① 免疫球蛋白提取實驗注意事項及原因
IgG的分離與提純
（一）材料與試劑配製
1．動物血清
2．硫酸銨飽和溶液
硫酸銨 800g~850g
H2O 1 000ml
加熱至絕大部分溶質溶解為止，趁熱過濾，置室溫過夜，然後以28％NH4OH調pH至7.0（不調pH值也可以）。
註：硫酸銨以質量優者為佳，因次品中含有少量重金屬對蛋白質巰基有影響。如次品必須除去重金屬，可在溶液中通入H2S，靜置過夜後濾過，加熱蒸發H2S即可。
3．0.01Mol/L pH7.4PB液
A液：0.10Mol/L NaH2PO4液
NaH2PO4•2H2O 15.60g
加H2O至 1 000.ml
B液：0.10Mol/L Na2HPO4液
Na2HPO4•12H2O 35.80g
加H2O至 1 000ml
取A液19ml，B液81ml加水至1 000ml即可。
4．1％BaCl2溶液
5．納氏液
HgI 115.00g
KI 80.00g
加H2O至 500.00ml
溶化後過濾，然後再加20％NaOH500.00ml，混合即可。
6．0.50 Mol/L的HCl液和0.50 Mol/L的NaOH液。
7．洗脫液：0.03Mol/L的NaCl液。
8．透析袋（或玻璃紙）。
（二）操作方法
1．取20ml血清，加生理鹽水20ml，再逐滴加入(NH4)2SO4飽和溶液10ml，使成20％(NH4)2SO4溶液，邊加邊攪拌，充分混合後，靜置30min。
2．3 000r/min離心20min，棄去沉澱，以除去纖維蛋白。
3．在上清液中再加（NH4）2SO4飽和溶液30ml，使成50％（NH4）2SO4溶液，充分混合，靜置30min。
4．3 000r/min離心20min，棄上清。
5．於沉澱中加20ml生理鹽水，使之溶解，再加(NH4)2SO4飽和溶液10ml，使成33％(NH4)2SO4溶液，充分混合後，靜置30min。
6． 3 000r/min離心20min，棄上清，以除去白蛋白。重復步驟5，2~3次。
7． 用10ml生理鹽水溶解沉澱，裝入透析袋。
8． 透析除鹽，在常水中透析過夜，再在生理鹽水中於4℃透析24h，中間換液數次。
以1％BaCl2檢查透析液中的SO42-或以納氏試劑檢查NH4+（取3~4ml透析液，加試劑1~2滴，出現磚紅色即認為有NH4+存在），直至無 SO42-或NH4+出現為止。也可採用SephadexG25或電透析除鹽。
9． 離心去沉澱（去除雜蛋白），上清液即為粗提IgG （即γ球蛋白，如以36％的飽和硫酸銨沉澱血清的產物即為優球蛋白，Euglobin，含γ球蛋白)。
10．過DEAE－纖維素層析柱。（裝柱過程見層析技術）。以0.01Mol/L pH7.4PBS（0.03Mol/L NaCl）洗脫，收集洗脫液。
也可採用SephadexG150或G200柱。
11．蛋白質及其定量鑒定（見本章第八節）。
12．IgG的純度鑒定 可採用下列方法之一鑒定。
⑴ 區帶電泳：玻片瓊脂或醋酸纖維膜電泳均可。加樣電泳後，只在γ—球蛋白的遷移部位出現一條帶。操作時，同時可用全血清樣品，不同濃度（NH4）2SO4鹽析樣品進行電泳，以資比較。
⑵ 瓊脂雙相雙擴散鑒定：預先准備該IgG免疫異種動物所獲的抗IgG血清。將IgG與抗IgG血清進行雙相雙擴散，如IgG提純的話，則在兩樣品孔之間出現一條沉澱線。
