葉綠素提取液加入苯和蒸餾水

『壹』 葉綠素的提取液和層析液分別是什麼

提取液：丙酮5ml。

層析液：石油醚。

在做葉綠體色素分離時用到,將葉片碾碎，浸出綠色液體，將液體與層析液（石油醚）混合，將濾紙一段進入混合液體，四種色素在層析液中的溶解度不同，在濾紙上留下4條色素帶。由此觀查出各種色素的相對含量和種類。

紙層析法一般用於葉綠體中色素的分離，葉綠體中色素主要包括胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b，它們在層析液中的溶解度不同，溶解度大的隨層析液在濾

紙上擴散地快，反之則慢；含量較多者色素帶也較寬。最後在濾紙上留下4條色素帶，所以利用紙層析法

能清楚地將葉綠體中的色素分離。

葉綠素提取後的色素帶分布：最上端橙黃色為胡蘿卜素，其次黃色為葉黃素，再下面藍綠色為葉綠素a，最後的黃綠色為葉綠素b。

(1)葉綠素提取液加入苯和蒸餾水擴展閱讀

葉綠素含量的測定方法主要有紫外分光光度法、熒光分析法、活體葉綠素儀法、光聲光譜法和高效液相色譜法。不過目前應用最為廣泛的還是分光光度法。

葉綠素提取液的吸收光譜表明：有兩個強吸收峰，分別在紅光區和藍紫區，不同提取溶劑和原料所得的葉綠素溶液的吸收光譜比較相似。

葉綠素a、葉綠素b的紅區最大吸收峰分別在663nm、645nm附近，在藍紫區分別為429nm、453nm附近。由於提取溶劑和原料不同，對葉綠素提取液進行光譜掃描後，所得的最大吸收值可能有較小范圍的浮動。

高效液相色譜(HPLC)定量檢測葉綠素含量准確率較高，效果很好。用甲醇和丙酮作為流動相，體積比為80：20時，同時在流動相中加入質量分數為0.1%的冰醋酸，流速為1.0mL/min。利用每一種色素的色譜峰面積進行定量，葉綠素a、葉綠素b的定量可通過外標法由工作曲線求得。

『貳』 提取葉綠素中的色素最常用的溶劑是 A.蒸餾水 B.甲醇 C.丙酮 D.乙醇

乙醇來並不能起到分離色自素的效果，植物的葉綠體里除了葉綠素還有其它的色素，用乙醇的話不能把葉綠素分離出來所以不能提取，所以用丙酮提取色素層析液分離色素。雖然丙酮有一定的毒性。
2010年。34．提取植物葉綠素時經常採用的試劑是：(D)
A．乙醇 B． 甘油 C． 重蒸水 D． 丙酮

『叄』 葉綠素的提取和分離

一 實驗目的

1．掌握提取葉綠素的方法；

2．了解薄層層析的原理，掌握薄層層析的一般操作和定性鑒定方法

二 實驗原理

1．葉綠素提取

高等植物體內的葉綠體色素有葉綠素和類胡蘿卜素兩類，主要包括葉綠素a (C55H72O5N4Mg)、葉綠素b(C55H70O6N4Mg)、β—胡蘿卜素(C40H56)和葉黃素(C40H56O2)等4種。葉綠素a和葉綠素b為吡咯衍生物與金屬鎂的配合物，胡蘿卜素是一種橙色天然色素，屬於四萜類，為一長鏈共軛多烯，有α、β、γ三種異構體，其中，β異構體含量最多。葉黃素為一種黃色色素，與葉綠素同存在於植物體中，是胡蘿卜素的羥基衍生物，較易溶於乙醇，在乙醚中溶解度較小。根據它們的化學特性，可將它們從植物葉片中提取出來，並通過萃取、沉澱和色譜方法將它們分離開來。

2．薄層色譜

薄層層析是快速分離和定性分析微量物質的一種極為重要的實驗技術，具有設備簡單、操作方便而快速的特點。它是將固定相支持物均勻地鋪在玻片上製成薄層板，將樣品溶液點加在起點處，置於層析容器中用合適的溶劑展開而達到分離的目的。用此法分離時幾乎不受溫度的影響，可採用腐蝕性顯色劑，而且可在高溫下顯色，特別適用於揮發性小或在較高溫度下易發生反應的物質，同時也常用來跟蹤有機反應或監測有機反應完成的程度。

