蛋白質測定中加鹼蒸餾是否完全

『壹』 蛋白質及氨基酸的測定有哪些方法求大神幫助

樓主你好： 測定蛋白質最基本的方法是定氮法，即先測定樣品中的總氮量，再由總氮量計算出樣品中蛋白質的含量。蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法，它是測定總有機氮的最准確和操作較簡便的方法之一，在國內外應用普遍。此外，雙縮脈法、染料結合法、酚試劑法等也常用於蛋白質含量測定，由於方法簡便快速，故多用於生產單位質量控制分析。 蛋白質及氨基酸的測定 蛋白質是生命的物質基礎，是構成生物體細胞組織的重要成分，一切有生命的活體都含有不同類型的蛋白質。人體內的酸鹼平衡、水平衡的維持；遺傳信息的傳遞；物質的代謝及轉運都與蛋白質有關。人及動物只能從食品得到蛋白質及其分解產物，來構成自身的蛋白質，故蛋白質是人體重要的營養物質，也是食品中重要的營養指標。 蛋白質是復雜的含氮有機化合物，分子量很大，它們由20種氨基酸通過醯胺鍵以一定的方式結合起來，並具有一定的空間結構。不同的蛋白質其氨基酸構成比例及方式不同，故各種不同的蛋白質其含氮量也不同。蛋白質可以被酶、酸或鹼水解，最終產物為氨基酸。氨基酸是構成蛋白質的最基本物質，在構成蛋白質的氨基酸中，亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸等8種氨基酸在人體中不能合成，必須依靠食品供給，故被稱為必需氨基酸，它們對人體有著極其重要的生理功能，常會因其在體內缺乏而導致患病，或通過補充而增強了新陳代謝作用。所以食品及其原料中蛋白質和氨基酸的分離、鑒定和定量具有極其重要的意義。 蛋白質的測定 測定蛋白質最基本的方法是定氮法，即先測定樣品中的總氮量，再由總氮量計算出樣品中蛋白質的含量。蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法，它是測定總有機氮的最准確和操作較簡便的方法之一，在國內外應用普遍。此外，雙縮脈法、染料結合法、酚試劑法等也常用於蛋白質含量測定，由於方法簡便快速，故多用於生產單位質量控制分析。 微量凱氏定氮法 本法適用於各類食品中蛋白質的測定。 1．原理 食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸胺。然後鹼化蒸餾使氨游離，用過量硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，即為蛋白質含量。反應過程分為三個階段，用反應式表示如下。 ①消化 2NH2(CH2)2COOH 4-13H2S04一(NH。)2S04+6C02+12S0=+16H20 (NH4)2S04+2Na()H一2NH3十+2H20+。Na2S04 2NH3+4H3803—，(NH4)2 B207+5H20 ③滴定 (NH4)2 B2 07+2HCl+5H20—NH4C1+4H3803 2．儀器 ①消化爐。 ②凱氏定氮蒸餾裝置。 3．試劑 所用試劑均用不含氨的蒸餾水配製。試劑均為分析純。 ①CuS04。 ②K2SO。 ③濃H2SO。 ④2％H。BO。溶液。 ⑤混合指示劑：1份O．1％甲基紅乙醇溶液與5份O．1％溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。也可用2份O．1％甲基紅乙醇溶液與1份0．1％次甲基藍乙醇溶液臨用時混合。 ⑥飽和氫氧化鈉：500 g氫氧化鈉加入500 mL水中，攪拌溶解，冷卻後放置數日，澄清後使用。 ⑦0．01 toolI．一』或0．05 toolL叫HCl標准溶液(需用無水碳酸鈉標定後使用)。 4．操作步驟 ①樣品消化：精密稱取O．2～2．0 g固體樣品或2～5 g半固體樣品或吸取液體樣品5～20mI。，放人500 mI。乾燥凱氏燒瓶中，加人O．2 g硫酸銅、3 g硫酸鉀及20 mL濃HzSOa，於凱氏瓶口放一小漏斗，並將其以45。角斜支於有小孔的石棉網上。（更多詳細咨詢請參考國家標准物質網 www.rmhot.com ）用電爐以小火加熱，待內容物全部碳化，泡沫停止產生後，加大火力，保持瓶內液體微沸，至液體變藍綠色透明後再繼續加熱微沸30 min。冷卻，小心加入20 mL水，再放冷至室溫，移人100 mL容量瓶中，並用少量水洗燒瓶洗液並人容量瓶，在加水至刻度，混勻備用。除不加樣品外，取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸，按同一方法做試劑空白消化。 ②水蒸氣發生瓶內裝水至約2／3處，加甲基紅指示液數滴及數毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠以防暴沸，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。 ③向接收瓶內加入10 mL 2％硼酸溶液及混合指示液l滴，並使冷凝管的下端插入液面下，吸取lO mI。樣品消化稀釋液由小玻璃杯流人反應室，並以10 mL水洗滌小燒杯使之流人反應室內，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將3～10 mL飽和氫氧化鈉溶液倒人小玻璃杯中，提起玻璃塞使其緩緩流入反應室，立即將玻璃塞蓋緊，並加水於小玻璃杯中以防漏氣。加緊螺旋夾，開始蒸餾。蒸汽通人反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內，蒸餾2～5 min，移動接收瓶，使冷凝管下端離開液面，然後用少量中性水沖洗冷疑管下端外部，再蒸餾1 min取下接收瓶，以0．01 molI．叫或O．05 molL1HCl標准溶液滴定至灰色或藍紫色為終點。同時吸取10 mI_，試劑空白消化液按③操作。 5．計算 6。說明 ①干樣用稱量紙稱重連紙一同消化，空白管同樣放稱量紙消化。 ②含糖量高和油脂高的樣品消化時容易溢出，加熱要緩慢。 ③氨是否蒸餾完全，可用pH試紙測試餾出液是否為鹼性來判斷。 ④實驗前必須仔細檢查蒸餾裝置的各個連接處，保證不漏氣。所用橡皮管、塞子須浸在氫氧化鈉(10％)中，煮沸10 min，然後水洗、水煮，再用水洗。 ⑤小心加樣，切勿使樣品沾污凱氏燒瓶口部和頸部。

