液相用蒸餾水前處理

❶ 使用蒸餾水之前,應進行什麼操作

氣密性試驗

❷ 做高效液相色譜是用純化水還是注射用水到底能不能用注射用水為什麼

純化水主要是指去除了重金屬離子的水，它可能含有微量的鈉離子等對版身體無害的元素；權注射用水是生理鹽水，是用蒸餾水加入適量的氯化鈉配製成的。

我們做試驗都是用的純化水，或者就是去賣大瓶的娃哈哈！！
沒有必要用注射用水！

❸ 液相色譜儀的使用方法以及注意事項有哪些!

高效液相色譜儀操作步驟： 1)．過濾流動相，根據需要選擇不同的濾膜。 2)．對抽濾後的流動相進行超聲脫氣10-20分鍾。 3)．打開HPLC工作站（包括計算機軟體和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統。 4)．進入HPLC控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。 5)．有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10 ml/min。 6)．調節流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。
7)．設計走樣方法。點擊file，選取select users and methods，可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊new method。選取需要的配件，包括進樣閥，泵，檢測器等，根據需要而不同。選完後，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進樣前的穩流，一般2-5分鍾；b.基線歸零；c.進樣閥的loading-inject轉換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。 8)．進樣和進樣後操作。選定走樣方法，點擊start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完後，點擊postrun，可記錄數據和做標記等。全部樣品走完後，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩餘物。 9)．關機時，先關計算機，再關液相色譜。 10)．填寫登記本，由負責人簽字。
高效液相色譜儀使用注意事項：
1、泵正常工作時，在流動相和流速不變的前提下柱壓應該是穩定的，當然在換流動相時壓力變化是正常的，正常情況下如果柱壓升高基本上都是由色譜柱使用時間長引起的（只有更換色譜柱），如果正常情況下壓力突然降低有可能是（1）接頭處有漏液的地方，採取的方法是有濾紙檢查，如有漏液的地方用扳手擰緊即可。如果沒有漏液則可能是（2）白色的管子裡面有氣泡從而導致流動相進不到泵裡面去，採取的方法是排氣泡排氣時：先STOP停泵—打開排氣閥—按PURGE（快沖）鍵—等氣泡排完後先STOP停泵—擰緊排氣閥，其先後步驟不要搞反了。
2、泵正常工作時最高壓力最好不要超過200KG，所以打開泵以後可以將泵的最大壓力調到200KG，這樣如果壓力超過上限則會自動報警停機，流速最好不用超過1ML/MIN，如果使用時壓力超過200KG，建議將流速調低點以降低壓力（在色譜柱正常的情況下），如果是因為色譜柱長時間使用造成壓力升高則建議更換色譜柱（因為色譜屬於耗材長時間使用就需要更換，更換的主要依據色譜柱出峰不正常或者柱壓力過高）。 3、泵正常工作時平均每15天左右向注油孔加潤滑油2~3滴。 4、流動相裡面如果有鹽或酸類，做完實驗後要先用95%二次蒸餾水與5%甲醇洗色譜柱40分鍾左右，然後用純甲醇洗30分鍾左右才可以關機。第二天如果繼續做實驗流動相裡面仍舊有鹽或酸類，最好先用95%二次蒸餾水與5%甲醇過度20分鍾，再用流動相。如果流動相裡面只有甲醇，水，乙腈。做完實驗後就不用95%二次蒸餾水5%甲醇沖洗，可直接用純甲醇洗30分鍾即可關機。 5、C18色譜柱的耐酸PH值范圍3—8使用時不要超出。 6、儀器長期不用時一定要將濾頭泡在甲醇里半月開機一次，如果開機時泵抽不上液可以打開排氣閥按PURGE快沖。 7、調反壓器時要注意等液體流出來以後才能調一般調8—10KG，比如現在泵顯示屏顯示柱壓50KG那再增加10KG顯示屏上顯示柱壓60KG然後擰緊鎖緊螺母。 8、色譜儀關機順序：清洗液路時可以把檢測器直接關機，清洗結束後先按STOP讓泵停止後在關電源不允許直接關機。

