TAE用蒸餾水配可以嗎

⑴ TBE緩沖液可以用自來水配嗎還是必須得是超純水

配試劑不能用自來水的。最好是用蒸餾水或超純水。

⑵ 凝膠電泳的膠可以用蒸餾水浸泡嗎

1. 用蒸餾水將制膠工具洗干凈，准備好制膠平板，用瓊脂將模具邊緣封閉，架好梳子；

2. 根據要分離的樣品（DNA）大小配製合適濃度的瓊脂糖凝膠。准確的稱取一定量的瓊脂糖乾粉，加入到合適體積的錐形瓶中，加入一定量的電泳緩沖液（30ml 左右TAE）；放入到微波爐內加熱融化，冷卻片刻（不燙手即可）；

3.融化後的瓊脂溶液搖晃混勻，倒入電泳槽中，等其凝固；

4. 室溫下凝固30-40min左亂運右，小心的拔出慧則梳子，取出凝固好的凝膠放入電泳槽內，准備上樣；

5. 在電泳槽中倒入電泳緩沖液（TAE）；沒過膠面 1mm左右，去除膠孔內的氣泡嘩碧梁；

6. 上樣，5ulDNA 樣品加入 1ul上樣緩沖液（loading buffer）和 1ul的染料，用搶混勻後加入到凝膠孔內； 7. 上樣結束，接通電源，紅色正極，黑色負極，DNA 樣品有負極往正極運動，加樣孔側為負，，40-50v 電

壓，電壓 30敏左右即可（<40min）；

8. 電壓結束，關閉電源，凝膠成像儀上觀察電壓位置並比對marker 判斷大小。

⑶ 剃度稀釋都用蒸餾水還是用溶解溶劑

做膠的TAE當然用雙蒸水
如果是槽中使用的電泳緩沖液,單蒸水也可以

⑷ TAE緩沖液哪有賣

TAE緩沖液 是生物學中使用最廣泛的核酸電泳緩沖液，主要用於DNA 的瓊脂糖凝膠電泳。TAE緩沖液的主要成分是Tris-乙酸鹽與EDTA，電泳時雙鏈線狀DNA 的遷移率較快，電泳大於13kb 的片段時分離效果好，此外，回收DNA 片段時也宜用TAE 緩沖系統進行電泳。
索萊寶的是50×TAE 緩沖液，工作濃度為1×，可直接用蒸餾水稀釋50 倍後使用。若產品出現沉澱析出，請置於37℃水浴使其溶解，不影響使用。