薄層層析的器材選擇：

（1）基板：玻璃、塑料、金屬箔，常用玻璃板。

（2）吸附劑：

吸附劑要有合適的吸附力，並且必須與展開劑和被吸附物質均不起化學反應。可用作吸附劑的物質很多，常用的有硅膠和氧化鋁，由於吸附性好，適用於各類化合物的分離，應用最廣。選擇吸附劑時主要根據樣品的溶解度、酸鹼性及極性。氧化鋁一般是微鹼性吸附劑，適用於鹼性物質及中性物質的分離；而硅膠是微酸性吸附劑，適用於酸性物質及中性物質的分離。以下簡單介紹吸附劑的幾個基本參數。

種類：常用：氧化鋁（強極性）、硅膠（中強極性）

不常用：硅藻土、纖維素、糖類、活性碳

符號：H——無任何添加劑；G——加有鍛石膏（Gypsum，CaSO4·1/2 H2O）粘合劑；

F——加有熒光素（Fluorescein）

CMC——加有羧甲基纖維素鈉（Carboxymethyl cellulose）

例：硅膠GF254表示硅膠中既加有煅石膏粘合劑，也加有熒光素，可以在波長254nm的紫外光下激發出熒光

粒度：目：1cm2內的篩孔數，數目越大，顆粒越小。薄層所用吸附劑顆粒較細，氧化鋁為200目，硅膠為100~150目。

μ：顆粒的平均直徑，以微米表示。例如：40μ的顆粒與100目相當。

活性：

吸附劑按其含水量的多少各分為五個等級：I級含水量最少，活性最高；V級含水量最多，活性最低；但並不是活性越高分離效果越好，選用哪種活性級別的吸附劑，要用實驗的方法來確定。

酸鹼性：

市售氧化鋁有酸性（用以分離酸性化合物）、中性、鹼性（用以分離生物鹼等鹼性化合物），其蒸餾水洗出液的pH值分別為4、7.5、9—10；其中以中性氧化鋁應用最廣，可用來分離各種化合物，特別是那些對酸、鹼敏感的化合物。

硅膠沒有酸鹼性之分。

（3）展開劑

在樣品組分-吸附劑-展開劑三個因素中。對一確定組分，樣品的結構和性質可看作是一不變因素，吸附劑和展開劑是可變因素。而吸附劑的種類有限，因此選擇合適的展開劑就成為解決問題的關鍵。展開劑的選擇有以下要求:

（a）對待測組分有很好的溶解度。

（b）能使待測組分與雜質分開，與基線分離。

（c）使展開後的組分斑點圓而集中，不應有拖尾現象。

（d）使待測組分的Rf值最好在0.4~0.5，如樣品中待測組分較多，Rf值則可在0.25~0.75范圈內，組分間的Rf值最好相差0.1左右。由於薄層色譜法用途非常廣泛，國內外均有現成的鋪有吸附劑的薄層板出售。一般實驗室中也可自己制備。

(e)不與組分發生化學反應，或在某些吸附劑存在下發生聚合。

(f)具有適中的沸點和較低的粘滯度。

展開劑的極性是指與樣品組分相互作用時。展開劑分子與吸附劑分子的色散作用、偶極作用、氫鍵作用及介電作用的總和。展開劑要根據樣品的極性及溶解度，吸附劑活性等因素進行選擇，總的原則是展開劑的極性能使組分的Rf值在0.5左右。常用溶劑極性次序是：石油醚<環己烷<苯<乙醚<氯仿<乙酸丁酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇。

如一種溶劑不能充分展開，可選用二元或多元溶劑系統。

4．展開槽與展開：

薄層的展開在密閉的容器即展開槽或稱為層析缸中進行。

展開：

合適的展開劑用量為浸及下端硅膠，但不浸及樣點；點樣端向下，每次只展開一塊，放在正中，以免爬斜（進而展開傾斜）。

5．顯色：

如果化合物本身有顏色，就可直接觀察它的斑點。如果本身無色，可先在紫外燈光下觀察有無熒光斑點（有苯環的物質都有），用鉛筆在薄層板上劃出斑點的位置；對於在紫外燈光下不顯色的，可放在含少量碘蒸氣的容器中顯色來檢查色點（因為許多化合物都能和碘成黃棕色斑點），顯色後，立即用鉛筆標出斑點的位置。常用

