1. 培考馬斯亮藍加水變藍
按正常是應該是和蛋白反應後 顏色才變為青藍色的
2. pH對考馬斯亮藍溶液的顏色有沒影響
當然有影響了,PH值的計算你知道吧
這個就可以順應而解了,顏色的深淺和濃度的多少,有很大的關系
3. 考馬斯亮藍染液和蒸餾水混合顏色
考馬斯亮藍染液和蒸餾水混合顏色,這個你可以自己做下實驗,看出來是什麼顏色。
4. 考馬斯亮藍法中能否用蒸餾水代替生理鹽水
試劑 1. 0.9%生理鹽水 2. 考馬斯亮藍試劑 3. 1000?g /ml蛋白質標准液 【分光光度法的基本原理和分光光度計的 使用方法】 定義: 分光光度法是利用物質所特有的吸
5. 考馬斯亮藍G250測定蛋白中為什麼加氯化鈉和直接蒸餾水有什麼區別
加入氯化鈉溶液是為了加速溶解,加入蒸餾水也可以。
6. 蒸餾水與考馬斯亮藍染液有何現象
染色,考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據蛋白質可與考馬斯亮藍G-250
定量結合。當考馬斯亮藍
G-250
與蛋白質結合後,其對可見光的最大吸收峰從
465nm
變為
595nm。
7. 考馬斯亮藍法測定蛋白質含量實驗中,使用的水一定是蒸餾水嗎為什麼
考馬斯亮藍法測定蛋白質含量實驗中,使用的水最低要求是蒸餾水,更高精度要求可能會使用雙蒸水。
因為Bradford檢測中要用的試劑配製,標准曲線的製作都要用到水。如果不是使用蒸餾水,可能水裡面會有一些游離的離子或者電解質,會影響試劑配製的准確性,干擾實驗結果。而水中殘留的有機物等可能會和考馬斯亮藍發生變色反應,這樣製作的標准曲線會比實際值偏高,導致最終濃度檢測的結果比實際結果偏低。
8. 考馬斯亮藍染液和蒸餾水混合顏色
染色,考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據蛋白質可與考馬斯亮藍G-250 定量結合。當考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合後
9. Western中考馬斯亮藍的作用是什麼
考馬斯亮藍G-250(Coomassie brilliant blue G-250)測定蛋白質含量屬於染料結合法的一種。考馬斯亮藍G-250在游離狀態下呈紅色,最大光吸收在488nm;當它與蛋白質結合後變為青色,蛋白質-色素結合物在595nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比,因此可用於蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內達到平衡,完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法是1976年Bradford建立,試劑配製簡單,操作簡便快捷,反應非常靈敏,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測定微克級蛋白質含量,測定蛋白質濃度范圍為0~1 000μg/mL,是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。
考馬斯亮藍有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍G250由於與蛋白質的結合反應十分迅速,常用來作為蛋白質含量的測定。考馬斯亮藍R250與蛋白質反應雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對電泳條帶染色。
考馬斯亮藍法測定蛋白質含量流程
該方法用於大多數蛋白質的定量是比較精確的,但不適用於小分子鹼性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0.2%影響測定結果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1.Bradford濃染液的配製:將100mg考馬斯亮藍G-250溶於50m1 95%乙醇,加入100ml濃磷酸,然後,用蒸餾水補充至200ml,此染液放4℃至少6個月保持穩定。
2.標准曲線蛋白質樣本的准備:盡量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標准品,例如測定抗體,可用純化的抗體作為標准。如果待測樣本是未知的,也可用抗體作為標准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之間繪制標准曲線。
3.將待測樣本溶於100~1緩沖溶液中,該緩沖溶液應與製作標准曲線的緩沖溶液相同(最好用PBS)。
4.按1:5用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液,如出現沉澱,過濾除去。
5.每個樣本加5ml稀釋的染料結合溶液,作用5~30rain。染液與蛋白質結合後,將由紅色變為藍色,在595nm波長下測定其吸光度。注意,顯色反應不得超過30min.
6.根據標准曲線計算待測樣本的濃度。
10. 用考馬斯亮藍檢 測蛋白為什麼會有絮狀沉澱產生
考馬斯亮藍法測定蛋白質含量實驗中,使用的水最低要求是蒸餾水,更高精度要求可能會使用雙蒸水。
因為Bradford檢測中要用的試劑配製,標准曲線的製作都要用到水。