⑶ 免疫電泳鑒定：（操作見第三章免疫電泳部分）。孔內加待測樣品，電泳後，在槽內加抗IgG血清，瓊脂擴散24h，觀察結果。如果提取的IgG純的話，則只出現一條弧形的沉澱線，且沉澱線位於γ—球蛋白區。此鑒定必須同時進行全血清及抗血清抗體的免疫電泳，以資比較。
⑷ 圓盤電泳鑒定：用全血清樣品及提純樣品同時進行圓盤電泳。全血清樣品在圓盤電泳上出現數十條區帶，而純化的IgG則只有一條區帶。
13．IgG的濃縮與保存
⑴ IgG的濃縮：參看本章第九節。
⑵ IgG的保存：一般濃縮至1％以上的濃度，再分裝成小瓶凍干保存，或加0.01％硫柳汞在普通冰箱或低溫冰箱保存，注意防止反復凍融。
（三）IgG的簡易快速提取法
應用硫酸銨鹽析及DEAE-纖維素層析法提純化的IgG，不僅操作復雜、需時較長，處理過程中樣品體積大大增加，而且透析時變性嚴重，容易引起抗體效價降低等。為了克服這一不足，特別是當大量提取IgG時，則往往採取下列的簡易辦法。
1． DEAE-纖維素直接提取法
取樣品直接過DEAE-纖維素柱。下面介紹的是最為簡單的燒杯法。
⑴ 以一定數量的DEAE52放入燒杯中，加入0.01Mol/L pH8.0PB緩沖液，靜置30min，去上清細粒，再重復一次。
⑵用布氏漏斗（內放兩層濾紙）過濾。
⑶以5g濕重的DEAE-纖維素加1ml血清及3ml蒸餾水混合液的比例，加入各成分，充分攪拌。
⑷於4℃中放置1h，中間攪拌數次。
⑸用布氏漏斗抽濾，再用0.01Mol/L pH8.0PB緩沖液沖洗纖維素，抽濾。濾液即為提取的IgG液。
2．DEAE－SephadexA－50為弱鹼性陰離子交換劑，經NaOH將Cl-型轉變為OH-型後，可吸附酸性蛋白，血清中除γ－G屬中性蛋白外其餘均屬酸性蛋白。當溶液的pH在6.5時，酸性蛋白均被DEAE－SephadexA－50吸附，只有γ－G留在溶液中。因此利用這一原理可以提取γ－G。這種提取法流程大大縮短，純化前後樣品體積變化不大，而且所得γ－G無變性現象。經過四次處理，其純度也較好。缺點是收集量少，損耗大。
⑴ DEAE—SephadexA—50的處理。取DEAE－SephadexA－50若干克，懸浮於蒸餾水中，1h後傾去上層小顆粒，然後用0.50Mol/L NaOH處理1h，蒸餾水洗至中性，再用0.5 Mol/L HCl處理0.5h，水洗至中性，最後以0.01Mol/L pH6.5PB液平衡、抽干。
⑵ 取一定的血清量，加等量的0.01Mol/L pH6.5PB液，再加液體體積1/4的濾乾的DEAE－SephadexA－50，混合、4℃放置1h，不時攪拌、抽濾、收集濾液。
⑶ 再用同樣重量的DEAE－SephadexA－50處理濾液。反復處理三次。（全程共四次）。獲得濾液即為γ－G製品。
⑷ DEAE－SephadexA－50的回收。用0.5Mol/L的Na2HPO4洗脫，抽濾至濾液中無蛋白（OD280﹤0.04）後，再用蒸餾水洗至中性即可回收使用。
② 蛋白質在水溶液中加酸或者加鹼分子狀態會怎麼變化
生物鹼試劑本質就是酸類，它們一般均導致蛋白質變性.因為反應機理是 跟蛋白質側鏈上陽性離子（如氨基等）發生酸鹼成鹽反應，而側鏈氨基常參與蛋白質的高級結構或酶的活性中心，因此變性.（蛋白質鹽是很大的分子，沉澱是很自然的）。
大多數生物鹼在酸水或稀醇中能與某些試劑反應生成難溶於水的復鹽或分子絡合物,這些試劑稱為生物鹼沉澱試劑.
1.常用的生物鹼沉澱試劑
碘化物復鹽、重金屬鹽、大分子酸類等.常見的生物鹼沉澱試劑有碘-碘化鉀試劑、碘化鉍鉀試劑、碘化汞鉀試劑等.
