物的制備
發酵後，發酵液在121。C消毒20min，以殺死微生物。發酵液中未水解的脫脂大豆粉
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渣經5000r離心30min除去。上清收集，通過0.45um的過濾膜過濾除去雜質，收集得到大豆蛋白水解物（SPH）。 大豆肽的超濾和SPH凝膠色譜制備
三氯乙酸（TCA，0.4M）溶液中加入等體積的SPH。在室溫下半個小時後不溶性蛋白經10000r離心10min除去。收集上清並用0.4M的NaOH調pH至7.0。由此產生的上清液經分餾成3種有不同的截留分子量范圍（10，3，1 kDa）的超濾膜，小碎片分別通過3 kDa的膜滲透，但凍乾的大豆肽不能經1 kDa的膜滲透。為進一步凈化，凍干大豆肽分別溶解於去離子水（10mg/ml），裝上Sephadex G-25 凝膠過濾柱(2.6*100 cm)。分離獲得的去離子水在流率0.5ml/min，在220 nm處測量後洗脫組分（5ml）匯集。該柱子用藍葡聚糖2000MW（2000 kDa)、胰蛋白酶（233kDa）、簡化谷胱甘肽（GSH）（307Da）和甘氨酸(75Da)校準。該部分展示了純化大豆肽和經體內實驗凍干收集的自由基的超強的清除作用。
動物及實驗飼料
96隻昆明種小鼠（3周齡，20 ± 2g，雄雌數相等）由中國南京實驗動物繁育中心供應。這些動物被關在一個溫度控制在22±2。C，光暗循環1212h的房間里。這些動物根據南京農業大學動物科學與技術學院的動物中心的道德指引對待。該實驗協議是經南京農業大學動物科學與技術學院的批准。小鼠隨機分為四組，每組包括12隻雌性小鼠和12隻雄性小鼠。這些動物經過3d適應環境和標準的飲食後維持了20d按以下規定的飲食。
所有的動物在實驗過程中被允許自由食用標准實驗室顆粒飼料（由600g/kg澱粉、150g/kg酪蛋白、100g/kg蔗糖、50g/kg豆油、50k/kg纖維素、35k/kg的礦物、10k/kg維生素組成）和水。除了自由食用標準的飲食和水，第一組被指定為每天用5ml蒸餾水灌胃給葯的控制劑量組（CD），第二組被指定為每天用大豆肽100mg/ml體重給葯的低劑量組（LD），第三組被指定為每天用200mg/kg體重給葯的中劑量組（MD），第四組被指定為每天用400mg/kg體重給葯的高劑量組（HD）。每組所用的大豆肽溶解在指定濃度的蒸餾水中，然後每5ml的蒸餾水每天對小鼠灌胃。
游泳耐力實驗
從各組中取出八隻小鼠來，經不同劑量大豆肽給葯20d後進行游泳試驗，雄性小鼠和雌性小鼠數相等。每個小鼠尾巴負載著其體重5％的鍍鋅鐵絲，然後分別把它們放到充滿了水（溫度：25 ± 0.5。C、深度：30cm的不同游泳箱中(90 *60 *60 cm)，對小鼠的游泳耐力進行觀察。耐力時間被定義為小鼠一直保持游泳活動直到小鼠陷入游泳箱底部，並停止至少10s的移動的游泳時間。每個組小鼠的平均時間以及不同群體的數據進行T-檢驗。
血乳酸分析
不同劑量大豆肽給葯20d後，從每個小組選出四隻雌性與四隻雄性小鼠進行血乳酸分析。最後大豆肽給葯後從小鼠的尾靜脈收集20ul血液。小鼠游泳10min後立即採集另20ul血液樣本。小鼠休息20min後採集第三批血樣。
大豆肽對小鼠肝糖原的影響
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要確定小鼠的肝糖原，在最終大豆肽給葯後從每組取出四隻雌性和四隻雄性小鼠在30。C的水中強迫游泳30min。游泳90min後，每隻小鼠用高濃度丙烯酸塑料防盜乙醚麻醉致死並盡快收集其肝臟。利用蒽酮化比色法分析的方法，對不同組中小鼠的肝糖原一個接一個的直接測定。
大豆肽對小鼠體重的影響
為了進一步了解大豆肽對體重的影響，每天給小鼠稱重並仔細觀察它們的增長速度。小鼠經不同劑量的大豆肽給葯20d後，不同組中小鼠體重的增加以T-試驗進行分析。
數據分析
統計分析採用的是版本8.02的Windows SAS系統。配對的T -檢驗被用於所有的比較。結果表示的平均值和平均值的標准誤差, 被認為是顯著P<0.05。
結果與討論
大豆肽純化及自由基的清除活性
大豆蛋白水解物制備如上所述是用來凈化和清除在每個純化步驟中測試的自由基的活性。凝膠過濾後，根據分子的大小分離成三個峰。隨著進一步的凈化，部分自由基清除活性增加，第二部分池，其中三組分的結果具有最高的自由基清除活性。該純化肽在羥基濃度為10mg/ml時顯著展出清除超氧效力，超氧自由基和羥自由基清除活性大約是眾所周知的自由基清除劑——生育酚的1.5倍。如超氧陰離子自由基和羥自由基的自由基在正常的新陳代謝下因缺氧而生成的連續減少。超充足的自由基引起的氧化壓力，這會導致細胞損傷和組織損傷。此外，氧化應力的產生可能在許多病理條件病因中起著重要的作用。自由基清除劑是一種預防性抗氧化劑其清除活性可以作為預防增加氧化壓力和疲勞恢復的徵兆。在這里，我們驗證了大豆肽具有超氧陰離子和羥自由基清除活性，所以肽用於在小鼠體內實驗中可估計其抗疲勞的屬性。 大豆肽對小鼠體重和游泳時間的影響