⑸ 稀釋50*TAE溶液到1*TAE是用蒸餾水還是一般的水

做膠的TAE當然用雙蒸水

如果是槽中使用的電泳緩沖液，單蒸水也可以

⑹ DNA指紋圖譜的產生的方法

2.1 主要試劑及器材
產生 DNA 指紋圖譜的主要試劑及器材如下：限制性內切酶 HinfⅠ、HaeⅢ等；電泳級瓊
脂糖；尼龍膜；λDNA/EcoRⅠ+HindⅢ；H4 型（24×20cm）水平電泳槽裝置；Model 250 型
電泳儀；標記試劑盒 Prime-a-Gene&reg; Labeling system；（α-32P）dCTP；X 光膠片；LS5801
型液閃儀；FYY-1 型多功能生化反應儀。
2.2 有關試劑的配製
（1） ACD 抗凝劑
檸檬酸 0.48g
檸檬酸鈉 1.32g
葡萄糖 1.47g
加水至 100ml
（2） T10E10 緩沖液
Tris-HCl 10mmol/dm3
EDTA 10mmol/dm3
pH 值：8.0
（3）TE 緩沖液
Tris-HCl 10mmol/dm3
EDTA 1mmol/dm3
pH 值：8.0
（4）20%SDS（100ml）
SDS 20g
溶於 100ml 蒸餾水中，30℃以上貯存。
（5）USSTE 裂解液
Urea 8mmol/dm3
NaCl 0.3mol/dm3
SDS 2%
Tris-HCl 150mmol/dm3
EDTA 1mmol/dm3
pH 值：7.5
（6）Tris 飽和酚
新蒸苯酚加入 8-羥基喹啉至終濃度為 0.1%，用 1mol/dm3 Tris-HCl 和0.5mol/dm3
Tris-HCl 溶液飽和至 pH 值 8.0，去掉上層水相，加適量（約 1/10 體積）的 0.1mol/dm3 Tris-HCl
（pH 值8.0）覆蓋在酚相上，保持4℃，放在棕色瓶中保存。
（7）50×TAE 緩沖液（1 000ml）
Tris 242g
冰醋酸 57.1ml
0.5mol/dm3 EDTA（pH 值 8．0） 100ml
（8）10× BPB 貯存液
聚蔗糖 20%
EDTA 0.2mol/dm3
溴酚藍 0.25 %
二甲基腈藍 0.25%
本貯存液可在室溫存放。
（9）40mmol/dm3 亞精胺
亞精胺 0.58g
將亞精胺溶於 10ml 蒸餾水中，4℃下存放。
（10）溴化乙錠（EtBr）貯存液 （10mg/ml）
EtBr 1g
將EtBr 溶於 100ml 蒸餾水中，在棕色瓶存放，溫度保持在 4℃。
（11）變性液
NaCl 1.5mol/dm3
NaOH 0.5mol/dm3
（12）20×SSC（1 000ml）
NaCl 175.3g
檸檬酸鈉 88.2g
用 10mol/dm3 NaOH 調 pH 值至 7．0，高壓滅菌。
（13）雜交液
NaPO4 0.5mol/dm3
SDS 7 %
EDTA 1mmol/dm3
（14）標記反應終止液
聚葡萄糖藍 0.9%
溴甲酚紫 0.03%
EDTA 20mmol/dm3
4℃下存放。
（15）SephadexG-50 的水化
SephadexG-50 10g
將 SephadexG-50 溶於約 300ml TE（pH 值 8．0）中，高壓滅菌，4℃下存放。
（16）閃爍液（500ml）
無水乙醇 10ml
PPO 2g
PoPoP 50mg
二甲苯 490ml
室溫棕色瓶存放。
2.3 操作步驟
2.3.1 基因組DNA 的提取
（1）10ml 全血與 40mlT10E10 緩沖液混勻，4 000r/min 離心10 分鍾。
（2）棄上清液，在沉澱中加入 40mlT10E10 緩沖液混勻，4 000r/min 離心 10 分鍾。
（3）棄上清液，在沉澱中加入 40mlTE 緩沖液混勻，4 000r/min 離心 10 分鍾。
（4）棄上清液，在沉澱中加入10mlUSSTE 裂解液，混勻呈濁液，置搖床過夜，溫度保持
在37℃。
（5）加入 10ml 苯酚，緩慢上下混勻至少 20 分鍾，4 500r/min 離心 20 分鍾。
（6）用移液槍小心地將上層水相轉移到另一離心管中，吸頭的尖端剪去一小段，以免在
吸取過程中損傷大分子DNA。
（7）向水相中加入等體積的酚、氯仿、異戊醇（體積比為24:23:1），緩慢上下混勻15
分鍾，4 500r/min 離心20 分鍾。
（8）如前述吸出水相，向水相中加入等體積的氯仿、異戊醇（23:1），上下緩慢混合10
分鍾，4 500r/min 離心 20 分鍾。
（9）吸出水相，向水相中加入2 倍體積的預冷（—20℃）無水乙醇，蓋緊管蓋，上下顛
倒即可看見白色絮狀DNA。
（10）小心將絮狀DNA 吸（吸頭尖端剪去一小段，端部必須光滑）至1 .5ml 離心管中，加
