上液相时纯水甲醇和标品跑出来均在同一时间出峰

A. 液相检验时甲醇的溶剂峰在几分钟

最好不要。
溶剂最好是使用流动相。因为纯乙腈，纯甲醇和流动相之间会有差异存在。
第一是溶解度的问题，很多样品在有机溶剂中溶解度很好，在水相中溶解度稍差。这样的样品在用甲醇、乙腈配制时溶解非常好，但是到流动相中可能会析出，从而堵住进样口。
第二就是极性和酸碱度差异问题。如果流动相中水相比例很高，或者酸碱度偏差很大，那么样品很可能会出现肩峰或者叉峰的情况。
有的样品可以用纯水作为溶剂，但是一般的实验都尽量避免用纯乙腈或者甲醇作为溶剂。

B. 液相色谱仪使用及工作原理。

液相色谱仪是利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，专对混合物进行先分离，属而后分析鉴定的仪器。广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。

液相色谱仪工作原理：统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中液相色谱仪的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点。

深圳埃科瑞仪器设备有限公司是一家集研发、设计、生产、销售、售后为一体的仪器设备公司，公司GC102AF 型气相色谱仪是完全计算机反控，可以实现远程仪器检测和故障诊断的配备氢火焰离子化检测器（FID）的新一代普及型气相色谱仪。

C. 液相色谱工作原理

系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点。
1．进样系统
液相色谱仪
一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。
2．输液系统
该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l．47～4．4X10Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存器和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质（即使仅有一个基团的差别或是同分异构体）都能获得有效分离。
3.分离系统
该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管），内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成）．固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性（如硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔径可达1000?）和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍（与气相色谱中固定相的制备一样），或者用化学法偶联各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。 另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。 再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C，通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。
液相色谱仪常见故障处理
1、气泡溢出
流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0～3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。
2、柱压高原因
(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内; (2)样品污染沉积。处理对于第一种情况先用40～50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
3、既无压力指示,又无液体流过
(1)泵密封垫圈磨损; (2)大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
4、压力波动大,流量不稳定
原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
5、出峰不佳,峰分叉
(1)色谱柱被污染; (2)柱头填料塌陷。处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。
6、峰面积重复性不佳
(1)进样阀漏液; (2)加样针不到位。 (3)液量不足. 处理对于第一种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。日常工作中,液相色谱仪的保养非常重要,如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质,完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染,以延长色谱柱的使用寿命,同时避免注射过浓的样品溶液,以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。

D. 液相色谱所用流动相使用时应注意哪些问题

1、流动相恢复到室温后使用。流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定，特别是发生漂移，也容易产生气泡等现象。水与有机溶剂混合时，混合液变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。

2、做HPLC流动相的试剂应用HPLC级的、水应用二次蒸馏水，水相流动相需经常更换，防止长菌变质。使用去离子水、针剂水、纯净水（炊用）并不合适、尤其是做梯度洗脱时，水中的不纯物会成为鬼峰，从而干扰分析结果。

3、流动相的pH值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的。

4、用缓冲盐做流动相时，在使用前和使用后都要用水清洗流路，绝对禁止将缓冲溶液留在流路中静置或更长时间。

5、在更换两种互不相容的流动相时，中间要用异丙醇溶液清洗过渡。例如：先用甲醇水做流动相，然后再用正己烷做流动相时，一定要先用异丙醇溶液冲洗甲醇水，然后用正己烷冲洗异丙醇，反之也是一样。在更换流动相时还要考虑色谱柱是否更换。

E. 液相色谱的保留时间总是不稳定，该怎么解决

1、首先考虑是否有堵塞，查看各放溶剂瓶的过滤头是否有脏，脏了后清洗，玻璃的30%稀硝酸泡，不锈钢的可以超声处理。
2、purge阀打开，看看单通道5ml/min流速，用水压力多大，如果超过10bar就要更换purge阀的滤芯了，不过到5bar就比较脏了。
3、清洗下主动阀的滤芯。
4、如果这些都处理了，还是不行，那估计是比例阀的问题了。