『貳』 檢測生物組織中的糖類 蛋白質 和脂肪的實驗 要求有詳細實驗步驟和注意事項還有實驗現象 高懸賞！！！

解析度：
A，電影和抄縮二脲試劑試劑雖然相同的成分，但濃度，用法，用量是不同的，如電影試劑B液（0.05g/ml）和雙縮脲試劑B液（0.01克/毫升）用不同濃度，使故障。 />乙，脂肪材料的識別給定的兩個方法：檢測到的宏小區脂肪的花生種子，粉碎後得到的樣品溶液，以及佳蘇丹III染色可直接觀察到，而無需使用顯微鏡。第二種方法必須是脂肪。 B錯

D，縮二脲的蛋白質鑒定，沒有水洗澡，D錯

正確答案選項C.

房東，不知道答案，滿足你嗎？

『叄』 食品中蛋白質測定是怎麼操作的

食品中蛋白質的測定
1 原理
蛋白質是含氮的有機化合物.食品與硫酸和硫酸銅、硫酸鉀一同加熱消化,使蛋白質分解,分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨.然後鹼化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收後以硫酸或鹽酸標准滴定溶液滴定,根據酸的消耗量乘以換算系數,即為蛋白質的含量.
2 分析步驟
2.1 試樣處理：稱取0.20g～2.00g固定試樣或2.00g～5.00g半固體試樣或吸取10.00ml～25.00ml液體試樣（約相當氮30mg～40mg）,移入乾燥的100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸銅,6g硫酸鉀及20ml硫酸,稍搖勻後於瓶口放一小漏斗,將瓶以45°角斜支於有小孔的石棉網上.小心加熱,待內容物全部炭化,泡沫完全停止後,加強火力,並保持瓶內液體沸騰,至液體呈藍綠色澄清透明後,再繼續加熱0.5h～1h.取下放冷,小心加20ml水.放冷後,移入100ml容量瓶中.並用少量水洗定氮瓶,洗液並入容量瓶中,再加水至刻度,混勻備用.同時做試劑空白試驗.
2.2 測定：按上圖裝好定氮裝置,於水蒸氣發生瓶內裝水至三分之二處,加入數粒玻璃珠,加甲基紅指示液數滴及數毫升硫酸,以保持水呈酸性,用調壓器控制,加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水.2.3 向接收瓶內加入10ml硼酸溶液（20g/L）及1～2滴混合指示液,並使冷凝管的下端插入液面下,准確吸取10ml試樣處 理液由小漏洞流入反應室,並以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內,棒狀玻塞塞緊.將10ml氫氧化鈉溶液（400g/L）倒入小玻杯,提起玻塞使其緩緩流入反應室,立即將玻塞蓋緊.並加水於小玻杯以防漏氣.夾緊螺旋夾,開始蒸餾.蒸餾5min.移動接收瓶,液面離開冷凝管下端,再蒸餾1min.然後用少量水沖洗冷凝管下端外部.取下接收瓶.以硫酸或鹽酸標准滴定溶液（0.05mol/L）滴定至灰色或藍紫色為終點.同時准確吸取10ml.
試劑空白消化液按2.2操作.
3 結果計算
試樣中蛋白質的含量按下列公式計算.
式中：
X—試樣中蛋白質的含量,單位為克每百克或克每百毫升（g/100g或g/100ml）
V1—試樣消耗硫酸或鹽酸標准滴定液的體積,單位為毫升（ml） V2—試劑空白消耗硫酸或鹽酸標准滴定液的體積,單位為毫升.
（ml）
C—硫酸或鹽酸標准滴定液的濃度,單位為摩爾每升（mol/L） 0.0140—1.0ml
硫酸[c(1/2H2SO4)=1.000mol/L]或鹽酸
[c(HCL)=1.000mol/L]標准滴定溶液相當的氮的質量,單位為克（g）
m—試樣的質量或體積,單位為克或毫升（g或ml）
F—氮換算為蛋白質的系數,一般食物為6.25；乳製品為6.38；麵粉為5.70；玉米、高粱為6.24；花生為5.46；米為5.95；大豆及其製品為5.71；肉與肉製品為6.25；大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83；芝麻、向日葵為5.30.計算結果保留三位有效數字.
4 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差不得超過算數平均值的10%.
zttn037 2014-11-19

『肆』 凱氏定氮法,為什麼冷凝管下端要浸入液面以下怎樣知道蒸餾是否完全蒸餾結束要注意什麼

冷凝管下端進入頁面以下是因為氮是也氨氣的形式蒸餾出來的，如果不在頁面以下，就不能完全的被吸收液吸收，造成結果偏小。氨是否完全蒸餾完全，可用PH試紙試檢測餾出液是否為鹼性。蒸餾完全後就去滴定。

如果是用的凱氏定氮儀的話，結束後只要注意機子的保養就好了，如果是自己組裝的裝置那就要就要注意：蒸餾結束後，掐緊簧夾，斷絕蒸氣，使反應室內溶液全部吸人迴流管中，再放鬆簧夾，從小漏斗加入蒸餾水40～50ml。

再通蒸氣加熱和迴流，放掉迴流管中殘液，這樣反復3～4次，將反應室洗滌干凈，才能備下一次測試用(標准書上只洗一次，不易洗凈)。

在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽，然後在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨，隨水蒸氣蒸餾出來並為過量的硼酸液吸收，再以標准鹽酸滴定，就可計算出樣品中的氮量。由於蛋白質含氮量比較恆定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。

(4)蛋白質測定中加鹼蒸餾是否完全擴展閱讀：

蛋白質與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然後鹼化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，並換算成蛋白質含量。含氮量*6.25=蛋白含量。

在整個消化過程中，不要用強火。保持和緩的沸騰，使火力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質在無硫酸存在的情況下，使氮有損失。

如硫酸缺少，過多的硫酸鉀會引起氨的損失，這樣會形成硫酸氫鉀，而不與氨作用。因此，當硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時，要增加硫酸的量。

