Ⅰ 傳祺ga3用什麼樣的冷卻液
防凍液的全稱應該叫防凍冷卻液,是指有防凍功能的冷卻液。 汽車的防凍冷卻液種類很多,一般來講-25℃,-35℃的商品為市場主流.北方極端地區小編推薦使用-60℃. 汽車的防凍冷卻液除防凍外,防凍冷卻液還具有以下幾種功能: 第一個是防腐蝕功能。發動機及其冷卻系統是金屬製造的,有銅、有鐵、有鋁、有鋼還有焊錫。這些金屬在高溫下與水接觸,時間長了都會遭到腐蝕,會生銹。而防凍冷卻液不僅不會對發動機冷卻系統造成腐蝕,還具有防腐和除銹功能。 第二個是防凍冷卻液的沸點高。水的沸點是100℃,優質防凍冷卻液的沸點通常在零上110℃,這樣在夏季使用,防凍冷卻液比水更難開鍋。 第三是防凍冷卻液可以防垢,用水作冷卻液最讓司機頭疼的就是水垢問題,水垢附著在水箱、水套的金屬表面,使散熱效果越來越差,而且清除起來也很困難。優質的冷卻液採用蒸餾水製造,並加有防垢添加劑,不但不生水垢還具有除垢功能。當然,如果你的水箱水垢很厚,最好還是先用水箱清洗劑徹底清洗後再添加冷卻液。 選擇-35的就完全可以
Ⅱ 植物組培步驟
組織培養的步驟
一、培養基配製
配製培養基有兩種方法可以選擇,一是購買培養基中所有化學葯品,按照需要自己配製;二是購買商品的混合好的培養基基本成分粉劑,如MS、B5等。
自己配製可以節約費用,但浪費時間、人力、且有時由於葯品的質量問題,給實驗帶來麻煩。就目前國內的情況看,大部分還是自己配製。為了方便起見,現以MS培養基為例介紹配置培養基的主要過程。
1、配製幾種母液
(1)配製MS大量元素母液
一般將大量元素分別配製成100倍的母液,使用時再分別稀釋100倍。
分別稱取
NH4NO3 165g KH2PO4 17g
KNO3 190g CaCl2·2H2O 44g
MgSO4·7H2O 37g
各自配成1L的母液。倒入1L試劑瓶中,存放於冰箱中。
(2)配製MS微量元素母液
一般將微量元素配製成100倍母液。
依次稱取
KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025g
H3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025g
MnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025g
ZnSO4·7H2O 0.86g
配成1L母液,倒入1L試劑瓶中,存放於冰箱中。
CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由於稱取量很小,如果天平精確度沒有達到萬分之一,可先配成調整液。
分別稱取
CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g
各自配成100ml的調整液,然後取5ml就還有0.0025g的量。
(3)配製MS有機母液
一般配製成100倍MS有機母液。
依次稱取
肌醇 10g 鹽酸硫胺素(VB1) 0.01g
煙酸 0.05g 甘氨酸 0.2g
鹽酸吡哆醇(VB6) 0.05g
配成1L母液,倒入1L試劑瓶中,存放於冰箱中。
(4)配製MS鐵鹽母液
一般配製成100倍MS鐵鹽母液。
依次稱取
EDTA二鈉 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g
配成1L母液,倒入1L試劑瓶中,存放於冰箱中。
所以MS母液有5種大量元素母液,加上MS微量元素母液、MS有機母液和MS鐵鹽母液,共8種母液。
激素母液的配製
各種生長素和細胞分裂素要單獨配製,不能混合在一起,生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當量的NaOH溶解,細胞分裂素一般要先用1當量的鹽酸溶解,然後再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。
2、配製培養基
以配置1L MS培養基為例,按順序進行如下操作:
(1)先在燒杯中放入一些蒸餾水。
(2)分別取上面八種母液10ml倒入。
(3)一般稱取30g蔗糖倒入,攪拌溶解。
(4)加蒸餾水用量筒定溶至1L。
(5)按設計好的方案添加各種激素,由於激素的用量很小,而且激素對組培植物的生長至關重要。所以有條件的話最好用微量可調移液器吸取,減少誤差。
(6)用精密試紙或酸度計調整PH至5.7-5.8。(有條件的話使用酸度計,比較精確) 可配1當量的HCL和1當量的NaOH用來調溶液PH值。
1當量HCL配製:用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。