實驗期間小鼠體重的增加。小鼠經不同劑量的大豆肽給葯20d後，測量他們的體重。結果表明，實驗組體重的增加與CD(P > 0.05)組相比無顯著差異，因此，大豆肽對體重沒有顯著影響。治療組小鼠的裝載重量游泳的平均時間均顯著比對照組延長。低劑量組，中劑量組和高劑量組游泳的平均時間分別增加了20.91%，45.45%和70％。這些結果表明在實驗中大豆肽對小鼠的耐力具有顯著影響。 大豆肽對小鼠血乳酸的影響
在游泳前、游泳後和休息20min後對小鼠的血乳酸濃度進行不同處理再測量。發現各組的血乳酸濃度在游泳前沒有顯著差異（P> 0.05）。然而，在游泳後，低劑量組，中劑量組和高劑量組的血乳酸濃度的比例增加均低於CD組(0.70) (P < 0.05 或 0.01)。低劑量組，中劑量組和高劑量組的比例減少分別為0.30，0.32和0.33。
在厭氧條件下血乳酸是糖酵解的碳水化合物產品，在很短的時間內糖酵解是激烈運動的主要能量來源。因此，血乳酸是衡量疲勞程度的重要指標。血乳酸比例的增加是在游泳
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後的血乳酸增加的百分比，而游泳前，可作為疲勞程度的指標。血乳酸減少比例反映了休息20min後血乳酸的減少，代表著的疲勞程度的恢復指標。在這項研究中，數據顯示，游泳後大豆肽的膳食補充劑可以有效地延緩，降低血乳酸產生和推遲疲勞的出現和加快從疲勞中恢復過來。
結論
我們的研究首次報告了脫脂豆粕發酵的生物活性肽的生產。經超濾和凝膠層析純化後的大豆肽顯示出強的清除活性，可以延長小鼠的游泳時間，有效延緩乳酸在血液中的增加 ，並增加肝糖原的儲存 。因此，發酵脫脂大豆肽可以認定為是一種獲取生物活性肽的潛在方法。
望採納啊！！！！！
F. 注射劑的熱源污染
1，去除熱源是注射劑工藝很重要也很麻煩的一個問題，很多葯廠因此而返工甚至廢料。所以用什麼方法，什麼設備十分重要。
2，用微濾（0.22um)除熱源不適宜,但是有在微濾的膜上帶上正電荷,能夠去除4~5個LOG的大腸桿菌內毒素.但是該方法使用時要注意, 您的主葯成分不能是和熱源一樣,在該PH條件下帶負電,否則您就含量不合格了. 相應的產品有相應的FDA認可的驗證文件(4~5個LOG).它目前用在純水制備的最後一道工序,紫外線消毒後同時去除細菌和熱源,效果很好.國外和國內均有不少應用.
3, 目前世界上唯一經FDA認可的具有相應驗證文件的產品是日本旭化成生產的6K的中空纖維膜柱,從實驗室但Pilot到生產規模全有產品.但是使用該產品的前提條件是你的產品API不能是大分子物質,比如蛋白,如果分子量小於2K,最好是1000道爾頓以下最好,所以他適合於中葯注射劑或者化學葯注射劑的去除熱源.目前國內有廠家應用.
4,用超濾膜包去除熱源,需要試驗.因為您的樣品污染熱源的主要分子量分布和您的產品是有關系的,到底主要分布在多少分子量范圍,而且是強致熱的成分?您需要實驗,然後選擇合適的切割分子量的膜包也是可以的,要是您的熱源分子量分布和您的目標物質分子量近似,那是您的不幸!您就不能選擇這樣的方法.國內用的比較多的是小分子物質去除熱源,比如用10K的膜包去除胸腺肽的熱源.我還遇到過用1000K去除熱源的生產例子.
5, 比較有效的方法還有層析法,上文Chromatography已經有介紹.該方法如果選擇好的話,應該非常有效.唯一遺憾的是價格可能高一點,但是還是可以接受的.
6, 活性炭當然是除熱源的方法之一,但是有2個問題:a,在低溫下的去除熱源是很不靠譜的.你需要驗證,不能僅憑一次結果斷定.活性炭的吸附熱力學是與溫度很有關系的.我個人認為低溫下是很難有效的.b,它吸附熱源的時候同時吸附API或者目標物質,你的損失會很大.要是您的API不值錢,那也罷了,就象大輸液那樣,誰也不在意Glucosi的被吸附.
G. 做超濾實驗時，超濾膜上標的10KD、30KD單位如何對應分子的大小是否單位越大，超濾得到的物質分子越小
首先與超濾膜的材質有關，比如聚醚碸的和再生纖維的，同樣是10KD的，截流能力專是不相同的屬，一般要求在截流分析量的2倍-5倍以上方可實現良好的分離，同時不同公司的超濾膜本身應該有自己的說明的，參照說明要求即可。