盐对离子交换层析的影响

⑴ 建立离子交换法纯化蛋白质的方法需要摸索哪些条件

1. pH值，缓冲液的pH值对于蛋白结合离子交换层析有非常大的影响，需要先摸索出合适的版pH值，既能权保证蛋白结合上离子交换层析，又不会出现不稳定沉淀的情况。

2. 盐浓度，盐浓度是离子交换层析洗脱的关键，需要摸索出蛋白能在什么样的盐浓度下被洗脱，且洗脱后纯度能够达到最初的要求。

3. 柱体积，尽管各种离子交换层析均有理论结合蛋白量，但各种蛋白情况不一样，需要摸索出能够完全结合目的蛋白合适的柱体积。既不会太大造成洗脱浓度过稀，也不会太小造成目标蛋白过载。

4. 温度，温度可能会造成蛋白变性等等。

⑵ 在离子交换层析中刚开始盐梯度洗脱蛋白质就都被洗下来了，要怎么处理这个问题

可以调节流动相的ph值试试

⑶ 离子交换层析中，为什么用氯离子洗脱阴离子

离子交换层析中，为什么用氯离子洗脱阴离子
阴离子交换柱的填料是正电填专料,在低盐条件下可以属通过电荷相互作用吸附样品中的阴离子和负电荷物质（如DNA）.这些带负电的物质由于其带电量不同,分子大小不同,因而与正电填料之间的结合力也就不同.用梯度的氯离子（一般用氯化钠梯度,例如从100mM氯化钠线性梯度升高到1M氯化钠）洗脱挂柱样品时,氯离子会和结合上的物质竞争结合正电填料,伴随着氯离子浓度的不断升高,氯离子的竞争作用越来越强,与填料结合的物质会按照亲和力从弱到强依次洗脱下来,形成独立的洗脱峰,从而将这些物质分开.
阳离子交换柱与之正好相反,柱子填料为负电荷,用钠离子洗脱结合的正电物质.

⑷ 柱层析原理及影响因素

柱层析总的原理，就是让目标蛋白结合在层析填料（树脂）上，然后通过特定的缓冲液将其洗脱下来，以达到纯化的效果。具体几种分类稍微归纳了下给你参考
免疫亲和层析
原理：亲和色谱分离蛋白以一个蛋白与特异性配基配对到色谱基质上，且蛋白质与配基间具有可逆的相互作用作为基础。目标蛋白与配基之间的生物学相互作用，可以是由于静电学的相互作用或是分子间疏水的相互作用，也可以是范德华力或氢键结合力产生的。
影响因素：主要是亲和标签的完整程度，缓冲液的组分。
离子交换层析
原理：离子交换对分子的分离是基于它们表面净电荷的差异。以蛋白质为例，它由许多包含弱酸弱碱集团的不同氨基酸组成。它们表面的净电荷会随着周围环境的pH值改变而改变。对某一特定蛋白质来说，其表面净电荷与pH之间的相对关系是独特的，而离子交换层析正是利用了这一特点来完成对不同蛋白质的分离。
影响因素：主要是缓冲液的pH值，盐浓度。
疏水相互作用层析
原理：疏水层析根据蛋白表面疏水性的不同，利用蛋白质与疏水层析介质疏表面可逆的相互作用来分离蛋白。纯水状态下，任何疏水作用都太弱而不能导致配基与蛋白之间的相互作用。某些盐却可以增强疏水相互作用。高浓度的盐会增强相互作用，而低浓度的盐会降低相互作用。但是目前尚无被广泛接受的关于疏水相互作用层析机制的理论。
影响因素：环境温度，盐浓度。
凝胶过滤层析
凝胶过滤根据分子通过凝胶填料大小不同对其进行分离。以蛋白质为例，因为分子不与凝胶填料结合，故缓冲液成分不会直接影响分辨率。
影响因素：蛋白质分子量。