1當量NaOH配製:稱取NaOH 4g 配成100ml溶液。
(7)稱取5g左右瓊脂粉(質量好的瓊脂粉),倒入上面配好的溶液中,放在電爐上加熱至沸騰,直到瓊脂粉熔化。
(8)稍微冷卻後,分裝入培養容器中。無蓋的培養容器要用封口膜或牛皮紙封口,用橡皮筋或繩子扎緊。
(9)放入消毒滅菌鍋滅菌,滅菌20分鍾左右。
(10)滅菌後從滅菌鍋中取出培養基,平放在實驗台上令其冷卻凝固。
Ⅲ 高中生物必修三問題
這是我的答案:1、多株長勢相同的正常玉米幼苗 2、等體積的蒸餾水 3計算甲乙兩組幼苗的平均高度 結果:甲組明顯高於乙組 最後一個結論和你的一樣。第一個問題都用病毒處理減少了偶然誤差 第2個問題你說的對,如果用別的就會不是單一變數了,但如果用同樣的赤黴素處理,那麼兩組實驗就都一樣了,沒有變數了,所以我們用等體積的蒸餾水,也可以說是空白實驗,這不就可以了…
Ⅳ 當稱量20mgGA3時,配製200ppm的濃度需要多少蒸餾水溶解
水溶解的話,密度的話已經夠了,總解的話要到一兩升熱水。
Ⅳ 簡述植物組織培養的步驟
植物組織培養方法 1 MS培養基的配製包括以下步驟。
培養基母液的配製和保存 MS培養基含有近30種營養成分,為了避免每次配製培養基都要對這幾十種成分進行稱量,可將培養基中的各種成分,按原量的20倍或200倍分別稱量,配成濃縮液,這種濃縮液叫做培養基母液。這樣每次使用時,取其總量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀釋,製成培養液。現將制備培養基母液所需的各類物質的量列出,供配製時使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg/L
NH4NO3 33 000
KNO3 38 000
CaCl2·2H2O 8 800
MgSO4·7H2O 7 400
KH2PO4 3 400
微量元素(母液Ⅱ)
KI 166
H3BO3 1 240
MnSO4·4H2O 4 460
ZnSO4·7H2O 1 720
Na2MoO4·2H2O 50
CuSO4·5H2O 5
CoCl2·6H2O 5
鐵鹽(母液Ⅲ)
FeSO4·7H2O 5 560
Na2-EDTA·2H2O 7 460
有機成分(母液Ⅳ)
ⅣA
肌醇 20 000
ⅣB
煙酸 100
鹽酸吡哆醇(維生素B6) 100
鹽酸硫胺素(維生素B1) 100
甘氨酸 400
以上各種營養成分的用量,除了母液Ⅰ為20倍濃縮液外,其餘的均為200倍濃縮液。
上述幾種母液都要單獨配成1 L的貯備液。其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配製方法是:每種母液中的幾種成分稱量完畢後,分別用少量的蒸餾水徹底溶解,然後再將它們混溶,最後定容到1 L。
母液Ⅲ的配製方法是:將稱好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分別放到450 mL蒸餾水中,邊加熱邊不斷攪拌使它們溶解,然後將兩種溶液混合,並將pH調至5.5,最後定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
各種母液配完後,分別用玻璃瓶貯存,並且貼上標簽,註明母液號、配製倍數、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。
MS培養基中還需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6-苄基嘌呤(6BA)等植物生長調節物質,並且分別配成母液(0.1 mg/mL)。其配製方法是:分別稱取這3種物質各10 mg,將2,4-D和NAA用少量(1 mL)無水乙醇預溶,將6BA用少量(1 mL)的物質的量濃度為0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解過程需要水浴加熱,最後分別定容至100 mL,即得質量濃度為0.1 mg/mL的母液。
配製培養液 用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用量:母液Ⅰ為50 mL,母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。再取2,4-D 5 mL、NAA 1 mL,與各種母液一起放入燒杯中。