加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點，硫酸銅為催化劑，硫酸銅在蒸餾時作鹼性反應的指示劑。

混合指示劑在鹼性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴甲酚綠，可單獨使用0.1%甲基紅乙醇溶液。

『伍』 蛋白質測定時，樣品經消化蒸餾之前為什麼要加入氫氧化鈉加入量對測定結果有何影響

1加入氫氧化鈉是因為氫氧化鈉和硫酸銨在加熱條件下生成氨氣溢出。
2加入量需要過量回，估計樣品氮含量，計答算所需量，加入量最少超過所需量，還要中和消解過程中未分解的硫酸一般是1.5倍+消解時加入的硫酸量
3溶液顏色變化，如果本來是澄清溶液，此後會變黑、褐灰等顏色
4顏色變化是銅離子的存在的原因，變黑是銅離子和氫氧根離子變成氫氧化銅。不穩定生成氧化銅（黑色）所致
5如果沒有變化，是加人氫氧化鈉量不夠所致
以上內容又本人經驗所得，沒有參考任何文獻，希望對樓主有所幫助！

『陸』 急、有誰知道：在蛋白質測定中,樣品經消化蒸餾之前為什麼要加入氫氧化鈉

是測定蛋白質組分吧，加NaOH是破壞氫鍵使其分解為氨基酸。無顏色變化

『柒』 國家標准檢測蛋白質含量測定方法

蛋白質含量測定方法就是檢測元素的含量，像三聚氰胺的問題，就是通過增加N的含量使「蛋白質」含量提高的。

國家標准檢測蛋白質含量的方法叫做凱氏定氮法，食物中的蛋白質在催化加熱條件下分解，導致氨和硫酸結合產生硫酸銨。 鹼蒸餾採用無硫，硼酸吸收，用硫酸或鹽酸標准滴定溶液滴定，根據酸耗計算氮含量，再乘以轉化系數，即蛋白質含量。

具體操作步驟如下：

1.樣品處理

精確稱量0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸收10-20ml液體樣品（約30-40mg氮當量）。將其轉移至乾燥的100毫升或500毫升氮氣固定瓶中，加入0.2克硫酸銅，6克硫酸鉀和20毫升硫酸，輕輕搖動，在瓶口放置一個小漏斗，將瓶子傾斜石棉網上有45度角，有小孔。

加熱小火後，內容物碳化，泡沫完全停止，加強火力，保持瓶內液體稍微沸騰，直至液體呈藍綠色澄清透明，然後繼續加熱0.5小時。取出並冷卻，小心加入20毫升水，冷卻，移入100毫升容量瓶中，用少量水洗凈氮氣瓶，洗凈液放入容量瓶中，然後用水沖洗至刻度，混勻備用。

取相同量的硫酸銅，硫酸鉀和濃硫酸作為試劑進行空白試驗。然而，這種方法很危險，很難在實驗室中證明。大多數實驗室都有一個消化器，可以一次處理16個以上的樣品和一個可以自行設定溫度的呼吸機。它更安全，更可操作。

(7)蛋白質測定中加鹼蒸餾是否完全擴展閱讀

除了凱氏定氮法以外，標準的測量方法還有：

• 分光光度法

食品中的蛋白質在催化加熱條件下被分解，分解產生的氨與硫酸結合生成硫酸銨，在pH4.8的乙酸鈉-乙酸緩沖溶液中與乙醯丙酮和甲醛反應生成黃色的3,5-二乙醯-2,6-二甲基-1,4-二氫化吡啶化合物。在波長400nm 下測定吸光度值，與標准系列比較定量,結果乘以換算系數，即為蛋白質含量。

• 燃燒法

樣品在900~1200℃下燃燒。在燃燒過程中，產生混合氣體。 諸如碳，硫和鹽的干擾氣體被吸收管吸收，氮氧化物被還原成氮。 形成的氮氣流由熱導檢測器（TCD）檢測。