⑸ 请教离子交换层析与亲和层析方面的问题

亲和层析是通过层析介质表面键合的配基与目标物质特异性吸附，然后非目标物流穿，再改变流动相是目标物质的特异性吸附消失，从而达到纯化目的。凝胶层析是通过层析介质孔径的设定，使分子量大小相差比较大的物质通过的路径不一样，从而达到分离效果。离子交换是通过层析介质表面的带电荷的基团与目标之间产生吸附，通过改变盐浓度使吸附力的大小改变，从而使不同的物质解吸的速度不一样，达到分离的效果。离子交换又分阴离子交换和阳离子交换。一般来说以上三种，离子交换应用面最广，亲和特异性最好，体积排阻的话只能对分子量差距很明显的物质进行分离。

⑹ 电解饱和食盐水换成阴离子交换膜有何影响

电解饱和食盐水换成阴离子交换膜此时根本不会有氯离子能迁移过去的。

因为想要获得纯的NaOH最好的办法就是阴极不电解NaCl而是电解稀氢氧化钠，根本不会有氯离子能迁移过去的。氢氧根离子从阴极产生如果跨过膜之后会和阳极电解产生的氯气反应。

电解饱和食盐水实验注意：

在工业实际生产上，电解食盐水制取次氯酸钠溶液是很常见的方法，而且已经有行业标准，在家用电池电解食盐水确实可以制取少量含有次氯酸钠的溶液，能够有一定消毒作用。原理上是可行的，并且在实践上效果也尚可。

⑺ 离子交换色谱法的原理，装置及应用

原理：
离子交换色谱（ion exchange chromatography，IEC）以离子交换树脂作为固定相，树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时，组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换。根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。

装置：
（1）分离柱 装有离子交换树脂，如阳离子交换树脂、阴离子交换树脂或螯合离子交换树脂。为了减小扩散阻力，提高色谱分离效率，要使用均匀粒度的小球形树脂。最常用的阳离子交换树脂是在有机聚合物分子（如苯乙烯－二乙烯基苯共聚物）上连接磺酸基官能团（─SO3─）。最常用的阴离子交换剂是在有机聚合物分子上连接季铵官能团(─NH4)。这些都是常规高交换容量的离子交换树脂，由于它们的传质速度低，使柱效和分离速度都低。C.霍瓦特描述了一种薄膜阴离子交换树脂，它是在苯乙烯－二乙烯基苯共聚物核心上沉淀一薄层阴离子交换树脂，就象鸡蛋有一薄层外皮那样，离子交换反应只在外皮上进行,因此缩短了扩散的路径,所以离子交换速度高，传质快，提高了柱效。同样，在小颗粒多孔硅胶上涂一薄层离子交换材料也可得到相同类型的树脂。螯合离子交换树脂具有络合某些金属离子而同时排斥另一些金属离子的能力，因此这种树脂具有很高的选择性。除了离子交换柱外，其他高效液相色谱柱也可用于分离离子。
（2）抑制柱和柱后衍生作用 常用的检测器不仅能检测样品离子，而且也对移动相中的离子有响应，所以必须消除移动相离子的干扰。在离子色谱中，消除(抑制)移动相离子干扰的常用方法有两种。
①抑制反应，用抑制反应来改变移动相，使移动相离子不被检测器测出。离子色谱通常使用电导检测器。在抑制反应中??缍匝衾胱佣?裕?把高电导率移动相的氢氧化物转变成水,而样品离子则转变成它们相应的酸：
NaOH+H+─→Na++H2O
NaX+H+─→HX+Na+
在装有强酸性阳离子交换树脂的柱中进行抑制反应，使用一段时间后，这种树脂就需要再生，很不方便。改用连接有磺酸基(─SO3H)的离子交换膜(阳离子交换膜)或用连接有铵基(─NH4)的离子交换膜(阴离子交换膜)，就可以连续进行抑制反应。例如，阳离子交换膜可使阳离子通过它扩散过去，而阴离子则不能扩散过去。
1981年，T.S.史蒂文斯和斯莫尔等报道了中空纤维抑制法。这种纤维是由阳离子交换膜材料拉制而成。用这种方法不仅不需要再生抑制柱而且减小了峰的加宽，提高了柱效。一种比较新的膜技术是加一电场以加速离子的传递，该法与中空纤维法比较，其优点是反应时间短、交换能力高，并且可以用于阳离子和阴离子两者。
②柱后衍生作用，将从柱子流出的洗出液与对被测物有特效作用的试剂相混合，在一反应器中生成带色的络合物（见配位化合物）。对衍生试剂最重要的要求是它们与被测物能生成络合物，但不与移动相生成络合物。柱后衍生法能用于测定重金属离子，所用的衍生试剂有茜素红S等。
（3）检测器 分为通用型和专用型。通用型检测器对存在于检测池中的所有离子都有响应。离子色谱中最常用的电导检测器就是通用型的一种。紫外－可见分光光度计是专用型的检测器，对离子具有选择性响应。可变波长紫外检测器与电导检测器联用,能帮助鉴定未知峰,分辨重叠峰和提供电导检测器不能测定的阴离子，如硫化物及亚砷酸中的阴离子的检测。
在离子色谱中，电导检测法总是和抑制反应配合使用。这种检测器对分子不响应，如水、乙醇或者不离解的弱酸分子等。对于电导检测器，一个重要的条件是温度要稳定，所以检测池要放在恒温箱中，1982年H.萨托设计一种双示差电导检测器，消除了温度变化对检测的影响，可测定10-9摩尔的阴离子。