普適性顯色劑：濃硫酸、碘蒸氣、熒光素，專用顯色劑：茚三酮、三氯化鐵溶液等。

三、實驗儀器與葯品

儀器：半微量玻璃儀器一箱，小燒杯，層析缸(槽)，載玻片(100mm×25mm)乾燥器，電吹風，毛細管，移液管，研缽，布氏漏斗，抽濾裝置。

試劑：硅膠，1％ CMC，石油醚（60~90℃），乙醇，丙酮，乙醚，飽和NaCl溶液，無水Na2SO4

四、實驗步驟

1．制板：

將硅膠加 1％ CMC，調成槳狀(硅膠：CMC=1:3~4)（在平鋪玻璃板上能晃動但不能流動），將其塗在載玻片上（100mm×25mm）），為使其坦平，可將載玻片用手端平晃動，至平坦為止，放在干凈平坦的檯面上，晾乾之後放入105℃烘箱活化1小時，取出放入乾燥器內待用。

2、葉綠素的提取

在研缽中放入幾片(約5g)菠菜葉(新鮮的或冷凍的都可以．如果是冷凍的，解凍後包在紙中輕壓吸左水分)。加人10mL2:1石油醚和乙醇混合液，適當研磨。將提取液用滴管轉移至分液漏斗中，加人10 mL飽和NaCl溶液(防止生成乳濁液)除去水溶性物質，分去H2O層，再用蒸餾水洗滌兩次。將有機層轉入乾燥的小錐形瓶中，加2g入無水Na2SO4乾燥。乾燥後的液體傾至另—錐形瓶中(如溶液顏色太淺，可在通風櫃中適當蒸發濃縮)。

3、點樣

用一根內徑 1mm的毛細管，吸取適量提取液，輕輕地點在距薄板一端1.5cm處，平行點兩點，兩點相距1cm左右。若一次點樣不夠，可待樣品溶劑揮發後．再在原處點第二次，但點樣斑點直徑不得越過2mm。

4、展開

先在層析缸中放入展開劑[石油醚（60~90℃）-丙酮—乙醚(體積比為3:1:1)]，加蓋使缸內蒸氣飽10min， 再將薄層板斜靠於層析缸內壁。點樣端接觸展開劑但樣點不能浸沒於展開劑中，密閉層祈缸。待展開劑上升到距薄層板另一端約1crm時，取出平放，用鉛筆或小針劃前沿線位置，晾乾或用電吹風吹乾薄層。

五、實驗注意事項

1．制板時用注意使板上硅膠厚度盡量一致。

2．植物葉片不要研成糊狀，否則會給分離造成困難

『肆』 葉綠素的提取和分離實驗中,畫濾液細線用的液體是什麼

畫濾液細線用的液體：丙酮（作用：溶解葉綠體中的色素）
葉綠體中的色素都能夠溶解於有機溶劑丙酮中，所以，可以用丙酮提取葉綠體中的色素。
層析液（石油醚）：是一種脂溶性很強的有機溶劑。（作用：溶解並分離色素）
根據葉綠體中的四種色素在石油醚中的溶解度不同來進行分離，溶解度高的在濾紙上擴散的快，溶解度低的擴散得慢。溶解度最高的是胡蘿卜素，它隨石油醚在濾紙上擴散得最快，葉黃素和葉綠素a的溶解度次之；葉綠素b的溶解度最低，擴散得最慢。這樣，四種色素就在擴散過程中分離開來。