❹ 請說明下液相色譜的原理以及操作時候的注意點

原理：
高效液相色譜法是在經典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，在技術上，流動相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達4.9´107Pa）;色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高於經典液相色譜（每米塔板數可達幾萬或幾十萬）；同時柱後連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續檢測。
特點

1．高壓：液相色譜法以液體為流動相（稱為載液），液體流經色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達150～350×105Pa。
2. 高速：流動相在柱內的流速較經典色譜快得多，一般可達1～10ml/min。高效液相色譜法所需的分析時間較之經典液相色譜法少得多，一般少於 1h 。
3. 高效：近來研究出許多新型固定相，使分離效率大大提高。
4.高靈敏度：高效液相色譜已廣泛採用高靈敏度的檢測器，進一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測器靈敏度可達10-11g。另外，用樣量小，一般幾個微升。
5.適應范圍寬：氣相色譜法與高效液相色譜法的比較：氣相色譜法雖具有分離能力好，靈敏度高，分析速度快，操作方便等優點，但是受技術條件的限制，沸點太高的物質或熱穩定性差的物質都難於應用氣相色譜法進行分析。而高效液相色譜法，只要求試樣能製成溶液，而不需要氣化，因此不受試樣揮發性的限制。對於高沸點、熱穩定性差、相對分子量大（大於 400 以上）的有機物（這些物質幾乎佔有機物總數的 75% ～ 80% ）原則上都可應用高效液相色譜法來進行分離、分析。 據統計，在已知化合物中，能用氣相色譜分析的約佔20%，而能用液相色譜分析的約佔70～80%。

高效液相色譜按其固定相的性質可分為高效凝膠色譜、疏水性高效液相色譜、反相高效液相色譜、高效離子交換液相色譜、高效親和液相色譜以及高效聚焦液相色譜等類型。用不同類型的高效液相色譜分離或分析各種化合物的原理基本上與相對應的普通液相層析的原理相似。其不同之處是高效液相色譜靈敏、快速、解析度高、重復性好，且須在色譜儀中進行。
高效液相色譜法的主要類型及其分離原理
根據分離機制的不同，高效液相色譜法可分為下述幾種主要類型：

1 ．液 — 液分配色譜法(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography)

流動相和固定相都是液體。流動相與固定相之間應互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個明顯的分界面。當試樣進入色譜柱，溶質在兩相間進行分配。達到平衡時，服從於下式：

式中，cs—溶質在固定相中濃度；cm--溶質在流動相中的濃度； Vs—固定相的體積；Vm—流動相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即分離的順序取決於K，K大的組分保留值大；但也有不同之處，GPC中，流動相對K影響不大，LLPC流動相對K影響較大。

a. 正相液 — 液分配色譜法(Normal Phase liquid Chromatography): 流動相的極性小於固定液的極性。

b. 反相液 — 液分配色譜法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流動相的極性大於固定液的極性。

c. 液 — 液分配色譜法的缺點：盡管流動相與固定相的極性要求完全不同，但固定液在流動相中仍有微量溶解；流動相通過色譜柱時的機械沖擊力，會造成固定液流失。上世紀70年代末發展的化學鍵合固定相（見後），可克服上述缺點。現在應用很廣泛（70~80%）。

2 ．液 — 固色譜法

流動相為液體，固定相為吸附劑（如硅膠、氧化鋁等）。這是根據物質吸附作用的不同來進行分離的。其作用機制是：當試樣進入色譜柱時，溶質分子 (X) 和溶劑分子(S)對吸附劑表面活性中心發生競爭吸附（未進樣時，所有的吸附劑活性中心吸附的是S），可表示如下：

Xm + nSa ====== Xa + nSm

式中：Xm--流動相中的溶質分子；Sa--固定相中的溶劑分子；Xa--固定相中的溶質分子；Sm--流動相中的溶劑分子。

當吸附競爭反應達平衡時：

K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa]

式中：K為吸附平衡常數。[討論：K越大，保留值越大。]

3 ．離子交換色譜法(Ion-exchange Chromatography)

IEC是以離子交換劑作為固定相。IEC是基於離子交換樹脂上可電離的離子與流動相中具有相同電荷的溶質離子進行可逆交換，依據這些離子以交換劑具有不同的親和力而將它們分離。