入 1ml 70%的乙醇，來回顛倒數次離心管，10 000r/min 離心 2～5 分鍾。
（11）小心地倒掉管中乙醇，將管倒置在干凈的吸水紙上，以讓乙醇流盡。
（12）將離心管正立，置45℃烘箱中烤20 分鍾左右，以便讓乙醇完全揮發掉，如有條件，
可置於真空乾燥器中抽氣10 分鍾。
（13）取出離心管，視沉澱塊的大小加入 100～200μl TE 緩沖液，置55℃水浴中過夜，以
溶解 DNA。
（14）將溶解後的 DNA 置於 4℃或—20℃下貯存。
2.3.2 基因組DNA 的酶切
（1）每樣酶切反應為：
10μg DNA
1.5ml（15u） 限制性內切酶
6μl 10 倍 buffer
6μl 40mmol/dm3 亞精胺
加雙蒸水至體積為60μl，用吸頭混勻。
（2）37℃水浴，保持6～8 小時。
（3）取出酶切樣品置於4℃下。
2.3.3 基因組DNA 酶切情況檢查
（1）從每個酶切樣品中取出3μl 消化液，加入3μl 2 倍BPB 混勻後點樣。
（2）用 0.8%瓊脂糖凝膠（內含 0.5μg/ml EtBr）和 1 倍TAE 緩沖液進行電泳，電壓為60V。
（3）1 小時後，在紫外燈下檢查酶切是否完全及各樣品的DNA 濃度是否一致，以確保每
個樣品進行電泳時上樣量一致。
（4）如果發現某個樣品酶切不完全，則另外加入5μl 左右的酶，在37℃條件下水浴保溫6 小時。
（5）已完全酶切的樣品，加入1/10 體積（6μl）的電泳上樣緩沖液（10 倍BPB），混勻
後置4℃（短期）或—20℃（長期）保存。
2.3.4 大板凝膠的制備和電泳
（1）稱取3.75g 瓊脂糖，將其倒入一個500ml 容積的普通試劑瓶（透明度要高）中。用
蒸餾水將50 倍TAE 貯存液稀釋成1 倍TAE， 量取375ml 1 倍TAE 加入瓶中， 配製的凝膠
濃度為 1.0% 。
（2）蓋上瓶蓋，但不能旋得太緊。將瓶放入微波爐中加熱，待瓊脂糖完全熔化後，溶液
是透明的。
（3）取出瓶子放在55℃的水浴箱中，約30 分鍾後就能冷卻至55℃。
（4）洗凈並擦乾制膠板（24cm ×22cm），用 2cm 左右寬的透明膠布將制膠板的兩個開口
端封牢，放置在水平檯面上用水平儀調平。將樣品梳（ 6mm × 3mm ）插入制膠板離最近開口
端 2cm 位置。將冷卻至55℃的凝膠搖勻，緩慢地倒入制膠板中央，如果有氣泡出現，應用吸
頭將氣泡吸掉，60 分鍾後，制膠板中的凝膠將完全凝固。
（5）將 50ml 50 倍 TAE 貯存液倒入電泳槽中，再加入 2 450ml 蒸餾水與其混勻，電泳槽
也應置於水平檯面上。
（6）將制膠板兩端的透明膠布剝離，然後將制膠板放在電泳槽的中部，小心地拔出加樣
梳，以免加樣孔破裂。
（7）從 4℃冰箱中取出 DNA 樣品，另取兩個離心管，各加入 12μl（1μg/8μl）的分子量
標志物λDNA/EcoRⅠ+Hind Ⅲ 及 1/10 體積的（1.2μl）10 倍 BPB，混勻。將 DNA 樣品及
分子量標記物一起置於55℃水浴箱保溫10 分鍾，取出後立即置於冰水混和物中，2～3 分鍾後
點樣，這樣可防止粘性末端之間的粘接。
（8）加樣時每個樣品用一個吸頭，以免交叉污染。吸出樣品後應迅速插入加樣孔中下部，
輕輕推出樣品，在兩端加樣孔中各點入分子量標志物。
（9）蓋上電泳槽蓋，插上導線，在加樣後5 分鍾接通電流，以留出時間使加樣孔內的樣
品通過擴散而均勻分布，將電壓調至30V，電泳60 小時。
2.3.5 Southern 轉移
（1）電泳結束後，將制膠板連同凝膠一起放在一個方形塑料盤中，倒入約350ml（浸沒凝
膠）的 0.2mol/dm3HCl 處理 25 分鍾，並每過約5 分鍾搖動一次。
（2）倒掉稀鹽酸溶液，加入蒸餾水簡單地洗滌一下凝膠，然後倒掉蒸餾水，加入約350ml
的變性液浸泡30 分鍾，間斷性地搖動。
（3）倒掉變性液，加入350ml 0.5 倍變性液浸泡 25 分鍾，間斷性地搖動。
（4）將制膠板連同凝膠一起取出，將一塊約28cm×19.5cm 的玻璃板蓋在凝膠上，極其小
心地將制膠板倒翻過來，這時玻璃板在下，凝膠在上，輕輕地滑出制膠板，將玻璃板連同其
上的凝膠放在水平的桌面上。
（5）將一張20cm×19cm 的尼龍膜（註明樣品排列方向及電泳方向）在0.5 倍變性液中浸
濕，然後對齊凝膠小片段區域的頂端將尼龍膜鋪在凝膠的表面，用一根玻璃棒從膜的表面推
過以趕走膜與凝膠之間的氣泡，用牆紙刀切除掉凝膠的無用部分（未被尼龍膜覆蓋住的部
分）。操作時應戴上手套或用鑷子。
（6）將3 張稍大於膜的濾紙（20cm×20cm）依次在 0.5 倍變性液中浸濕，放置在膜上，每
放一張濾紙後都應用玻璃棒輕輕趕走氣泡。