附：實驗教學方案—葉綠體中色素的提取和分離
實驗原理
葉綠體中的色素都能夠溶解於有機溶劑丙酮中，所以，可以用丙酮提取葉綠體中的色素。
層析液（石油醚）是一種脂溶性很強的有機溶劑。根據葉綠體中的四種色素在石油醚中的溶解度不同來進行分離，溶解度高的在濾紙上擴散的快，溶解度低的擴散得慢。溶解度最高的是胡蘿卜素，它隨石油醚在濾紙上擴散得最快，葉黃素和葉綠素a的溶解度次之；葉綠素b的溶解度最低，擴散得最慢。這樣，四種色素就在擴散過程中分離開來。
目的要求
1．學會提取和分離葉綠體中色素的方法和原理。 2．能分辨葉綠體中的四種色素。 材料用具
新鮮的綠色葉片（如菠菜葉片）。
乾燥的定性濾紙，燒杯（ 100 mL），研缽，玻璃漏斗，吸管，剪刀，小試管，葯勺，量筒（10ml），天平，試管架 丙酮，層析液，二氧化硅，碳酸鈣。
方法步驟
1．提取綠色葉片中的色素
（1）取幾片綠色的葉片，去掉葉柄和主脈，用天平稱取5g葉片，剪碎，放入研缽中。
（2）向研缽中放入少許二氧化硅和碳酸鈣，進行充分的研磨。用量筒量取5ml丙酮，倒入研缽中，迅速充分研磨。 （3）將研磨液迅速倒入小玻璃漏斗中進行過濾。將濾液收集到一個小試管中，及時用棉塞將試管目塞緊。
2．制備濾紙條
取一塊預先乾燥處理過的定性濾紙，將濾紙剪成長 10 cm、寬 1cm的濾紙條，在距濾紙條一端 1cm處用鉛筆畫一條細的橫線。
3．畫濾液細線、
用毛細吸管吸取少量濾液，沿鉛筆線均勻地畫出一條細而直的濾液細線。待濾液於後，再畫2~3次。
4．分離葉綠體中的色素
將3 mL層析液倒入燒杯中，將濾紙條（有濾液細線的一端朝下）略微料靠著燒杯的內壁，輕輕地插入到層析液中，隨後用培養皿蓋蓋上燒體；注意，不能讓濾紙上的濾液細線觸到層析液。 5．觀察實驗結果
看到四種色素的顏色後，取出濾紙條，觀察濾紙條上的色素帶顏色、位置、寬窄，並且填寫實驗報告。

『伍』 葉綠素的最早提取和分離的是哪一年

葉綠素，是高等植物和其它所有能進行光合作用的生物體含有的一類綠色色素。葉綠素a 和葉綠素b 均可溶於乙醇、乙醚和丙酮等溶劑，不溶於水，因此，可以用極性溶劑如丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯等提取葉綠素。

提取步驟：
葉綠素提取的准備工作是在一個半暗的房間里，室溫保持在25℃。提取步驟如下：
(1) 取1000克新鮮的綠葉，在韋氏攪切器中粉碎。
(2)將粉碎的1000克綠葉放進加有少量的碳酸鈣的丙酮中(溫度20℃)進行萃取，直到過濾、清洗後的葉子碎片為無色。
(3)將過濾後的丙酮提取液放到盛有1升石油醚和100ml丙酮的漏斗中，然後輕輕地旋轉，同時加放蒸餾水直到分層為止。水層的大部分丙酮和水溶雜質被丟棄，只剩石油醚溶液。
(4)將石油醚溶液用蒸餾水再次凈化後，用含有石油醚和0.01克草酸的200ml80%的甲醇溶液清洗5次以上，最後得到黃綠色懸浮液。
(5)用無水硫酸鈉對懸浮液進行乾燥，並將其滲入到3cm厚的蔗糖粉末製成柱中，然後用石油醚清洗沉澱的色素去掉類胡蘿卜素，使之只含有天然的葉綠素。
(6)含有天然葉綠素的蔗糖柱分兩層，綠層有4-10mm的葉綠素b層，另一藍層為2-6mm的葉綠素a層。
(7)將位於藍層正中的部分(約占藍層的一半) 放入醚中，對此懸浮液進行過濾、洗提，用蒸餾水清洗，用硫酸鈉乾燥，再用器皿進行過濾後，得到葉綠素a。
(8)將(6)中的綠層中間部分移出，迅速放入醚中過濾、洗提，製成葉綠素b醚溶液。