以陰離子交換劑為例，其交換過程可表示如下：

X-(溶劑中) + (樹脂-R4N+Cl-)=== (樹脂-R4N+ X-) + Cl- (溶劑中)

當交換達平衡時：

KX=[-R4N+ X-][ Cl-]/[-R4N+Cl-][ X-]

分配系數為：

DX=[-R4N+ X-]/[X-]= KX [-R4N+Cl-]/[Cl-]

[討論：DX與保留值的關系]

凡是在溶劑中能夠電離的物質通常都可以用離子交換色譜法來進行分離。

4 ．離子對色譜法(Ion Pair Chromatography)

離子對色譜法是將一種 ( 或多種 ) 與溶質分子電荷相反的離子 ( 稱為對離子或反離子 ) 加到流動相或固定相中，使其與溶質離子結合形成疏水型離子對化合物，從而控制溶質離子的保留行為。其原理可用下式表示：

X+水相 + Y-水相 === X+Y-有機相

式中：X+水相--流動相中待分離的有機離子（也可是陽離子）；Y-水相--流動相中帶相反電荷的離子對（如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等）；X+Y---形成的離子對化合物。

當達平衡時：

KXY = [X+Y-]有機相/[ X+]水相[Y-]水相

根據定義，分配系數為：

DX= [X+Y-]有機相/[ X+]水相= KXY [Y-]水相

[討論：DX與保留值的關系]

離子對色譜法(特別是反相)發解決了以往難以分離的混合物的分離問題，諸如酸、鹼和離子、非離子混合物，特別是一些生化試樣如核酸、核苷、生物鹼以及葯物等分離。

5 ．離子色譜法(Ion Chromatography)

用離子交換樹脂為固定相，電解質溶液為流動相。以電導檢測器為通用檢測器，為消除流動相中強電解質背景離子對電導檢測器的干擾，設置了抑制柱。試樣組分在分離柱和抑制柱上的反應原理與離子交換色譜法相同。

以陰離子交換樹脂（R-OH）作固定相，分離陰離子（如Br-）為例。當待測陰離子Br-隨流動相（NaOH）進入色譜柱時，發生如下交換反應（洗脫反應為交換反應的逆過程）：

抑制柱上發生的反應：

R-H+ + Na+OH- === R-Na+ + H2O

R-H+ + Na+Br- === R-Na+ + H+Br-

可見，通過抑制柱將洗脫液轉變成了電導值很小的水，消除了本底電導的影響；試樣陰離子Br-則被轉化成了相應的酸H+Br-，可用電導法靈敏的檢測。

離子色譜法是溶液中陰離子分析的最佳方法。也可用於陽離子分析。
6 ．空間排阻色譜法(Steric Exclusion Chromatography)

空間排阻色譜法以凝膠 (gel) 為固定相。它類似於分子篩的作用，但凝膠的孔徑比分子篩要大得多，一般為數納米到數百納米。溶質在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來進行分離，而是按分子大小進行分離。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質的流動力學體積或分子大小有關。試樣進入色譜柱後，隨流動相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過。在試樣中一些太大的分子不能進入膠孔而受到排阻，因此就直接通過柱子，首先在色譜圖上出現，一些很小的分子可以進入所有膠孔並滲透到顆粒中，這些組分在柱上的保留值最大，在色譜圖上最後出現。

高效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、．分離系統、檢測系統和數據處理系統，下面將分別敘述其各自的組成與特點。

1．進樣系統

一般採用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恆定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。

2．輸液系統

該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l．47～4．4X107Pa，流速可調且穩定，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，這對提高解析度、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存錯和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質（即使僅有一個基團的差別或是同分異構體）都能獲得有效分離。

3.分離系統

該系統包括色譜柱、連接管和恆溫器等。色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管），內徑為2～5mm，由"優質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料製成，住內裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質和固定液構成）．固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達1000?）和比表面積大的特點，加之其表面經過機械塗漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣），或者用化學法偶聯各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機化合物。因此，這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯豌豆凝集素（PSA）後，就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。

