㈠ 我溶解质粒DNA的时候,本来是想用1×TE buffer的,但是不小心加成10×的了
用于溶解DNA的TE缓冲液,大都是pH8.0之类的偏碱性。理由有:
1,DNA在碱性条件下容易溶解。
2,EDTA的存在可以抑制DNA酶的活性,防止DNA被意外污染的DNA酶分解。
㈡ 谁能介绍一下溶解质粒的TE溶液,
T代表Tirs(10mM),E代表EDTA(1mM).Tirs起着调节PH值和提供缓冲力的作用(实验应该是与HCl一起,PH调到8.0),让质粒(也包括核酸)有一个适合的PH值条件.而EDTA起着敖合金属离子的作用,让酶(如DNA酶)失去作用.从而更好的保护质粒不被降解.并且EDTA浓度为1mM,对下游的酶切,PCR等没有影响.
㈢ 质粒在使用前需要用无核酶水稀释吗
只要是纯水就可以了,在无金属离子辅助下,DNA酶一般不起作用。
要没RNA酶,可能是为了之后的实验考虑吧。。。
㈣ 大提质粒为什么质粒很难溶解在te中
大提质粒为什么质粒很难溶解在te中
手提的话,加入TE溶解的应该不是质粒,而是残余的变性蛋白质.问题不会出在TE,TE是水溶液,核酸是非常容易溶解的物质.顺便,小量质粒提取的话,纯度很好的质粒沉淀是肉眼不可见的,如果是明显的白色物质,就根本不是质粒而是蛋白质残余.你要确定你提取的有没有问题,你应该做两个实验,1是用分光光度计测A260/A280的比值,你这种情况蛋白质污染应该很多,这个值应该远小于1.8.2是做琼脂糖凝胶电泳.
㈤ 质粒和PCR已纯化为什么要用双蒸水溶解而不用能用TE
谁说的啊 我们就用TE溶的啊,克隆,酵母双杂交,转基因,瞬时表达等等都完全没有问题啊
㈥ 质粒或者胶回收试剂盒最后一步洗脱时用的是试剂盒自带的TE buffer还是去离子水
用Buffer吧,质粒在一定离子强度和pH值的条件下溶解度要大于去离子水。
㈦ 用TE稀释质粒与用超纯水稀释有什么不一样的
和ddH2O相比,TE溶液有利于保证核酸物质的稳定性,便于长时间的保存。个人经验:TE配置不合格的话会影响下游的一些操作,一般都是直接用ddH2O。
㈧ 我的质粒是融在TE里,然后-20度保存的,我拿出使用时,是放在冰上溶解,还是室温把它溶解就行。
一般的质粒还是比较稳定的,室温等冰化开后即可,如果着急也可以37度化开。一般不要在高温下放置太久,化开之后重新放回冰上待用。
㈨ 用TE稀释质粒与用超纯水稀释有什么不一样的
正如楼上所说,来TE溶液有利于源保证核酸物质的稳定性,但我猜测你想知道其中的道理。我做补充如下:1)T(tris)是弱碱性,不容易导致核酸水解(DNA在酸性下更易自行水解);2)E(EDTA)可螯合DNA 水解酶的辅酶镁离子,抑制DNase活性,阻止DNA被酶解。但由于TE(主要是E)对一些 精密实验 比如酶切 甚至PCR 有负面影响(也作为酶的抑制剂),多使用很稀的TE 如0.1X 的TE作为buffer。
我们实验室做法:若很短时间就用掉的DNA溶液 就用纯水溶解直接做实验, 此时DNA没时间降解;若是长时间要保存的 就用10倍稀释的TE保存成浓的DNA溶液,用前稀释一下降低EDTA的影响。 供参考,祝顺利!