分離
色譜法是一種很好的分離純化、鑒定有機化合物的重要方法，尤其是在微量分析中應用的更是廣泛。果蔬中色素主要包括脂溶性的胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素和水溶性的花青素。在提取實驗時，我們可以利用相似相溶的原理把水溶性的花青素濾掉，繼而可以利用薄層色譜、柱色譜、高效液相色譜對胡蘿卜素、葉黃素和葉綠素進行分離，由於這三種色素的極性依次減弱，可以適當地選擇單一的有機溶劑或者不同配比的混合溶劑作為展開劑和洗脫劑，確定最佳的優化分離條件。

具體的實驗步驟如下：

一 實驗目的
1．掌握提取葉綠素的方法；
2．了解薄層層析的原理，掌握薄層層析的一般操作和定性鑒定方法

二 實驗原理
1．葉綠素提取
高等植物體內的葉綠體色素有葉綠素和類胡蘿卜素兩類，主要包括葉綠素a (C55H72O5N4Mg)、葉綠素b(C55H70O6N4Mg)、β—胡蘿卜素(C40H56)和葉黃素(C40H56O2)等4種。葉綠素a和葉綠素b為吡咯衍生物與金屬鎂的配合物，胡蘿卜素是一種橙色天然色素，屬於四萜類，為一長鏈共軛多烯，有α、β、γ三種異構體，其中，β異構體含量最多。葉黃素為一種黃色色素，與葉綠素同存在於植物體中，是胡蘿卜素的羥基衍生物，較易溶於乙醇，在乙醚中溶解度較小。根據它們的化學特性，可將它們從植物葉片中提取出來，並通過萃取、沉澱和色譜方法將它們分離開來。

2．薄層色譜
薄層層析是快速分離和定性分析微量物質的一種極為重要的實驗技術，具有設備簡單、操作方便而快速的特點。它是將固定相支持物均勻地鋪在玻片上製成薄層板，將樣品溶液點加在起點處，置於層析容器中用合適的溶劑展開而達到分離的目的。用此法分離時幾乎不受溫度的影響，可採用腐蝕性顯色劑，而且可在高溫下顯色，特別適用於揮發性小或在較高溫度下易發生反應的物質，同時也常用來跟蹤有機反應或監測有機反應完成的程度。
薄層層析的器材選擇：

（1）基板：玻璃、塑料、金屬箔，常用玻璃板。

（2）吸附劑：
吸附劑要有合適的吸附力，並且必須與展開劑和被吸附物質均不起化學反應。可用作吸附劑的物質很多，常用的有硅膠和氧化鋁，由於吸附性好，適用於各類化合物的分離，應用最廣。選擇吸附劑時主要根據樣品的溶解度、酸鹼性及極性。氧化鋁一般是微鹼性吸附劑，適用於鹼性物質及中性物質的分離；而硅膠是微酸性吸附劑，適用於酸性物質及中性物質的分離。以下簡單介紹吸附劑的幾個基本參數。
種類：常用：氧化鋁（強極性）、硅膠（中強極性）
不常用：硅藻土、纖維素、糖類、活性碳
符號：H——無任何添加劑；G——加有鍛石膏（Gypsum，CaSO4·1/2 H2O）粘合劑；
F——加有熒光素（Fluorescein）
CMC——加有羧甲基纖維素鈉（Carboxymethyl cellulose）
例：硅膠GF254表示硅膠中既加有煅石膏粘合劑，也加有熒光素，可以在波長254nm的紫外光下激發出熒光
粒度：目：1cm2內的篩孔數，數目越大，顆粒越小。薄層所用吸附劑顆粒較細，氧化鋁為200目，硅膠為100~150目。
μ：顆粒的平均直徑，以微米表示。例如：40μ的顆粒與100目相當。
活性：
吸附劑按其含水量的多少各分為五個等級：I級含水量最少，活性最高；V級含水量最多，活性最低；但並不是活性越高分離效果越好，選用哪種活性級別的吸附劑，要用實驗的方法來確定。
酸鹼性：
市售氧化鋁有酸性（用以分離酸性化合物）、中性、鹼性（用以分離生物鹼等鹼性化合物），其蒸餾水洗出液的pH值分別為4、7.5、9—10；其中以中性氧化鋁應用最廣，可用來分離各種化合物，特別是那些對酸、鹼敏感的化合物。
硅膠沒有酸鹼性之分。