配製培養液時應注意:①在使用提前配製的母液時,應在量取各種母液之前,輕輕搖動盛放母液的瓶子,如果發現瓶中有沉澱、懸浮物或被微生物污染,應立即淘汰這種母液,重新進行配製;②用量筒或移液管量取培養基母液之前,必須用所量取的母液將量筒或移液管潤洗2次;③量取母液時,最好將各種母液按將要量取的順序寫在紙上,量取1種,劃掉1種,以免出錯。
溶化瓊脂 用粗天平分別稱取瓊脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中,再加入蒸餾水750 mL,用電爐加熱,邊加熱邊用玻璃棒攪拌,直到液體呈半透明狀。然後再將配好的混合培養液加入到煮沸的瓊脂中,最後加蒸餾水定容至1 000 mL,攪拌均勻。
調pH 用滴管吸取物質的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液,逐滴滴入溶化的培養基中,邊滴邊攪拌,並隨時用精密的pH試紙(5.4~7.0)測培養基的pH,一直到培養基的pH為5.8為止(培養基的pH必須嚴格控制在5.8)。
2 BA為細胞分裂素 NAA 是萘乙酸,為生長素的一種
3 適於百合根的激素暫時沒找到
以下是葉片和胚的激素:對麝香百合 (LiliumlongiflorumThunb)葉片進行離體培養 ,可成功獲得無菌苗。試驗結果表明 :培養基MS +BA 0 1mg/L +NAA 1 0mg/L適於初代培養 ,有助於根和芽的分化 ;MS +BA 0 5mg/L +NAA1 5mg/L適於增殖培養 ,利於愈傷組織的產生 ,並促進芽的分化 ;生根培養基為 1/ 2MS +NAA 1 0mg/L +多效唑 10 0mg/L ;當試管苗根長 1cm時移栽易成活
在含有1 mg/ L IAA,1 m g/ L GA3,6 0 0 m g/ L CH的 MS培養基上培養 ,蔗糖含量為 6 %~ 8%時 ,百合幼胚胚性生長最好 ,培養 30 d後可以得到正常胚 .在含有 0 .1 m g/ L NAA,1 m g/ L BA的 MS培養基上可以形成淡綠色的愈傷組織 ,將這些愈傷組織轉移到 1 / 2 MS無激素的培養基上培養可以形成大量的不定芽 ,不定芽生根移栽後 ,其成活率可達90 %以上
Ⅵ 植物體細胞培養基操作
樓主好!! 實驗八 培養基的制備與滅菌 一、目的要求1. 掌握微生物實驗室常用玻璃器皿的清洗及包紮方法。2. 掌握培養基的配置方法。3. 掌握乾熱滅菌和高壓蒸汽滅菌的操作方法。二、基本原理 正確掌握培養基的配製方法是從事微生物學實驗工作的重要基礎。由於微生物種類及代謝類型的多樣性.因而用於培養微生物的培養基的種類也很多,它們的配方及配製方法雖各有差異。但一般培養基的配製程序卻大致相同.例如器皿的准備,培養基的配製與分裝,棉塞的製作,培養基的滅菌,斜面與平板的製作以及培養基的無菌檢查等基本環節大致相同。三、實驗材料1. 葯品:待配各種培養基的組成成分、瓊脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。2. 儀器及玻璃器皿:天平、高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、三角瓶、培養皿、玻璃漏斗等。3. 其他物品:葯匙、稱量紙、pH試紙、記號筆、棉花等。四、操作步驟(一)玻璃器皿的洗滌和包裝1.玻璃器皿的洗滌玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。將三角瓶、試管、培養皿、量筒等浸入含有洗滌劑的水中.用毛刷刷洗,然後用自來水及蒸餾水沖凈。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡,再用自來水及蒸餾水沖洗。洗刷干凈的玻璃器皿置於烘箱中烘乾後備用。2.滅菌前玻璃器皿的包裝(1) 培養皿的包紮:培養皿由一蓋一底組成一套,可用報紙將幾套培養皿包成一包,或者將幾套培養皿直接置於特製的鐵皮圓筒內,加蓋滅菌。包裝後的培養皿須經滅菌之後才能使用。(2)
圖8-1 移液管的包紮移液管的包紮:在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脫脂棉),它的作用是避免外界及口中雜菌進入管內,並防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應距管口約0.5cm左右,棉花自身長度約1~1.5cm。塞棉花時.可用一外圍拉直的曲別針、將少許棉花塞入管口內。棉花要塞得松緊適宜,吹時以能通氣而又不使棉花滑下為准。先將報紙裁成寬約5cm左右的長紙條,然後將已塞好棉花的移液管尖端放在長條報紙的一端,約成45℃角,折疊紙條包住尖端,用左手握住移液管身,有手將移液管壓緊.在桌面上向前搓轉,以螺旋式包紮起來。