另外，固定相基質粒小，柱床極易達到均勻、緻密狀態，極易降低渦流擴散效應。基質粒度小，微孔淺，樣品在微孔區內傳質短。這些對縮小譜帶寬度、提高解析度是有益的。根據柱效理論分析，基質粒度小，塔板理論數N就越大。這也進一步證明基質粒度小，會提高解析度的道理。

再者，高效液相色譜的恆溫器可使溫度從室溫調到60C，通過改善傳質速度，縮短分析時間，就可增加層析柱的效率。

4．檢測系統

高效液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。

（1）紫外檢測器

該檢測器適用於對紫外光（或可見光）有吸收性能樣品的檢測。其特點：使用面廣（如蛋白質、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；靈敏度高（檢測下限為10-10g／ml）；線性范圍寬；對溫度和流速變化不敏感；可檢測梯度溶液洗脫的樣品。

（2）示差折光檢測器

凡具有與流動相折光率不同的樣品組分，均可使用示差折光檢測器檢測。目前，糖類化合物的檢測大多使用此檢測系統。這一系統通用性強、操作簡單，但靈敏度低（檢測下限為10-7g／ml），流動相的變化會引起折光率的變化，因此，它既不適用於痕量分析，也不適用於梯度洗脫樣品的檢測。

（3）熒光檢測器

凡具有熒光的物質，在一定條件下，其發射光的熒光強度與物質的濃度成正比。因此，這一檢測器只適用於具有熒光的有機化合物（如多環芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質等）的測定，其靈敏度很高（檢測下限為10-12～10-14g／ml），痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可採用。

（5）數據處理系統

該系統可對測試數據進行採集、貯存、顯示、列印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。

操作注意要點：

1)． 首先對流動相進行過濾，根據需要選擇不同的濾膜，一般為有機系和水系，常用的孔徑為0.20um和0.45um。
2)． 對抽濾後的流動相進行超聲脫氣10-20分鍾。
3)． 正常情況下，儀器首先用甲醇沖洗10-20分鍾，然後再進入測試用流動相(如流動相為緩沖試劑，則要二次重蒸水沖洗10-20分鍾，直至色譜柱中有機相沖凈為止) 。
4)． 一般情況下，流動相沖洗20-30分鍾後，儀器方可穩定，最重要的是儀器基線走後，方可進樣測試。
5)． 同時進兩針標樣，將其結果相比較，其結果的比值在0.98-1.02之間後，就可以正式進行樣品的測試了。
6)． 樣品測試結束後，就要進行色譜儀及色譜柱的清洗和維護。如流動相為緩沖試劑，同樣也要用重蒸水清洗10-20分鍾，方可用有機相進行保護，否則，有損色譜柱。
7)． 關機時，先關計算機，再關液相色譜。
8)． 填寫登記本，由負責人簽字。

注意事項：
1)． 流動相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣後的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。
2)． 柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過柱子。
3)． 所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。
4)． 壓力不能太大，最好不要超過150kgf/cm2 .
5). 因為緩沖試劑遇有機溶劑，會結晶，有損色譜柱，所以，每次由有機相變流動相或流動相變有機相均需用蒸餾水清洗。

❺ 高效液相色譜儀的使用和原理分析

高效液相色譜儀(HPLC)是分析實驗室常用的測試儀器之一，其應用越來越廣泛。此種儀器在使用過程中，難免會出現各種各樣的問題，並將直接影響到所測數據的准確性和儀器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚預防和排除這些故障的方法，就可正確地使用儀器並最大限度地發揮儀器的性能。今天我們要從以下幾個方面和您分享下在使用高效液相色譜儀中需注意的幾個問題。

一、使用試管的問題

1、試管的潔凈問題。

高效液相色譜分析法是一個很靈敏的分析方法，如果因使用不潔凈的試管，便會影響試驗結果的准確性。例如，在用甲醇作溶劑來溶解樣品時，所用的小試管是用橡膠塞來做蓋子的，因此，在每次進樣時，都有一個保留時間固定的干擾峰存在，後經證實，此干擾峰是由甲醇浸泡橡膠塞而溶下的組分所產生，換用玻璃試管後，干擾峰消除。