（7）將一打（約4～5cm 厚）已裁至濾紙大小的干吸水紙放在濾紙層上，再將一塊玻璃板
放在吸水紙上，然後抓緊上下兩塊玻璃板迅速翻轉放在水平桌面上，抽去凝膠上面的玻璃板。
（8）在凝膠的四周露出的濾紙及吸水紙上放上保鮮膜，以防止凝膠上下的濾紙直接接觸。
然後將 5 張稍大於凝膠的濾紙（20cm ×20cm）依次在 0.5 倍變性液中浸濕，放置在膜上，每
放一張濾紙後都應用玻璃棒輕輕趕走氣泡。
（9）用一層保鮮膜將整個轉移裝置圍蓋住，以防水分蒸發，將一塊玻璃板壓在頂部。
（10）持續轉移3～4 小時後，去掉上面的濾紙和凝膠，取下尼龍膜放在2 倍SSC 中浸泡
20 分鍾，間斷性搖動，然後取出放在一張干凈的濾紙上，置60℃烘箱中烘30 分鍾，使DNA
固定於尼龍膜上。
（11）將烤乾的膜夾在兩張乾燥濾紙之間，置於室溫下保存待用。
2.3.6 探針的標記
（1）將80ng 探針DNA（體積<30μl）倒進一個新的0.5ml 離心管中，在沸水中煮5～10
分鍾，取出，插入碎冰中。
（2）然後依次在試管中加入下列成分：10μl 5 倍標記緩沖液（含隨機引物），2μl BSA
（10mg/ml），2μl dATP、dGTP、dTTP 等量混合物（濃度為各 20μmol/dm3）；30μl 滅菌蒸餾
水，50μl（α-32P）dCTP（10μCi/μl，3 000Ci/mmol）（至濃度為 333nmol/dm3）；lμl Klenow
酶（3u/μl）；最後體積為 50μl。
（3）將全部試劑混勻後置37℃保溫壺中保溫6 小時。
（4）加入等體積（50μl）的標記反應終止液終止反應。
2.3.7 未摻入核苷酸前體的除去
（1）取一0.5ml 離心管，在管底部打一小孔，用玻璃棉塞住小孔，外套一個1.5ml 離心
管。
（2）向0.5ml 的管中加滿TE 飽和的Sephadex G-50。
（3）3 000r/min 離心 5 秒鍾，重新加滿Sephadex G-50 後再離心，直到 Sephadex G-50
加滿0.5ml 小管的3/4。
（4）將標記反應液加入 0.5ml 管中，3 000r/min 離心數秒鍾。
（5）將1.5ml 管中的液體（藍色）移入另一1.5ml 離心管中。
（6）向0.5ml 管中加入 40μl TE，3 000r/min 離心數秒鍾。
（7）重復（5）、（6）步驟2～3 次，直到凝膠中的紫色即將到達0.5ml 管底部。
（8）將回收的探針置於4℃下待用。
2.3.8 探針放射性強度的測定
（1）取兩個液閃瓶，各加2ml 閃爍液。
（2）在其中一個液閃瓶內加入2μl 原標記反應液。
（3）在另一個液閃瓶內加人2μl 去除了未摻入核苷酸的回收液。
（4）將2 個液閃瓶置於液閃儀中，測定其cpm。
2.3.9 Southern 雜交
（1）將 25ml 雜交液放入方形塑料盒中，於 55℃下預熱。
（2）將待雜交的膜和雜交液一起放入水浴搖床中。
（3）在55℃下預雜交1.5 小時左右。
（4）將放射性探針放在沸水中5 分鍾，取出後迅速插入冰水中。
（5）在雜交液中按5×105cpm/ml 的濃度加入變性的探針。
（6）在55℃下雜交約15 小時。
（7）將雜交液中的膜取出，放入1 倍SSC 溶液中於55℃下漂洗10 分鍾。
（8）倒去1 倍SSC 溶液，在55℃下用1 倍SSC 溶液及0.1 %SDS 洗脫液漂洗40 分鍾。
（9）倒去洗脫液，55℃下用新的1 倍SSC 溶液及0.l%SDS 洗脫液漂洗30 分鍾。
（10）將膜放入1 倍SSC 溶液中，於室溫下漂洗10 分鍾。
（11）取出膜，平攤在潔凈、乾燥的濾紙上。
（12）當膜上無水珠、膜仍濕潤時，用保鮮膜將膜包好准備壓片。
2.3.10 放射自顯影
（1）在暗室或微弱安全光條件下，打開X 光曝光暗盒。
（2）放入一張增感屏，光滑面朝上。
（3）將膜放在增感屏上（膜與膜之間不能重疊）。
（4）置X 光膠片於膜上。
（5）將另一張增感屏光滑面朝下放在X 光膠片上。
（6）蓋緊X 光暗盒，置—70℃冰箱內曝光1～7 天。
2.3.11 X 光膠片的沖洗
（1）顯影：將X 光膠片從暗盒中取出，放入顯影液中，間斷性搖動數分鍾。
（2）停顯影：將X 光膠片放入1.5%的冰醋酸溶液中漂洗數秒鍾。
（3）定影：將X 光膠片轉入定影液中定影數分鍾。
（4）沖洗：將定影完畢的X 光膠片放在流水中沖洗20 分鍾，然後晾乾。
2.3.12 放射性探針的除去
（1）將300～500ml 蒸餾水煮沸。
（2）往蒸餾水中加SDS，至最終濃度0.l%。
（3）將放射自顯影後的膜浸入其中。
（4）待冷卻至室溫時將膜取出、烘乾，即可用於另一種探針的雜交。