上端剩餘紙條,折疊打結,准備滅菌。(二)液體及固體培養基的配製過程1.液體培養基配製1) 稱量:一般可用0.01g天平稱量配製培養基所需的各種葯品,先按培養基配方計算出各成分的用量.然後進行准確稱量。2) 溶解:將稱好的葯品置於一燒杯中,先加入少量水(根據實驗需要可用自來水或蒸餾水),用玻璃棒攪動,加熱溶解。3) 定容:待全部葯品溶解後,倒入一量筒中,加水至所需體積。如某種葯品用量太少時,可預先配成較濃溶液,然後按比例吸取一定體積溶液,加入至培養基中。4) 調pH:一般用pH試紙測定培養基的pH。用剪刀剪出一小段pH試紙,然後用鑷子夾取此段pH試紙,在培養基中蘸一下,觀看其pH范圍,如培養基偏酸或偏鹼時,可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液進行調節。調節pH時,應逐滴加入NaOH或HCI溶液,防止局部過酸或過鹼,破壞培養基中成分。邊加邊攪拌,並不時用pH試紙測試,直至達到所需pH為止。5) 過濾:用濾紙或多層紗布過濾培養基。一般無特殊要求時,此步可省去。2.固體培養基的配製 配製固體培養基時,應將已配好的液體培養基加熱煮沸,再將稱好的瓊脂(1.5~2%)加入,並用玻棒不斷攪拌,以免糊底燒焦。繼續加熱至瓊脂全部融化,最後補足因蒸發而失去水分。(三)培養基的分裝 根據不同需要,可將已配好培養基分裝入試管或三角瓶內,分裝時注意不要使培養基沾污管口或瓶口,造成污染。如操作不小心,培養基沾污管口或瓶口時,可用鑷子夾一小塊脫脂棉,擦去管口或瓶口的培養基,並將脫脂棉棄去。1.試管的分裝取一個玻璃漏斗,裝在鐵架上,漏斗下連一根橡皮管,橡皮管下端再與另一玻璃管相接,橡皮管的中部加一彈簧夾。分裝時,用左手拿住空試管中部,並將漏斗下的玻璃管嘴插入試管內,以右手拇指及食指開放彈簧夾,中指及無名指夾佐玻璃管嘴,使培養基直接流入試管內。裝入試管培養基的量視試管大小及需要而定,若所用試管大小為15×150 mm時,液體培養基可分裝至試管高度1/4左有為宜;如分裝固體或半固體培養基時,在瓊脂完全融化後,應趁熱分裝於試管中。用於製作斜面的固體培養基的分裝量為管高1/5(約3—4mI),半固體培養基分裝量為管高的1/3為宜。2.三角瓶的分裝圖8-2培養基的分裝 用於振盪培養微生物時,可在250 m1三角瓶中加入50 m1的液體培養基;若用於製作平板培養基用時,可在250 m1三角瓶中加入150ml培養基,然後再加入3g瓊脂粉(按2%計算),滅菌時瓶中瓊脂粉同時被融化。(四)棉塞的製作及試管、三角瓶的包紮 為了培養好氣性微生物,需提供優良通氣條件,同時為防止雜菌污染,則必須對通入試管或三角瓶內空氣預先進行過濾除菌。通常方法是在試管及三角瓶口加上棉花塞等。1.試管棉塞的製作制棉塞時,應選用大小、厚薄適中的普通棉花一塊,鋪展於左手拇指和食指扣成的團孔上,用右手食指將棉花從中央壓入團孔中製成棉塞.然後直接壓入試管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入,也可用折疊卷塞法製作棉塞。製作的棉塞應緊貼管壁,不留縫隙,以防外界微生物沿縫隙侵入,棉塞不宜過緊或過松,塞好後以手提棉塞,試管不下落為准。棉塞的2/3在試管內,1/3在試管外。目前也有採用硅膠塞代替棉塞直接蓋在試管口上。將裝好培養基並塞好棉塞或硅膠塞的試管捆成一捆,外麵包上一層牛皮紙。用記號筆註明培養基名稱及配製日期,滅菌待用。
圖8-3 棉塞的製作
圖8-4 正確與不正確的棉塞1.金屬塞 2正確 3、4不正確 2.三角瓶棉塞製作通常在棉塞外包上一層紗布,再塞在瓶口上。有時為了進行液體振盪培養加大通氣量,則可用8層紗布代替棉塞包在瓶口上,目前也有採用硅膠塞直接蓋在瓶口上。在裝好培養基並塞好棉塞或包紮八層紗布或蓋好硅膠塞的三角瓶口上,再包上一層牛皮紙並用線繩捆好,滅菌待用。(五)培養基的滅菌培養基經分裝包紮後,應立即按配製方法規定的滅菌條件進行進行高壓蒸汽滅菌。(六)斜面和平板的製作1.斜面的製作將已滅菌裝有瓊脂培養基的試管,趁熱置於木棒或玻棒上,使成適當斜度,凝固後即成斜面。斜面長度不超過試管長度l/2為宜。如製作半團體或固體深層培養基時,滅菌後則應垂直放置至凝固。2.平板的製作將裝在三角瓶或試管中已滅菌的瓊脂培養基融化後,待冷至50℃左右傾入無菌培養皿中。溫度過高時,皿蓋上的冷凝水太多;溫度低於50℃,培養基易於凝固而無法製作平板。平板的製作應在火旁進行,左手拿培養皿,右手拿三角瓶的底部或試管,左手同時用小指和手掌將棉塞打開,灼燒瓶口,用左手大拇指將培養皿蓋打開一縫,至瓶口正好伸入,傾入10~15mL培養基,迅速蓋好皿蓋,置於桌上,輕輕旋轉平皿,使培養基均勻分布於整個平皿中,冷凝後即成平板。