2、塑料試管的溶解問題。

近年來，一次性塑料試管給試驗人員帶來了極大的方便，但是，在使用過程中一定要注意有機溶劑對試管的溶解現象，在利用此種試管提取樣品時，有些有機溶劑(如氯仿等)對管壁有溶解現象，這些被溶解下來的物質有時也能在檢測器上產生信號，從而干擾樣品的測定。這時，可用相同的實驗條件先行試驗一下，看看不含被抽提物時，提取液在檢測器上能否產生干擾信號，如確有干擾信號存在，就只能換用耐有機溶劑的玻璃試管了。

3、被測樣品在試管壁上的吸附問題。

這個問題也應引起注意，否則也會影響測試結果的准確性，在治療葯物監測(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中，有些被測葯物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃試管的管壁上，因此，操作中宜採用聚丙烯管，為防止提取中吸附現象的發生，可採用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑，可有效地防止吸附。

二、操作進樣閥的問題

目前，在分析型高效液相色譜儀中常用的進樣閥是7725型進樣閥，其內部的六通閥結構使進樣操作非常方便，但是，如果使用不當，也會帶來問題。例如，在高效液相色譜法的試驗過程中，有時會有異常色譜峰的出現以及重現性不好的問題，這主要是由於操作方法不當所引起，要想解決此類問題，需從以下幾個方面入手。

1、進樣量的控制。

用進樣閥來進樣時，閥內的樣品環是定量的，(一般分析型進樣閥的樣品環體積為20ul)，由於進樣時，注射到進樣閥內的樣品溶液在樣品環的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快)。因此，要想使樣品環中充滿樣品溶液，從而使用進樣閥來准確地定量，則必須使進樣量大於樣品環體積的2倍。如果用注射器來控制進樣量，則最大隻能注射樣品環體積1/2的量，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導致定量分析的誤差。

2、進樣閥的清潔問題。

如果樣品環中有上次進樣時樣品的殘留，必然會污染下次注射進的樣品，為防止這種現象的發生，應按下列步驟操作：a.進樣閥有2個位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時，以注射器將流動相注入進樣閥內清洗幾次，每次用量大約40ul；b.然後將進樣閥板手扳至INJECT位置時，再以流動相清洗幾次，每次用量還是40ul；c.最後，再將樣品注射到進樣閥里。

按照上述的步驟操作，可以避免由進樣閥引起的污染，從而使干擾峰消除並提高分析結果的准確性。

3、進樣閥溢流管的堵塞。

有時，進樣閥的溢流管會發生堵塞現象，向進樣閥內注射樣品時，注射針推不動。此故障是由於溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由於溶解樣品的流動相用的是鹽溶液，而其中的鹽在溢流管的排空埠處結晶所致。此時，可用小燒杯盛少量蒸餾水對溢流管口稍加浸泡，埠處鹽的結晶就能被溶解掉，故障排除。如能在每次進樣完成之後，用蒸餾水反復沖洗至溢流管中的鹽分全部沖出，則可避免此故障的發生。

三、流動相(MOBLLE PHASE)的問題

甲醇和乙腈在高效液相色譜分析法中常常被用來配製流動相。高效液相色譜法中常用的試劑最好是高等級的專用試劑，如色譜純試劑。在要求不太嚴格時，優級純甚至分析純的試劑也能用。高效液相色譜分析法中常用的是紫外檢測器，因此，從降低基線噪音和提高分析靈敏度上來考慮，應該使用紫外吸收小且雜質含量少的色譜純試劑。

1、流動相的過濾。

配製好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因為溶液中含有很多肉眼難以發現的微小顆粒，如果不把它們濾除掉，就會堵塞泵口、柱頭上的過濾器，這樣就堵塞了流動相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。碰到這種情況時，要換用經過濾的流動相，並將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機清洗20分鍾，以除去濾片上的堵塞物。

2、流動相的脫氣。

流動相在使用前必須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動相中的氣體，否則，這些氣體會使柱填料的性能降低，還能夠對檢測器的信號產生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮氣脫氣等。真空脫氣法和氮氣流脫氣法是目前最常用的脫氣法。水和甲醇混合後會產生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會進入色譜柱和檢測器，並將影響分析工作的正常進行。