⑺ 為什麼不可以用蒸餾水配置瓊脂糖凝膠

因為配置的瓊脂膠主要要求是達到無菌。因此普通的蒸餾水就不合適了。要採用無菌水來進行配置。這樣可以防止配置好的瓊脂中不會產生雜菌。

⑻ 如何配製2%瓊脂糖溶液

秤一克瓊脂糖，加100毫升蒸餾水。
但是，一般跑電泳的時候，需要加tae緩沖液，50×tae加2毫升，再加98毫升蒸餾水。
配瓊脂糖，差一兩毫升沒什麼影響的，我們實驗室用的是百分之二的。

⑼ 跑SDS-PAGE的電泳緩沖液需要什麼水來配製

1.配製電泳試劑用水蒸餾水就可以了就是單蒸水,如果條件允許的話,可以只用更好的當然純水是最好了;
2.一般實驗室都會有蒸餾水,雙蒸水,其實雙蒸水就能滿足大多數實驗室的要求,純水才是所謂的去離子水

⑽ 配置瓊脂糖膠時,可以用蒸餾水和高濃度的TAE液嗎

1.用蒸餾水將制膠工具洗干凈 准備好制膠平板 用瓊脂將模具邊緣封閉 架好梳回子
2.根據要分離的答樣品（DNA）大小配製合適濃度的瓊脂凝膠 准確的稱取一定量的瓊脂糖乾粉 加入到合適體積的錐形瓶中 加入一定量的電泳緩沖液（30ml左右TAE） 放入到微波爐內加熱融化 冷卻片刻（不燙手即可）
3.融化後的瓊脂溶液搖晃混勻 倒入電泳槽中 等其凝固
4.室溫下凝固30-40min左右 小心的拔出梳子 取出凝固好的凝膠放入電泳槽內 准備上樣
5.在電泳槽中倒入電泳緩沖液（TAE）沒過膠面1mm左右 去除膠孔內的氣泡
6.上樣 5ulDNA樣品加入1ul上樣緩沖液（loading buffer）和1ul的染料 用搶混勻後加入到凝膠孔內
.上樣結束 接通電源 紅色正極 黑色負極 DNA樣品有負極往正極運動 加樣孔側為負 40-50v電壓 電壓30敏左右即可（< 40min）
8.電壓結束 關閉電源 凝膠成像儀上觀察電壓位置並比對marker判斷大小