压力不稳，出峰时间前后飘，觉得进气泡或者崩头污染的可能性比较大，用脱气过的异丙醇多冲一会试试。
有两种可能,一是流动相里有汽泡,二是检测器里残留有汽泡.
压力不稳这个就不正常，看是是不是有泄漏的地方，或者单向阀，比例阀有问题

纯水和甲醇确实会使保留时间不太稳定的原因是 脱气没有完全，气泡进入单向阀。所以引起了柱压不稳。导致的是基线不稳和流速变化。所以造成了Rt前后不一致。
我认为主要是气泡，用注射器吸满甲醇，拆开单向阀进，出螺母，从入口出打入甲醇，然后出口出会有气泡冒出。即可。

建议您可以到行业内专业的网站进行交流学习！
分析测试网络网乐意为你解答实验中碰到的各种问题，气相、液相、质谱、光谱、药物分析、化学分析、食品分析。这方面的专家比较多，基本上问题都能得到解答，有问题可去那提问，网址网络搜下就有。

F. 液相色谱仪每针的出峰时间一针比一针晚。今天做实验时，标品前四针出峰时间相同，后几针就开始以0.1秒

原因分析：
1.你的流动相中有三乙胺或二乙胺等扫尾剂,应控制扫尾剂的用量,不要过量,严格按照标准方法配制.
2.含有扫尾剂的流动相平衡时间本身就很长,不建议每天都清洗色谱系统,可以采用在不工作的时候将废液管接回流动相瓶中低流量连续平衡色谱系统,减少每次工作的流动相平衡时间.
3.环境温度的影响也较大,应当使用柱温箱.
4.如果使用的是视差折光检测器,不但要使用柱温箱,连室温也要控制,避免人员在实验室频繁走动导致的温度变化.
5.你的检测器是否有温度控制,如果有建议与色谱柱采用相同的温度.

G. 液相色谱出现杂质峰

你的意思是说，进样品溶液、纯水、甲醇、流动相都会出现保留时间1.8min，峰面积40的色谱峰？
如果这样的话只能推断是进样系统的问题。因为一般的色谱柱在1.8min位置应该是死体积。就算是溶剂峰也得在3min以后开始出峰才对。而空针没有这个色谱峰，代表你的色谱柱没有问题。
感觉可能是进样系统被污染了，或者是有气泡之类的东西，每次进样都会带入色谱柱。目前我只能这么猜测。你把色谱柱卸下来，然后装一个自动进样小瓶的异丙醇，连续进样，看看能不能把里面的脏东西带出来。

H. 高效液相图谱的倒峰的问题

应该是溶剂峰吧，甲醇在一些波长处可能出现倒峰。其实只要走一针溶剂就知道了。要保证溶剂比例和你溶样的时候是一样的哦！溶剂峰的可以扣除的，对结果影响不会很大，除非出现在主峰或其他重要组分附近。如果不是溶剂峰，还有可能是以下原因：1 信号线极性接反了或是参数设置成倒峰的；
2 走梯度走出来的；
3 氘灯老化，流通管道或池不通畅；
4 样品和流动相中含有小颗粒,气泡等；
5 参比波长设置的不合适，如果在出峰位置的另一化合物参比波长附近的某一范围内有吸收，那么就可能出现倒峰。LZ可以结合自己的实验情况加以分析。

I. 液相出峰

这根柱子可能坏了，填料塌陷。已经不能用了。如果你手上有备用柱子就换新柱子好了。可以用任何一个标准方法测定一下理论塔板数。比如下面的方法你可以试一下：
色谱条件：
流动相：乙腈-纯水（65：35）
流速：1.0ml/min
波长：254nm
样品：甲苯（用流动相稀释）

方法随便什么标准方法，这个样品随便什么标样都可以，我通常用甲苯。不过忘了稀释倍数了。500倍或1000倍？测定一下理论塔板数。一般这个条件的新柱子能在20000左右。如果你的理论塔板数低于5000，那么柱效就比较差了。

如果想挽救一下的话可以查阅一下色谱柱再生。简单的话就是把色谱柱倒过来。然后用0.3-0.4ml/min流速的乙腈或甲醇冲洗4小时以上。或许可以再用一段时间。