四、色譜柱的使用和保養

色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被測物質能否被很好的分離和測定，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應特別注意色譜柱的正確使用和維修保養，以延長色譜柱的使用壽命。

1、使用預柱和保護柱。

預柱(pre-column)安裝於泵和進樣器之間，它給色譜柱中的流動相提供了完全的平衡，並防止了對柱填料有破壞作用的組分或污染物進入色譜柱。保護柱(guard column)可以阻擋能夠牢固地吸附於色譜柱上的組分進入色譜柱，保護柱應與色譜柱的填料相同。預柱和保護柱可以經常更換，而不需要經常更換色譜柱，這就延長了色譜柱的使用壽命。

2、防止氣體進入色譜柱。

有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進入的，否則將會使柱效降低甚至形成微小的難以驅除的氣室。因此，為了防止氣泡進入色譜柱，一定要使用經過脫氣的流動相，並且要嚴格按照下列步驟來安裝色譜柱。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲，觀察是否有溶劑滲出；b.如有溶劑滲出，即可將色譜柱接到管路上，以避免氣泡的進入；c.如無溶劑滲出時，表明色譜柱的此端已經進去空氣了，此時，可將色譜柱的出口端接到進樣閥上，以流動相來反方向沖洗色譜柱，以便將柱內的空氣排除。最好以0.2ml/min的小流量來沖色譜柱，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會導致柱性能的降低；d.如果流出的溶劑里不含有氣泡，說明柱內的氣體已經被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進不到色譜柱裡面了。

3、色譜柱的清洗。

為了不使被測物質和雜質停留在色譜柱中，在每次的樣品分析工作完成之後，都應及時地清洗色譜柱。首先要用對被測樣品洗脫能力強的溶劑來洗脫色譜柱，以分析工作中常用的反相色譜分析法為例，因其先流出的物質是極性大的物質，此時應用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內的極性小的物質洗脫下來，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩沖溶液，則應先用蒸餾水來沖洗色譜柱，以沖掉柱內的鹽，然後再用合適的溶劑來沖洗。

凝膠濾過色譜法(Gel Filtration Chromatography)中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動相，用完之後當然要用蒸餾水來沖洗。如果是連續操作，可以將緩沖溶液置於柱內過夜，但最好是維持小流速(＜0.5ml/min)以防止緩沖鹽的析出，如果流動相中含有鹵化物，即使是停一夜，也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗干凈，以防止它們對柱體的腐蝕。

4、色譜柱的存放。

如果色譜柱暫時不用，存放時要注意以下幾點：

a.幾天之內的短期放置，應先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來沖洗)，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。

b.如果色譜柱長期不用，僅用上述方法來處理就不行了，這時應使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱，反相柱一般使用甲醇，正相柱則可用正已烷或庚烷，而凝膠柱則不能用水了，因柱內如果有微生物的生長則會使柱效降低，此時應用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱，再將色譜柱封嚴。色譜柱長期放置時，一定要將色譜柱的兩端封嚴，以防止由於溶劑揮發而造成的柱填料干縮現象，因這可導致柱效的嚴重降低。

c.色譜柱應貯存在室溫下，如果放置於0℃以下的環境里，柱內就會結冰，這也將導致柱效的降低。

高效液相色譜儀的構造高效液相色譜儀（HPLC）一般由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、記檢測系統、數據處理系統等幾部分組成。制備型儀器還需配有餾份收集系統。為了取得較好的分析結果，HPLC儀器對於准確度、精確度、靈敏度及結果重現性有較高的要求。

高效液相色譜儀的工作原理

儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式列印出來。

(5)液相用蒸餾水前處理擴展閱讀：

高效液相色譜儀的構造高效液相色譜儀（HPLC）一般由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、記檢測系統、數據處理系統等幾部分組成。制備型儀器還需配有餾份收集系統。為了取得較好的分析結果，HPLC儀器對於准確度、精確度、靈敏度及結果重現性有較高的要求。