（3）展開劑
在樣品組分-吸附劑-展開劑三個因素中。對一確定組分，樣品的結構和性質可看作是一不變因素，吸附劑和展開劑是可變因素。而吸附劑的種類有限，因此選擇合適的展開劑就成為解決問題的關鍵。展開劑的選擇有以下要求:
（a）對待測組分有很好的溶解度。
（b）能使待測組分與雜質分開，與基線分離。
（c）使展開後的組分斑點圓而集中，不應有拖尾現象。
（d）使待測組分的Rf值最好在0.4~0.5，如樣品中待測組分較多，Rf值則可在0.25~0.75范圈內，組分間的Rf值最好相差0.1左右。由於薄層色譜法用途非常廣泛，國內外均有現成的鋪有吸附劑的薄層板出售。一般實驗室中也可自己制備。
(e)不與組分發生化學反應，或在某些吸附劑存在下發生聚合。
(f)具有適中的沸點和較低的粘滯度。
展開劑的極性是指與樣品組分相互作用時。展開劑分子與吸附劑分子的色散作用、偶極作用、氫鍵作用及介電作用的總和。展開劑要根據樣品的極性及溶解度，吸附劑活性等因素進行選擇，總的原則是展開劑的極性能使組分的Rf值在0.5左右。常用溶劑極性次序是：石油醚<環己烷<苯<乙醚<氯仿<乙酸丁酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇。
如一種溶劑不能充分展開，可選用二元或多元溶劑系統。

3．展開槽與展開：
薄層的展開在密閉的容器即展開槽或稱為層析缸中進行。
展開：
合適的展開劑用量為浸及下端硅膠，但不浸及樣點；點樣端向下，每次只展開一塊，放在正中，以免爬斜（進而展開傾斜）。

4．顯色：
如果化合物本身有顏色，就可直接觀察它的斑點。如果本身無色，可先在紫外燈光下觀察有無熒光斑點（有苯環的物質都有），用鉛筆在薄層板上劃出斑點的位置；對於在紫外燈光下不顯色的，可放在含少量碘蒸氣的容器中顯色來檢查色點（因為許多化合物都能和碘成黃棕色斑點），顯色後，立即用鉛筆標出斑點的位置。常用
普適性顯色劑：濃硫酸、碘蒸氣、熒光素，專用顯色劑：茚三酮、三氯化鐵溶液等。

三、實驗儀器與葯品
儀器：半微量玻璃儀器一箱，小燒杯，層析缸(槽)，載玻片(100mm×25mm)乾燥器，電吹風，毛細管，移液管，研缽，布氏漏斗，抽濾裝置。
試劑：硅膠，1％ CMC，石油醚（60~90℃），乙醇，丙酮，乙醚，飽和NaCl溶液，無水Na2SO4

四、實驗步驟

1．制板：
將硅膠加 1％ CMC，調成槳狀(硅膠：CMC=1:3~4)（在平鋪玻璃板上能晃動但不能流動），將其塗在載玻片上（100mm×25mm）），為使其坦平，可將載玻片用手端平晃動，至平坦為止，放在干凈平坦的檯面上，晾乾之後放入105℃烘箱活化1小時，取出放入乾燥器內待用。

2、葉綠素的提取
在研缽中放入幾片(約5g)菠菜葉(新鮮的或冷凍的都可以．如果是冷凍的，解凍後包在紙中輕壓吸左水分)。加人10mL2:1石油醚和乙醇混合液，適當研磨。將提取液用滴管轉移至分液漏斗中，加人10 mL飽和NaCl溶液(防止生成乳濁液)除去水溶性物質，分去H2O層，再用蒸餾水洗滌兩次。將有機層轉入乾燥的小錐形瓶中，加2g入無水Na2SO4乾燥。乾燥後的液體傾至另—錐形瓶中(如溶液顏色太淺，可在通風櫃中適當蒸發濃縮)。

3、點樣
用一根內徑 1mm的毛細管，吸取適量提取液，輕輕地點在距薄板一端1.5cm處，平行點兩點，兩點相距1cm左右。若一次點樣不夠，可待樣品溶劑揮發後．再在原處點第二次，但點樣斑點直徑不得越過2mm。