(七)培養基的滅菌檢查滅菌後的培養基,一般需進行無菌檢查。最好取出1~2管(瓶),置於37℃溫箱中培養1~2天,確定無菌後方可使用。(八)無菌水的制備在每個250mL的三角瓶內裝100mL的蒸餾水並塞上棉塞或硅膠塞。在每支試管內裝4.5mL蒸餾水,塞上棉塞或硅膠塞。再在棉塞上包上一張牛皮紙,高壓蒸汽滅菌。0.1MPa滅菌20~30min。五、實驗內容1. 根據要求清洗各種玻璃器皿,並進行包紮。2. 根據要求配製各種培養基。3. 用電熱鼓風乾燥箱對玻璃器皿進行乾熱滅菌。4. 用高壓蒸汽滅菌鍋對所配各培養基滅菌。六、實驗報告1. 簡述移液管和培養皿的包紮注意事項。2. 簡述配製培養基的基本步驟及注意事項。3. 為什麼微生物實驗室所用的移液管口或滴管口的上端均需塞入一小段棉花,再用報紙包起來,經高壓蒸汽滅菌後才能使用?4. 為什麼微生物實驗室所用的三角瓶口或試管口都要塞上棉塞(硅膠塞)才能使用?5. 配製培養基時為什麼要調節pH?6. 高壓蒸汽滅菌為什麼比乾熱滅菌要求溫度低、時間短? 附錄 滅菌技術一、目的要求了解消毒和滅菌的原理,並掌握各種滅菌方法的操作步驟。二、實驗材料1. 儀器或其他用具:上述包紮的培養皿、試管、移液管等,電熱鼓風乾燥箱,高壓蒸汽滅菌鍋,微孔濾膜過濾器,0.22μm濾膜,注射器,鑷子,玻璃塗棒。2. 培養基:上述配製的培養基及生理鹽水三、基本原理在微生物實驗中,需要進行純培養,不能有任何雜菌污染,因此必須對所用器材、培養基和工作場所進行滅菌和消毒。滅菌是指殺死一定環境中的所有微生物,包括微生物的營養體、芽孢和孢子。實驗室常用的滅菌方法包括直接灼燒、恆溫乾燥箱滅菌、高壓蒸汽滅菌、間歇滅菌、煮沸滅菌等方法。這些方法的基本原理是通過加熱使微生物體內蛋白質凝固變性,從而達到滅菌的目的。四、操作步驟(一)乾熱滅菌法乾熱滅菌是在電熱乾燥箱內利用高溫乾燥空氣(160℃~170℃)進行滅菌,它是利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而達到滅菌目的。此法適用於玻璃器皿如移液管、試管和培養皿的滅菌。培養基、橡膠製品、塑料製品不能採用乾熱滅菌。細胞內的蛋白質凝固性與其本身的含水量有關,在菌體受熱時,當環境和細胞內含水量越大,則蛋白質凝固就越快,反之含水量越小,凝固越慢。因此,與濕熱滅菌相比,乾熱滅菌所需溫度高(160℃~170℃),時間長(1~2h)。但乾熱滅菌溫度不能超過180℃,否則,包器皿的紙或棉塞就會燒焦,甚至引起燃燒。乾熱滅菌使用的是電熱乾燥箱(乾燥箱)。具體操作步驟如下:1. 裝入待滅菌物品:將包好的待滅菌物品放入電熱乾燥箱內,關好箱門。堆積時要留有空隙,物品不要擺放得太擠,以免妨礙空氣流通,滅菌物品不要接觸電熱乾燥箱內壁的鐵板、溫度探頭,以防包裝紙烤焦起火。2. 升溫:接通電源,打開開關,適當打開電熱乾燥箱頂部的排氣孔,旋動恆溫調節器,使溫度逐步上升。當溫度升至100℃時,關閉排氣孔。在升溫過程中,如果紅燈熄滅,綠燈亮,表示電熱乾燥箱內停止加溫,此時如果還未達到所需的160℃~170℃,則需要轉動溫度調節器使紅燈亮,如此反復調節,直至達到所需的溫度。3. 恆溫:當溫度升到160℃~170℃時,藉助恆溫調節器的自動控制,保持此溫度2h。乾熱滅菌過程中,嚴防恆溫調節的自動控制失靈而造成安全事故。4. 降溫:切斷電源,自然降溫。5. 開箱取物:待電熱乾燥箱內溫度降到60℃以下後,才能打開箱門,取出滅菌物品。同時,應將溫度調節旋鈕調到零點,並打開排氣孔。電熱乾燥箱內溫度未降到60℃以前,切勿自行打開箱門,以免驟然降溫導致玻璃器皿炸裂。(二)高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌是將物品放在密閉的高壓蒸汽滅菌鍋內,在一定的壓力下保持15~30分鍾進行滅菌。此法適用於培養基、無菌水、工作服等物品的滅菌,也可用於玻璃器皿的滅菌。將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內,通過加熱,使滅菌鍋夾套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中排盡,然後關閉排氣閥,繼續加熱,此時由於蒸汽不能溢出,而增加了滅菌鍋內的壓力,從而使沸點增高,獲得高於100℃的溫度,導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。在相同的溫度下,濕熱滅菌的效果好於乾熱滅菌。有三點原因:在濕熱滅菌中菌體吸收水分,蛋白質容易凝固變性,蛋白質隨著含水量的增加,所需凝固溫度降低;濕熱滅菌中蒸汽的穿透力比乾燥空氣大;蒸汽在被滅菌物體表面凝結,釋放出大量的汽化潛熱,能迅速提高滅菌物體表面的溫度,從而增加滅菌效力。