❶ 吸光度測定過程中怎樣選擇比色皿
1. 首先是確定比色皿的種類: 如果使用到紫外光,一定用石英比色皿。因為玻璃比內色皿對紫外光有容吸收,而且測定時吸光度波動很大,跳的厲害。 如果用的是可見光,那麼石英和玻璃的就無所謂了。
2. 降低比色皿間的誤差: 這個也就是測定時一般至少需要2個比色皿,一個參比,一個測定。或者更多個測定比色皿(2或3個)。 那麼就存在一個這幾個比色皿是否會存在差異的問題。 所以使用前,一般都使用蒸餾水或超純水加入比色皿中,將外壁擦拭乾凈,測定吸光度。如果比色皿都一致的話,測定的吸光度為0(玻璃吸收的光一樣)。但是如果不一致的話,有的外壁可能吸收的多些或少些,就導致吸光度出現一個很小的正值或負值。所以一般就是選用手邊誤差最小的幾個測定了。
當然,如果不著急的話,就用2個比色皿,那樣就是麻煩些,但是由比色皿造成誤差的原因就大大降低了
❷ 為什麼在進行比色測定時要用蒸餾水校正吸光度「0」,有什麼作用
1
蒸餾水就是起到空白的作用
我們測定樣品,若是用水做溶劑,那麼水內就是它的空白。因為水也容有吸光度,當我們用水做空白時,便將待測液的干擾排除了。
若是用乙酸乙酯做溶劑,那麼空白就需要換成乙酸乙酯。
2因為比色分析的定量依據是
朗博--比爾
定律;它僅適用有色物質;測定時要扣除比色皿及其非待測物的吸光度,才能用於
朗博--比爾
定律;設置空白管,就是得到:扣除比色皿及其非待測物的吸光度
的作用.
3在比色分中測量波長一般在200-800nm,200-380nm為紫外區,370-800nm為可見區.吸光度范圍的選擇在0.2—0.8,如果吸光度過高,要稀釋一定倍數,如果吸光度過低,要重新配置樣液,增大濃度,因為吸光度值在0.2-0.8時,測定的靈敏度較高,數值准確.
一般,可根據文獻,對類似物質選擇適當的分析波長。
❸ 分光光度計測量溶液吸光度出現異常,急!
溶液配製有問題,1號標本來濃度就低,儀器解析度低可能出現這種情況,建議多配幾個標樣,可以消除個別標樣配製不準帶來的誤差。
❹ 為什麼測定吸光度是要用空白液調0,而不直接用等量的蒸餾水
空白參比 排除干擾。。。可能和溶劑有關。。我們是用去離子水溶解所以用去離子水做參比溶液
❺ 吸光度大於1怎麼回事
吸光度來大於1從理論上來說,是可以的自
但是實驗中,吸光度一般在0.1-0.8之間的數值比較合適
你首先應該檢查你的溶液濃度是否合適,可以按倍數稀釋測定,如果稀釋之後吸光度還是大於1,那應該是儀器本事出現問題。
儀器要檢查的第一個,測定如果在紫外波段,是否使用了玻璃比色皿???
如果比色皿沒有問題,請檢查儀器的卡位是否正確,另外還有透光的孔是否有遮擋等,如果都沒有,那就需要拆開機子檢查內部的光源和檢測器。
❻ 請問最大吸收時,吸光度在多少是最好的如果濃度太大,吸收峰的吸光度超過4,這樣好么是用於畢業論文的
葉綠體色素在不同溶劑中的吸光光譜有差異
1.如果是80%的丙酮提取液,葉綠素a和葉綠素b在紅光區的最大吸收峰分別為663nm和645nm;
在663nm下葉綠素a和葉綠素b在溶液中的吸光系數分別為82.04和9.27,在645nm下下葉綠素a和葉綠素b在溶液中的吸光系數分別為16.75和45.6;
由加和性原則有
(1)A663=82.04×Ca 9.27×Cb; (2)A645=16.75×Ca 45.60×Cb
(A663和A645為葉綠素溶液在波長663nm和645nm時的吸光度,Ca和Cb為葉綠素a和葉綠素b的濃度,單位:mg/L,以下同理類推)
解得上方程組知:
Ca=12.72×A663-2.59×A645; Cb=22.88×A645-4.67×A663
(注意:還有修正的式子波長646nm下Ca=12.21×A663-2.81×A646)
2.如果是95%乙醇提取液,葉綠素a和葉綠素b的最大吸收峰波長分別為665nm和649nm; 同理可以得到一下關系式 :
Ca=13.95×A665-6.88×A649; Cb=24.96×A649-7.32×A665
注(知識點來源):高等教育出版社;王學奎 主編;《植物生理生化實驗原理和技術》(第二版)
❼ 測定吸光度時,如果吸光值過大或過小,如何改進實驗
大了好辦,稀釋就行,過小你就加大點濃度唄,還是你只有稀溶液?這樣可以建立方法定量濃縮(比如取100ml蒸干後取樣溶解)或者用更精密的儀器
❽ 為什麼在進行比色測定時要用蒸餾水校正吸光度「0」,有什麼用
1 蒸餾水就是起到空白的作用 我們測定樣品,若是用水做溶劑,那麼水就是它的空白。因為回水也有吸光度,當我們答用水做空白時,便將待測液的干擾排除了。 若是用乙酸乙酯做溶劑,那麼空白就需要換成乙酸乙酯。
2因為比色分析的定量依據是 朗博--比爾 定律;它僅適用有色物質;測定時要扣除比色皿及其非待測物的吸光度,才能用於 朗博--比爾 定律;設置空白管,就是得到:扣除比色皿及其非待測物的吸光度 的作用.
3在比色分中測量波長一般在200-800nm,200-380nm為紫外區,370-800nm為可見區.吸光度范圍的選擇在0.2—0.8,如果吸光度過高,要稀釋一定倍數,如果吸光度過低,要重新配置樣液,增大濃度,因為吸光度值在0.2-0.8時,測定的靈敏度較高,數值准確.
一般,可根據文獻,對類似物質選擇適當的分析波長。
❾ 為什麼測定吸光度是要用空白液調0,而不直接用等量的蒸餾水
因為在每個波長下 ,水的吸光度是不一樣的,理論上應該用蒸餾水作空白。。。。。
❿ 吸光度a過大或過小對測定結果有什麼影響為什麼
我們做分光光度計的時候,吸光度值要控制在0.2-0.8范圍內。