2.生物鹼沉澱反應的條件
（1）反應環境
生物鹼沉澱的反應一般在稀酸水溶液中進行.
（2）凈化處理
共存的蛋白質、多肽、鞣質等成分,這些物質也能與生物鹼沉澱試劑發生沉澱的反應.為了避免其干擾,可將酸水液經鹼化後用氯仿萃取,除去水溶性干擾成分,然後用酸水從氯仿中萃取出生物鹼,以此酸水液進行沉澱反應.
3.生物鹼沉澱反應陽性結果的判斷
（1）陽性結果判斷
一般需選用三種以上的沉澱試劑進行反應,如果均有生物鹼的沉澱反應,可判斷為陽性結果.
（2）需要注意的問題
①少數生物鹼不能與一般生物鹼沉澱試劑產生沉澱反應.如麻黃鹼、咖啡鹼與多數生物鹼沉澱試劑不能發生沉澱反應.
②中葯中有些非生物鹼類物質也能與生物鹼沉澱試劑產生沉澱的應,如蛋白質、多肽、氨基酸、鞣質等.
4.生物鹼沉澱反應的應用
（1）檢識反應
（2）指導生物鹼的提取分離
（3）生物鹼的分離純化
（4）薄層或紙層色譜的顯色劑
③ 蛋白質中加稀硫酸，再加蒸餾水的現象及作用
你是想問蛋白質會不會像酯一在稀硫酸水解。蛋白質在鹼性條件下才可以水解，酸性不發生反應
④ 蛋白質測定時，樣品經消化蒸餾之前為什麼要加入氫氧化鈉加入量對測定結果有何影響
1加入氫氧化鈉是因為氫氧化鈉和硫酸銨在加熱條件下生成氨氣溢出。
2加入量需要過量回，估計樣品氮含量，計答算所需量，加入量最少超過所需量，還要中和消解過程中未分解的硫酸一般是1.5倍+消解時加入的硫酸量
3溶液顏色變化，如果本來是澄清溶液，此後會變黑、褐灰等顏色
4顏色變化是銅離子的存在的原因，變黑是銅離子和氫氧根離子變成氫氧化銅。不穩定生成氧化銅（黑色）所致
5如果沒有變化，是加人氫氧化鈉量不夠所致
以上內容又本人經驗所得，沒有參考任何文獻，希望對樓主有所幫助！
⑤ 蛋白質消化樣品蒸餾之前要加入氫氧化鈉這時溶液的顏色會發生什麼變化為什麼蛋
變黃色 蛋白質分子含有NH3（氨基） 會和鹼反應 脫氨基就變黃了
⑥ 蛋白質鹼法水解步驟
蛋白質在鹼的作用下，水解後氨基酸會消旋，但色氨酸穩定。與5摩爾每升的氫氧化鈉共煮10——20h即可
⑦ 蛋白質加入NaOH水浴加熱後為什麼會產生絮狀沉澱
蛋白質在強鹼作用下變性，特定的空間結構被破壞，疏水側鏈暴露在外，肽鏈融匯相互纏繞而聚集，因而從溶液中析出，即蛋白質沉澱。若再加熱則絮狀物可變為較堅固的凝塊，此凝塊不溶於強酸強鹼，即蛋白質的凝固作用。
⑧ 檢測生物組織中的糖類 蛋白質 和脂肪的實驗 要求有詳細實驗步驟和注意事項還有實驗現象 高懸賞！！！
解析度：
A，電影和抄縮二脲試劑試劑雖然相同的成分，但濃度，用法，用量是不同的，如電影試劑B液（0.05g/ml）和雙縮脲試劑B液（0.01克/毫升）用不同濃度，使故障。 />乙，脂肪材料的識別給定的兩個方法：檢測到的宏小區脂肪的花生種子，粉碎後得到的樣品溶液，以及佳蘇丹III染色可直接觀察到，而無需使用顯微鏡。第二種方法必須是脂肪。 B錯
D，縮二脲的蛋白質鑒定，沒有水洗澡，D錯
正確答案選項C.
房東，不知道答案，滿足你嗎？