1. 用TE稀释质粒与用超纯水稀释有什么不一样的
正如楼上所说,来TE溶液有利于源保证核酸物质的稳定性,但我猜测你想知道其中的道理。我做补充如下:1)T(tris)是弱碱性,不容易导致核酸水解(DNA在酸性下更易自行水解);2)E(EDTA)可螯合DNA 水解酶的辅酶镁离子,抑制DNase活性,阻止DNA被酶解。但由于TE(主要是E)对一些 精密实验 比如酶切 甚至PCR 有负面影响(也作为酶的抑制剂),多使用很稀的TE 如0.1X 的TE作为buffer。
我们实验室做法:若很短时间就用掉的DNA溶液 就用纯水溶解直接做实验, 此时DNA没时间降解;若是长时间要保存的 就用10倍稀释的TE保存成浓的DNA溶液,用前稀释一下降低EDTA的影响。 供参考,祝顺利!
2. 新买的质粒小提盒子中,漂洗液中加的乙醇具体的作用是啥
用
无水乙醇
沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相
混溶
,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的
沉淀剂
。
DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。
3. 质粒在使用前需要用无核酶水稀释吗
只要是纯水就可以了,在无金属离子辅助下,DNA酶一般不起作用。
要没RNA酶,可能是为了之后的实验考虑吧。。。
4. 转染的时候质粒浓度太大用什么稀释
你好 请问一些你是用什么试剂盒提的质粒 用多少洗脱液洗脱的?我是大提质粒之后浓度总是很低,质粒浓缩效果也不理想
5. 转染质粒用什么稀释
规转染技术两类类瞬转染类稳定转染(永久转染)前者外源DNA/RNA整合宿主染色体宿主细胞存拷贝数产高水平表达通持续几用于启其调控元件析般说超螺旋质粒DNA转染效率较高转染24-72内(依赖于各种同构建)析结用些报告系统荧光蛋白β半乳糖苷酶等帮助检测者称稳定转染外源DNA既整合宿主染色体能作种游离体(episome)存尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低整合率高外源DNA整合染色体概率约1/104转染细胞能整合通需要通些选择性标记氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基)潮霉素B磷酸转移酶(HPH)胸苷激酶(TK)等反复筛选稳定转染同源细胞系
建议多看看书
别人的只能参考,没有意义
6. 用TE稀释质粒与用超纯水稀释有什么不一样的
和ddH2O相比,TE溶液有利于保证核酸物质的稳定性,便于长时间的保存。个人经验:TE配置不合格的话会影响下游的一些操作,一般都是直接用ddH2O。
7. 微生物培养可以用超纯水吗
微生物培养可以用超纯水,但不适合。
纯净水不适合用来培养微生物,因为微生物生存 需要生命必须物质, 纯净水指的是不含杂质的水,简称净水或纯水,是纯洁、干净,不含有杂质或细菌的水,如有机污染物、无机盐、任何添加剂和各类杂质,是以符合生活饮用水卫生标准的水为原水。
通过电渗析器法、离子交换器法、反渗透法、蒸馏法及其他适当的加工方法制得而成,密封于容器内,且不含任何添加物,无色透明,可直接饮用。
简介:
1、平板划线法。
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的菌落。
2、稀释涂布平板法。
将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落。
8. 合成的引物该怎么处理,用超纯水还是什么稀释
如果短期内不用,不开管-20度保存就行,开管了,用超纯水稀释就可以,一般按照说明书稀释就行,稀释后-20度保存,我用的-20度保存5年还能用,不过没评价效果降低到什么程度
9. pcr用超纯水
最好还是在冰上做啦,一次两次没有问题,久了多了可能问题就出来了
一般用的是灭菌的双蒸水
保证引物的终浓度就可以.都是用水稀释的,没啥差别
10. 我从国外要回的质粒,有谁知道下一步该怎么处理扩增啊请写具体一点,试剂都用多少,我还没做过实验呢。
这个时候一般是先制备感受态的大肠杆菌,一般是用CaCl2处理,现在也有商品化的感受态,一般菌株为DH5α。具体制备方法搜一下“感受态细胞制备”就有。
然后一般取50-100ng质粒加入100ul的感受态细胞里,进行热激处理,这个操作方法网上也有,一般是感受态细胞(-70°C取出才有这一步)冰上融化,加入质粒,42℃保温90s,冰上放置5min。
然后加入400ul LB培养基,37℃振荡培养0.5-1h(时间不要超过2h)。 取100ul培养液在固体培养基(LB固体培养基,一个平板里大概30ml)上进行涂布(培养基需带有质粒上相应的抗生素)。
培养12-24h后,可以挑单克隆(多挑几个),在5mlLB培养基中培养过夜(16h左右),留1ml保存菌种(方法具体自己查一下),其余的抽提质粒,5ml过夜培养液一般多拷贝质粒的话至少可以抽到10-20ug左右。
希望对你有帮助~都是自己实验过程中的经验~