實驗室常用的滅菌鍋有非自控手提式高壓蒸汽滅菌鍋和自控式滅菌鍋,其結構和工作原理是相同的。本實驗介紹的是非自控手提式高壓蒸汽滅菌鍋,自控式滅菌鍋的使用可參考廠家說明書。具體操作步驟如下:1. 加水:首先將內層鍋取出,再向外層鍋內加入適量的水,使水面沒過加熱蛇管,與三角擱架相平為宜。切勿忘記檢查水位,加水量過少,滅菌鍋會發生燒干引起炸裂事故。2. 裝料:放回內層鍋,並裝入待滅菌的物品。注意不要裝得太擠,以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果。裝有培養基的容器放置時要防止液體溢出,三角瓶與試管口端均不要與桶壁接觸,以免冷凝水淋濕包紮的紙而透入棉塞。3. 加蓋:將蓋上與排氣孔相連的排氣軟管插入內層鍋的排氣槽內,擺正鍋蓋,對齊螺口,然後以對稱方式同時旋緊相對的兩個螺栓,使螺栓松緊一致,勿使漏氣,並打開排氣閥。4. 排氣:打開電源加熱滅菌鍋,將水煮沸,使鍋內的冷空氣和水蒸汽一起從排氣孔中排出。一般認為當排出的氣流很強並有噓聲時,表明鍋內的空氣已排盡,沸騰後約需5分鍾。5. 升壓:冷空氣完全排盡後,關閉排氣閥,繼續加熱,鍋內壓力開始上升。6. 保壓:當壓力表指針達到所需壓力時,控制電源,開始計時並維持壓力至所需的時間。如本實驗中採用0.1Mpa,121.5℃,20分鍾滅菌。滅菌的主要因素是溫度而不是壓力,因此鍋內的冷空氣必須完全排盡後,才能關閉排氣閥,維持所需壓力。7. 降壓:達到滅菌所需的時間後,切斷電源,讓滅菌鍋溫度自然下降,當壓力表的壓力降至「0」後,方可打開排氣閥,排盡餘下的蒸汽,旋松螺栓,打開鍋蓋,取出滅菌物品,倒掉鍋內剩水。壓力一定要降到「0」後,才能打開排氣閥,開蓋取物。否則就會因鍋內壓力突然下降,使容器內的培養基或試劑由於內外壓力不平衡而沖出容器口,造成瓶口被污染,甚至灼傷操作者。8. 無菌檢查:將已滅菌的培養基放入37℃恆溫培養箱培養24h,檢查無雜菌生長後,即可使用。 (三)過濾除菌有些物質,如抗生素、血清、維生素、糖溶液等採用加熱滅菌法時,容易受熱分解而被破壞,因而要採用過濾除菌法。過濾除菌是通過機械作用濾去液體或氣體中細菌的方法,該方法最大的優點是不破壞溶液中各種物質的化學成分。過濾除菌法除實驗室用於溶液、試劑的除菌外,在微生物工作中使用的凈化工作台也是根據過濾除菌的原理設計的,可根據不同的需要來選用不同的濾器和濾板材料。應用最廣泛的過濾器種類有:1. 微孔濾膜過濾器:是一種新型過濾器,它由上下二個分別具有出口和入口連接裝置的塑料盒組成,出口處可連接針頭,入口處可連接針筒,使用時將濾膜裝入兩塑料盒之間,旋緊盒蓋,當溶液從針筒注入濾器時,各種微生物被阻留在微孔濾膜上面,而液體和小分子物質通過濾膜,從而達到除菌的目的。其濾膜是由硝酸纖維素、醋酸纖維素等製成的薄膜,有孔徑大小不同的多種規格(如0.1μm、0.22μm、0.3μm、0.45μm等),實驗室中用於除菌的微孔濾膜孔徑一般為0.22μm。根據待除菌溶液量的多少,可選用不同大小的濾器。該濾器的優點是吸附性小,即溶液中的物質損耗少,過濾速度快,每張濾膜只使用1次,不用清洗。2. 蔡氏(Seitz)過濾器:是一種金屬製成的過濾漏斗,其過濾部分是一種用石棉纖維和其他填充物壓製成的片狀結構。溶液中的細菌通過石棉纖維的吸附和過濾而被去除,但對溶液中其他物質的吸附性也大,每張纖維板只能使用1次。3. 玻璃過濾器:是一種玻璃製成的過濾漏斗,其過濾部分是由細玻璃粉燒結成的板狀構造。玻璃濾器的規格很多,5號(孔徑2~5μm)和6號(孔徑<2μm)適用於過濾細菌,其優點是吸附量少,但每次使用後要洗凈再用。本實驗採用微孔濾膜過濾器進行過濾除菌,具體操作步驟如下:1. 組裝、滅菌:將0.22�0�8m孔徑的濾膜裝入清洗干凈的塑料濾器中,旋緊壓平,包裝滅菌後待用(0.1Mpa,121.5℃,滅菌20分鍾)。2. 連接:將滅菌濾器的入口在無菌條件下,以無菌操作方式連接於裝有待濾溶液的注射器上,將針頭與出口處連接並插入帶橡皮塞的無菌試管中。3. 壓濾:將注射器中的待濾溶液加壓緩緩擠入過濾到無菌試管中,濾畢,將針頭拔出。壓濾時用力要適當,不可太猛太快,以免細菌被擠壓通過濾膜。4. 無菌檢查:無菌操作吸取除菌濾液0.1mL於肉湯蛋白腖平板上,均勻塗布,置37℃恆溫培養箱培養24小時,檢查是否有雜菌生長。5. 清洗:棄去塑料濾器上的微孔濾膜,將塑料濾器清洗干凈,並換上一張新的微孔濾膜,組裝包紮,再經滅菌後使用。整個過程應嚴格按照無菌操作,以防污染,過濾時應避免各連接處出現滲透現象。 來自網路,本人整理,沒法上圖!