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高壓輸液系統

高壓輸液系統包括：溶劑儲液瓶、溶劑脫氣裝置、高壓輸送泵以及梯度洗脫裝置。其中，高壓輸液泵是高效液相色譜儀的主要部件之一，輸送壓力達150—350×105Pa。輸液系統要為HPLC儀器提供流量恆定、准確、無脈沖的流動相，流量的精度和長期的重復性要好，同時還要提供精度好、准確度高、重現性好的多元溶劑梯度。因此，輸液泵的好壞直接影響著整個系統的質量和分析結果的可靠性。

進樣系統：進樣能在試樣引入色譜柱，有六個介面：1,4之間接定量環；2接高壓泵；3接色譜柱；5,6接廢液管。

色譜分離系統：色譜柱通常為不銹鋼柱，內裝各種填充劑。常用的填料為硅膠，可用於正相色譜;化學鍵合固定相，根據鍵合的基團不同，可用於反相或正相色譜。其中、最常用的是十八烷基鍵合硅膠，即ODS柱，可用於反相色譜或離子對色譜。

檢測系統：檢測系統用於連續檢測色譜柱流出的物質，進行定性定量分析。要求其靈敏度高、噪音小、基線穩定、響應值的線性范圍寬等。近年來各國都在研究開發新的檢測技術，進一步擴大了HPLC的應用。

根據檢測需要的不同檢測器可分為紫外檢測器(UVD)、示差折光檢測器(RID)、電化學檢測器(ECD)、紅外檢測器(IRD)、核磁共振檢測器(NMRD)、質譜檢測器(MSD)、蒸發光散射檢測器(ELSD)、小角度激光散射檢測器(LALLSPD)。

數據處理系統：高效液相色譜的分析結果除可用記錄儀繪制譜圖外，還可使用微處理機和色譜數據工作站來記錄和處理色譜分析的數據。

❻ 液時，所用蒸餾水為什麼需預先煮沸

因為蒸餾水和空氣中都有二氧化碳。當巴比妥類葯物的鈉鹽或苯妥英鈉注射液中溶入二氧化碳時,就會分解成不溶於水的巴比妥類葯物和苯妥英,而使溶液變渾濁。所以,配製巴比妥類葯物的鈉鹽或苯妥英鈉注射液時,所用蒸餾水需預先煮沸,接觸的空氣要用氫氧化鈉液處理。

❼ 滴定管和移液管使用前應該如何處理為什麼

用蒸溜水清洗凈，因為管內可能有存留的化學溶液，影響試驗的結果。滴定管在使用要前清除泡，管顯示讀數與實際用液相符。

❽ 流動相用蒸餾水配會壞嗎

流動相用蒸餾水配會壞。
液相用最少也要二次蒸餾水的，不然水中的雜質會嚴重損害色譜柱。
流動相是指流經色譜系統的液體或氣體，使要分離的物料以不同的速率在固定相上移動。

❾ 液相色譜所用流動相使用時應注意哪些問題

1、流動相恢復到室溫後使用。流動相溫度與室溫相差時，流動相在恢復到室溫前，基線水平很難穩定，特別是發生漂移，也容易產生氣泡等現象。水與有機溶劑混合時，混合液變化大，往往會與室溫相差很大，務必注意。

2、做HPLC流動相的試劑應用HPLC級的、水應用二次蒸餾水，水相流動相需經常更換，防止長菌變質。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）並不合適、尤其是做梯度洗脫時，水中的不純物會成為鬼峰，從而干擾分析結果。

3、流動相的pH值過高或過低，流動相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學破壞，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的。

4、用緩沖鹽做流動相時，在使用前和使用後都要用水清洗流路，絕對禁止將緩沖溶液留在流路中靜置或更長時間。

5、在更換兩種互不相容的流動相時，中間要用異丙醇溶液清洗過渡。例如：先用甲醇水做流動相，然後再用正己烷做流動相時，一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然後用正己烷沖洗異丙醇，反之也是一樣。在更換流動相時還要考慮色譜柱是否更換。

❿ 新買的高效液相色譜柱在正式使用之前需要做什麼比如什麼配比的流動相沖洗

主要是看你購買的是哪個品牌的液相，首先應該進行性能測試，對各個部件的性能有所了解，大部分的液相都可以用乙腈比水進行沖洗系統，希望我的答案能幫到你。