4、展開
先在層析缸中放入展開劑[石油醚（60~90℃）-丙酮—乙醚(體積比為3:1:1)]，加蓋使缸內蒸氣飽10min， 再將薄層板斜靠於層析缸內壁。點樣端接觸展開劑但樣點不能浸沒於展開劑中，密閉層祈缸。待展開劑上升到距薄層板另一端約1crm時，取出平放，用鉛筆或小針劃前沿線位置，晾乾或用電吹風吹乾薄層。

五、實驗注意事項
1．制板時用注意使板上硅膠厚度盡量一致。
2．植物葉片不要研成糊狀，否則會給分離造成困難

『陸』 葉綠素的提取

葉綠素提取的准備工作是在一個半暗的房間里，室溫保持在25℃。提取步驟如下：
(1) 取1000克新鮮的綠葉，在韋氏攪切器中粉碎。
(2)將粉碎的1000克綠葉放進加有少量的碳酸鈣的丙酮中(溫度20℃)進行萃取，直到過濾、清洗後的葉子碎片為無色。
(3)將過濾後的丙酮提取液放到盛有1升石油醚和100ml丙酮的漏斗中，然後輕輕地旋轉，同時加放蒸餾水直到分層為止。水層的大部分丙酮和水溶雜質被丟棄，只剩石油醚溶液。
(4)將石油醚溶液用蒸餾水再次凈化後，用含有石油醚和0.01克草酸的200ml80%的甲醇溶液清洗5次以上，最後得到黃綠色懸浮液。
(5)用無水硫酸鈉對懸浮液進行乾燥，並將其滲入到3cm厚的蔗糖粉末製成柱中，然後用石油醚清洗沉澱的色素去掉類胡蘿卜素，使之只含有天然的葉綠素。
(6)含有天然葉綠素的蔗糖柱分兩層，綠層有4-10mm的葉綠素b層，另一藍層為2-6mm的葉綠素a層。
(7)將位於藍層正中的部分(約占藍層的一半) 放入醚中，對此懸浮液進行過濾、洗提，用蒸餾水清洗，用硫酸鈉乾燥，再用器皿進行過濾後，得到葉綠素a。
(8)將(6)中的綠層中間部分移出，迅速放入醚中過濾、洗提，製成葉綠素b醚溶液。

『柒』 葉綠素的提取實驗中,為什麼要加蒸餾水請您回答的詳細一點.謝謝!

葉綠體色素在葉綠體內以其親水部分與蛋白質結合,親脂部分與類脂結合,純的有機溶劑不能打破色素與蛋白質的聯系，所以必須用能與水混溶的有機溶劑並有少量水存在時,才能將葉綠素提取出來。