Ⅶ 鐵鹽的配置
在實驗中常用的培養基,可將其中的各種成分配成10倍、100倍的母液,放入冰箱中保存,用時可按比例稀釋。配製母液有2點好處:一是可減少每次配製稱量葯品的麻煩,二是減少極微量葯品在每次稱量時造成的誤差。母液可以配單一化合物母液,但一般都配成以下四種不同混合母液。應注意以下幾個方面:A.葯品稱量應准確,尤其微量元素化合物應精確到0.0001克,大量元素可精確到0.01克。B.配製母液的濃度適當,一是長時間保存後易沉澱,二是濃度大,用量少,在配製培養基時易影響精確度。C.母液貯藏不宜過長,一般幾個月左右,要定期檢查,如出現渾濁、沉澱及黴菌等現象,就不能使用。D.母液應放在2-4℃的冰箱中保存。
(1)大量元素混合母液:指濃度大於0.5mmol/L的元素,即含N、P、K、Ca、Mg、S等六種鹽類的 混合溶液,可配成10倍母液,用時每配1000ml取100ml母液,配時要注意以下幾點:a.各化合物必須充分溶解後才能混合。b.混合時注意先後順序,特別要將鈣離子與硫酸根離子,磷酸根離子錯開,以免產生硫酸鈣、磷酸鈣等不溶性化合物沉澱。c.混合時要慢,邊攪拌邊混合。
(2)微量元素混合母液:指小於0.5mmol/L的元素即含除Fe以外的B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等鹽類的混合溶液,因含量低,一般配成100倍甚至1000倍,用時每配1000ml取10ml或1ml。配時也要注意順次溶解後再混合,以免沉澱。
(3)鐵鹽母液:鐵鹽必須單獨配製,若同其他無機元素混合配成母液,易造成沉澱。配法是將5.57g FeSO4.7H2O水溶液緩慢加入到7.45gNa2-EDTA微沸水溶液中,並不斷攪拌,最後定容到1000ml,用時每配1000ml培養基取5ml。
(4)有機化合物母液:主要是維生素和氨基酸類物質,這些物質不能配成混合母液,一定要分別配成單獨的母液,其濃度有每ml含0.1、1.0、10mg化合物,用時根據所需濃度適當取用。
(5)植物激素:每種激素必須單獨配製成母液,濃度為每ml含0.1、0.5、1.0mg激素,激素濃度的表示方法有兩種,一種是ppm(或每升中mg數),另一種是mol.用時根據需要取用。由於多數激素難溶於水,它們的配法如下:
1) IAA IBA GA3先溶與少量95%酒精,再加水定容到一定濃度。
2) NAA可溶於熱水或少量95%的酒精中,再加水定溶到一定濃度。
3) 2,4-D不溶於水,可用1mol的NaOH溶解後,再加水定容至一定濃度。
4) KIN和BA先溶於少量1mol的HCl中,再加水定容。
5) 玉米素先溶於少量95%酒精中,再加水至一定濃度。
2培養基的配置
(1)混合培養基中的各成分。先量取大量元素母液,再依次加入微量元素母液、鐵鹽母液、有機成分,然後加入植物激素及其他附加成分。
(2)溶化瓊脂。稱取應加的瓊脂和蔗糖,將瓊脂浸泡到透明後,用蒸餾水加熱燒開熔化瓊脂,待瓊脂完全溶化後,把1加入,用pH試紙測pH值,並用0.1mol的NaOH或HCl調pH為5.6-5.8,最後加水定容至所需體積。
(3)分裝。將熬好的培養基分裝於培養瓶中,分裝時注意不要把培養基倒在瓶口上,以防引起污染,然後用封口膜或瓶蓋封口。
(4)滅菌。由於培養基內有豐富的營養物質,極利細菌和真菌繁殖,造成污染,影響組培的成功,一般有高溫高壓消毒和過濾消毒兩種方法。⒈高溫高壓消毒:一般用消毒鍋消毒,注意消毒鍋不能裝的過滿,採用三次放氣滅菌法,即0.05Mpa下放三次氣,在0.1Mpa維持15-20分鍾。⒉過濾消毒:一些易受高溫破壞的培養基成分如IAA、IBA、ZT等,不宜用高溫高壓法消毒,可用過濾消毒,可過濾消毒後再加入已高溫高壓消毒的培養基中,過濾消毒應在無菌室或超凈工件台上進行,以避免污染培養基。
Ⅷ 培養基的配方,希望給我詳細點咯~!