应用：
离子色谱主要用于测定各种离子的含量，特别适于测定水溶液中低浓度的阴离子，例如饮用水水质分析，高纯水的离子分析，矿泉水、雨水、各种废水和电厂水的分析，纸浆和漂白液的分析，食品分析，生物体液(尿和血等)中的离子测定，以及钢铁工业、环境保护等方面的应用。离子色谱能测定下列类型的离子：有机阴离子、碱金属、碱土金属、重金属、稀土离子和有机酸,以及胺和铵盐等。

⑻ 离子交换层析的原理是什么 已解决

离子交换层析法
是从复杂的混合物中，分离性质相似大分子的方法之一，依据的原理是物质的
酸碱性
，极性，所带阴阳离子的不同。电荷不同的物质，对管柱上的
离子交换剂
有不同的亲和力，改变冲洗液的
离子强度
和pH值，物质就能依次从
层析柱
中分离出来。
层析开始前，功能基团与
反离子
稳定结合，就与反离子发生可逆交换，与层析剂结合被固定下来。因为盐离子可以与底物竞争功能基团，盐浓度越高样品与层析剂结合越不紧密，易被洗脱下来。不同物质与层析剂结合程度不同，洗脱下来的时间不同，因此得以分开。
(8)盐对离子交换层析的影响扩展阅读
离子交换剂的选择首重保持欲分离物质的生物活性，以及在不同pH值环境中，此物质所带的电荷和电性强弱，阴
阳离子交换剂
的选择若被分离物质带
正电荷
，这些
碱性蛋白质
，它们在酸性溶液中较稳定，亲和力强，故采用阳离子交换剂。
在碱性溶液中较稳定，则使用
阴离子交换剂
，如果欲分离的物质是
两性离子
，一般考虑在它稳定的pH范围带有何种电荷，作为交换剂的选择。离子交换剂的再生与保存离子交换剂可在柱上再生，若有
脂溶性
物质则可用非离子型
去污剂
洗柱后再生，也可用乙醇洗涤。
参考资料来源；
网络
--离子交换层析

⑼ 疏水层析的经历

一般而言来，离子强度（源盐浓度）越高，物质所形成的疏水键越强。影响疏水作用的因素包括：盐浓度，温度，pH，表面活化剂和有机溶剂。疏水层析的应用与离子交换层析的应用刚好互补，因此，可以用于分离离子交换层析很难或不能分离的物质。
疏水层析其原理如下：蛋白质表面一般有疏水与亲水集团，疏水层析是利用蛋白质表面某一部分具有疏水性，与带有疏水性的载体在高盐浓度时结合。在洗脱时，将盐浓度逐渐降低，因其疏水性不同而逐个地先后被洗脱而纯化，可用于分离其它方法不易纯化的蛋白质。