『捌』 蛋白質檢測中應注意什麼

其中碳氫被氧化為二氧化碳和水逸出，蛋白質中的氮轉化為氨與硫酸結合生成硫酸氯在硫酸中，然後加鹼蒸餾，使氨逸出，用硼酸吸收，再以硫酸或鹽酸標准溶液滴定。根據酸的消耗量乘以換算系數為蛋白質含量。筆者根據多年來操作經驗認為，在檢驗過程中應注意如下三個環節。一、樣品、試劑加入量的控制。1．稱取試樣的多少取決於樣品中蛋白質的高低。蛋白質中含氮量較恆定，通常是通過測定食品中氮的含量來確定蛋白質的含量。一般固體樣品稱取0．2-2．0g，半固體樣品稱取2—5g，液體樣品吸取10-20ml。樣品中含氮量低的可增加稱樣量。2．硫酸的加入量，通常加20ml，但試樣量如超過5g時，應按每克試樣5ml的比例增加硫酸用量。否則試樣消化不完全造成結果偏低。3．消泡劑的加入。含脂肪或糖較多的食品在消化時產生大量泡沫，溢出瓶外，造成氮的損失，所以消化前可加入少量消泡齊lj。如：液體石蠟、硅消泡劑等。4．催化劑的加入量要適宜硫酸銅是最理想的催化劑，效果好，價格便宜，環境污染小，而且是蒸餾加鹼時的指示劑。硫酸鉀可加快有機物的分解，使硫酸沸點從34．0℃提高到40．0℃以上，但加入量不能太大，否則溫度過高會使銨鹽分解而文——胡惠敏造成損失，除硫酸鉀外硫酸鈉也有同樣作用。5．難消化的樣品還可適當加入少量過氧化氫，次氯酸鈉等氧化劑加速有機物氧化。二、樣品消化處理。1．樣品一定要移入乾燥的凱氏燒瓶中，否則樣品易粘在瓶壁上不易消化。加硫酸時應將附在瓶壁上的粉末仔細洗至瓶中，使樣品全部消化。還有在消化時注意轉動凱氏燒瓶，利用冷凝酸液將附在瓶壁上的碳粒沖下促進完全消化。2．樣品與試劑加入搖勻後瓶口應放一小漏斗，將瓶傾斜45。角斜至有小孔的石棉網上，小心加熱，避免噴濺。待瓶內試樣全部碳化，泡沫完全停止後，再加強火力，並保持瓶內液體微沸，至液體呈澄清透明的藍綠色後再加熱半小時，樣品即消化完全。三、蒸餾過程中條件的控制。1．蒸餾對溫度、時間都有要求。熱源溫度過低直接影響氯的逸出，從而導致結果偏低。蒸餾時間應控制在30分鍾左右，時間過少氯放出時間不足，使結果偏低，樣品應在溫度較高(1000W)的電爐子上蒸餾為宜，達到規定時間後應用PH試紙測出餾出液是否呈中性，若鹼性應延長蒸餾時間直至中性。2．氫氧化鈉的加入量。在蒸餾過程中，燒瓶內溶液應保持鹼性，因此經消化處理樣品加氫氧化鈉後，瓶內液體在加熱沸騰後溶液呈黑色，如果呈蘭色，說明氫氧化鈉的加入量不足，應補加至分解液呈黑褐色。3．硼酸作為吸收液。由於硼酸是極弱的酸，只起吸收氯的作用，不影響鹼滴定，但要注意硼酸吸收液溫度不應超過40℃，否則氯吸收減弱，造成損失。4．蒸餾裝置不能漏氣。蒸餾過程中不能停火斷氣避免發生倒吸，蒸餾完畢先將蒸餾出1：3離開液面，繼續蒸餾1分鍾，將附著在尖端的吸收液完全洗入吸收瓶內，否則吸收液體將發生倒吸造成意外。5．在滴定過程中一定要將滴管中的氣泡趕出，使之在0刻度線時開始滴定，滴定時不要過快，以免達到終點時不好控制。總之，在檢驗過程中注意以上幾點，才能減少誤差，確保儉測結果與真實值一致