高氏一號瓊脂培養基(培養放線菌用)
可溶性澱粉20g,硝酸鉀1g,氯化鈉0.5g,K2HPO4 •3H2O 0.5g,MgSO4•7H2O 0.5g,FeSO4•7H2O 0.01g,瓊脂20g,水1000ml,pH7.2~內7.4。配製時,先用冷水,將淀容粉調成糊狀,倒入煮沸的水中,在火上加熱,邊攪拌邊加入其他成分,溶化後,補足水分至1000ml。112℃滅菌20分鍾。
馬丁氏瓊脂培養基(分離真菌用)
葡萄糖10g,蛋白腖5g,KH2PO4 1g,MgSO4•7H2O 0.5g,孟加拉紅(1mg/ml)3.3ml,瓊脂20g,pH自然,水1000ml,112℃滅菌30分鍾。臨用前加入0.03%鏈霉稀釋液100ml,使每毫升培養基中含鏈黴素30微克,2%去氧膽酸鈉溶液2ml(預先滅菌,臨用前加入)。
不好意思只找到兩個,你先看看行不行。
Ⅸ 配置好的人工合成培養基可以用濕熱滅菌法進行滅菌嗎為什麼
培養基滅菌方法需要由培養基種類決定。
濕熱滅菌法是指用飽和水蒸氣、沸水或流通蒸汽進行滅菌的方法,由於蒸汽潛熱大,穿透力強,容易使蛋白質變性或凝固,所以該法的滅菌效率比乾熱滅菌法高,是葯物制劑生產過程中最常用的滅菌方法。濕熱滅菌法可分為:煮沸滅菌法、巴氏消毒法、高壓蒸汽滅菌法、流通蒸汽滅菌法、和間歇蒸汽滅菌法。
影響濕熱滅菌的主要因素有:微生物的種類與數量、蒸汽的性質、葯品性質和滅菌時間等。
(1)煮沸滅菌法:將水煮沸至100攝氏度,保持5-10分鍾可殺死細菌繁殖體,保持1-3小時可殺死芽胞。在水中加入百分之一至百分之二的碳酸氫鈉時沸點可達105攝氏度,能增強殺菌作用,還可去污防銹。此法適用於食具、刀箭、載玻片及注射器等。
(2)巴氏消毒法:一種低溫消毒法,因巴斯德首創而得名。有兩種具體方法,一是低溫維持法:62攝氏度維持30分鍾;二是高溫瞬時法:75攝氏度作用15-30秒。該法適用於食品的消毒。
(3)流通蒸氣滅菌法:利用常壓下的流通蒸汽進行滅菌。
(4)間歇蒸汽滅菌法
(5)高壓蒸汽滅菌法:103.4千帕蒸汽壓溫度達121.3攝氏度,維持15-20分鍾。
濕熱滅菌法 濕熱法可在較低的溫度下達到與乾熱法相同的滅菌效果,因為:①濕熱中蛋白吸收水份,更易凝固變性;②水分子的穿透力比空氣大,更易均勻傳遞熱能;③蒸汽有潛熱存在,每1克水由氣態變成液態可釋放出529卡熱能,可迅速提高物體的溫度。
濕熱滅菌法一般採用121攝氏度,滅菌20-30min,如果是產孢子的微生物則應採用滅菌後適宜溫度下培養幾小時,再滅菌一次,以用於殺死剛剛萌發的孢子。
拓展:培養基的滅菌方法
1、高壓蒸汽滅菌:
高壓蒸汽滅菌適合於耐高溫培養基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養基在愛制備過程中混入各種雜菌,分裝後應立即滅菌,至少應在24h內完成滅菌工作。滅菌時一般是在0.105MPa壓力下,溫度121℃時,滅菌15~30min即可。消毒時間不宜過長,也不能超過規定的壓力范圍,否則有機物質特別是維生素類物質就會在高溫下分解,失去營養作用,也會使培養基變質、變色,甚至難以凝固。將蒸餾水或自來水裝在三角瓶中,裝水量一般不超過瓶的2/3,用牛皮紙或硫酸紙包紮封口,然後放入高壓鍋中滅菌後即為無菌水。 滅菌後的培養基可放到培養室中預培養3d,若無污染現象,則證明滅菌是徹底的,可以使用。暫時不用的培養基最好置於10℃下保存。含IAA或GA3的培養基應在1周內用完,其他培養基最多也不要超過1個月。
2、過濾滅菌:
一些植物生長調節劑及有機物,如IAA、GA3、ZT、CM等,遇熱容易分解,不能與培養基一起進行高溫滅菌,而要使用細菌過濾器濾去其中的雜菌。細菌過濾器與濾膜(孔徑0.45微米)使用之前要先進行高壓滅菌。過濾後的溶液要立即加入培養基中,若為液體培養基,可在培養基冷卻至30℃時加入;若為固體培養基,必須在培養基凝固之前(50-60℃)加入,振盪使溶液與其他成分混合均勻。
Ⅹ 赤黴素ga3,ga4,ga7有什麼不同
赤黴素ga3、ga4、ga7的區別:
1、生理活性:GA3(俗稱920)具有較強的生理活性,GA4和ga7具有較弱的生理活性。
2、性能作用:GA3能促進植物生長;(ga4-ga7)是「920」的改良型,更高效、更穩定、更安全,它能顯著促進莖葉的生長,特別是對遺傳性和生理性矮稈植物。
3、化學性質:GA3、GA4和ga7都是赤黴素的同系物。
赤黴素中GA3具有最強的生理活性和研究最多的活性,能顯著促進植物莖葉的生長,特別是對遺傳和生理類型的矮生植物,它可以替代一些種子萌發所需的光照和低溫條件,從而促進發芽,使長日照植物在短日照條件下開花,縮短生命周期,誘導開花,增加甜瓜雄花數。
可誘導單性結實,提高坐果率,促進果實生長,延緩果實衰老,GA3還可以防止果皮腐爛,棉花開花期噴施可以減少芽、鈴脫落,浸泡馬鈴薯可以打破休眠,浸泡大麥可以提高麥芽糖產量等。
(10)ga3配置蒸餾水擴展閱讀:
赤黴素使用注意事項:
1、赤黴素是在日平均氣溫23℃以上的天氣中噴灑的,因為氣溫較低時花果不發育,赤黴素不起作用。
2、噴灑時,要迅速噴灑細霧,並將葯液均勻地噴灑在花朵上,如果濃度過高,植物就會徒然生長,變白,甚至死亡或變形。
3、如果市場上活性成分含量不一致,建議在使用赤黴素時嚴格按照說明書進行噴施。
4、由於赤黴素使用時需要精確配置,需要專人檢查集中配置和使用。