『捌』 葉綠體色素提取,分離及理化性質的鑒定實驗報告

實驗三 葉綠體色素的提取分離與理化性質鑒定
一、實驗目的
1、學會葉綠體色素提取和分離的方法。
2、了解葉綠體色素的熒光現象、皂化反應等理化性質。
二、實驗原理
葉綠體中含有綠色素（包括葉綠素a和葉綠素b）和黃色素（包括胡蘿卜素和葉黃素）兩大類，這兩類色素都不溶於水，而溶於有機溶劑，故可用乙醇或丙酮等有機溶劑提取。
提取液可用色層分析的原理加以分離。因吸附劑對不同物質的吸附力不同，當用適當的溶劑推動時，混合物中各成分在兩相（流動相和固定相）間具有不同的分配系數，所以它們的移動速度不同，經過一定時間層析後，便將混合色素分離。
葉綠素是一種二羧酸——葉綠酸與甲醇和葉綠醇形成的復雜酯，故可與鹼起皂化反應而生成醇（甲醇和葉綠醇）和葉綠酸的鹽，產生的鹽能溶於水中，可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開；葉綠素與類胡蘿卜素都具有光學活性，葉綠素吸收光量子而轉變成激發態，激發態的葉綠素分子很不穩定，當它變回到基態時可發射出紅光量子，因而產生熒光。葉綠素中的鎂可以被H+所取代而成褐色的去鎂葉綠素，後者遇銅則成為綠色的銅代葉綠素，銅代葉綠素很穩定，在光下不易破壞，故常用此法製作綠色多汁植物的浸漬標本。
三、實驗器材
新鮮的植物葉片。
研缽；漏斗；100ml三角瓶；玻璃棒；剪刀；滴管；培養皿；定性濾紙條（5cm×1.5cm）。
毛細管；試管；試管架；石棉網；燒杯（100ml）；酒精燈；鐵三角架；刻度吸量管2ml、5ml各1支。
四、實驗試劑
1、95%乙醇；石英砂；碳酸鈣粉
2、推動劑：按石油醚：丙酮：苯（10：2：1）比例配製（體積比）
3、醋酸銅粉末；5%的稀鹽酸
4、甲醇、KOH
五、實驗步驟
1．葉綠體色素的提取
（1）取菠菜或其他植物新鮮葉片4~5片（2g左右），洗凈，擦乾，去掉中脈，剪碎，放入研缽中。
（2）研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉，加2~3ml 95%乙醇，研磨至糊狀，再加10ml 95%乙醇，暗處放置3~5min，上清液過濾於三角瓶中，殘渣用10ml 95%乙醇沖洗，一同過濾於三角瓶中。
2. 葉綠體色素的分離
（1）取一塊預先乾燥處理過的定性濾紙，將它剪成長約10cm ，寬約1cm的濾紙條。
（2）用毛細管吸取色素提取液。在濾紙條的一端（約距這一端的1cm處）劃出一條濾液細線，等濾液乾燥後，再重復劃4～5次。
（3）將濾紙條的另一端（約距這一端1cm處）折成「V」字形，並將它掛在放有層析液的燒杯壁上（注意：色素線要略高於層析液面，且濾紙條下端最好不要碰到燒杯壁），蓋上培養皿。
3.葉綠體色素的性質鑒定
(1)熒光現象的觀察
取1支20ml刻度試管加入5ml葉綠體色素乙醇提取液，在直射光下觀察溶液的透射光與反射光顏色有何不同？解釋原因。
(2)皂化作用（綠色素與黃色素的分離）
在做過熒光現象觀察的葉綠體色素乙醇提取液試管中加入1.5ml 20%KOH-甲醇溶液，充分搖勻。片刻後，加入5ml苯，搖勻，再沿試管壁慢慢加入1～1.5ml蒸餾水，輕輕混勻（勿激烈搖盪），於試管架上靜置分層。若溶液不分層，則用滴管吸取蒸餾水，沿管壁滴加，邊滴加邊搖動，直到溶液開始分層時，靜置。可以看到溶液逐漸分為兩層，下層是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化的葉綠素a和b（以及少量的葉黃素）；上層是苯溶液，其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素。
(3)H+和Cu++對葉綠素分子中Mg++的取代作用
取上述色素乙醇提取液少許於試管中，加入5%HCl數滴，搖勻，直至溶液出現褐綠色，當溶液變褐後，再加入少量醋酸銅粉末，微微加熱，觀察記載溶液顏色變化情況。
六、注意事項
1、為了避免葉綠素的光分解，操作應在弱光下進行。
2、研磨時間盡可能短些，以不超過兩分鍾為宜。
3、在低溫下發生皂化反應的葉綠體色素溶液，易乳化而出現白絮狀物，溶液渾濁，且不分層。可激烈搖勻，放在30～40℃的水浴中加熱，溶液很快分層，絮狀物消失，溶液變得清澈透明。
七、實驗報告
1、將紙層析法分離葉綠體色素的實驗結果貼在實驗報告紙上，並給予分析。
《你看著少抄點》

『玖』 某班學生以新鮮菠菜葉為材料進行葉綠體中色素的提取和分離的實驗時，由於各組操作不同，出現了如圖所示的

A、光合色素不能溶於水，甲沒有色素，可能是誤用蒸餾水做提取液和層析液，故A正確；
B、乙中色素的量較少，可能是因為研磨時未加入SiO₂，導致研磨不充分、提取色素含量少，故B正確；
C、丙中葉綠素含量比類胡蘿卜素含量低，可能是因為研磨時未加入CaCO₃，導致部分色素被破壞，故C錯誤；
D、丁中葉綠素含量比類胡蘿卜素含量低，且色素含量較少，可能是因為研磨時未加入CaCO₃，導致部分色素被破壞所致，故D正確．
故選：C．